G6PD的臨床生化化學(xué)檢測課件

1、G6PD的臨床生物化學(xué)檢測中國南寧 黃崇庭 2022/9/1目 錄一、G6PD與G6PD缺乏癥二、G6PD的發(fā)病機(jī)制三、G6PD的流行病學(xué)與遺傳規(guī)律四、G6PD臨床生物化學(xué)檢測五、華南常見G6PD試劑盒的概況 六、美康G6PD調(diào)試經(jīng)驗七、案例分享一、G6PD與G6PD缺乏癥1、什么是G6PD？ G6PD是葡萄糖6磷酸脫氫酶的簡稱，是一種存在于人體紅細(xì)胞內(nèi)，協(xié)助葡萄糖進(jìn)行新陳代謝的一種重要的酶類，在這代謝過程中會產(chǎn)生NADPH（還原型輔酶）的物質(zhì)能以保護(hù)紅細(xì)胞免受氧化物質(zhì)的威脅。 G6PD缺乏時，若身體接觸到具氧化性的特定物質(zhì)或服用了這類藥物，紅血球就容易被破壞而發(fā)生急性溶血反應(yīng)。G6PD 對于

2、磷酸戊糖旁路至關(guān)重要，而該途徑可為髓鞘脂酸形成提供 NADPH 。2、什么是G6PD缺乏癥？ G6PD缺乏癥是由G6PD基因突變，導(dǎo)致該酶活性降低，紅細(xì)胞因為缺乏NADPH而不能抵抗氧化損傷而遭受破壞，引起溶血性貧血的一種遺傳病。常因食用蠶豆而發(fā)病，俗稱“蠶豆病”。磷酸戊糖途經(jīng)G6PDG6P 6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)脂+NADPHG6PD谷胱甘肽還原型+氧化性物質(zhì) 谷胱甘肽氧化型 NADPH在紅細(xì)胞內(nèi)，谷胱甘肽還原型可以抵抗氧化性的物質(zhì)，在維持紅細(xì)胞的細(xì)胞膜穩(wěn)定方面起到重要作用，如果G6PD缺乏導(dǎo)致NADPH不足，谷胱甘肽的作用降低，從而使紅細(xì)胞模受損，在一定條件下容易產(chǎn)生紅細(xì)溶血，引起一些不良癥狀

3、。三、G6PD的流行病學(xué)與遺傳規(guī)律1、G6PD流行病學(xué) 據(jù)估計, 全球約有4億人受累, 我國華南及西南各省較常見, 主要分布在熱帶和亞熱帶, 我國的南方地區(qū)是高發(fā)區(qū),尤其是廣西、廣東、云南、福建等省, 北方地區(qū)較少見。我國各地發(fā)生率報道不一,上海為0.78%、長沙0.90%、南昌為1.20%、南寧為7.20%、昆明為2.50%。此病廣東地區(qū)平均發(fā)病率為5% 10%, 廣州市為3.70%、東莞3.20%、深圳2.30%, 中山發(fā)生率4.20%。2、G6PD的遺傳規(guī)律G6PD缺乏程度與性別的關(guān)系，G6PD缺乏是伴X不完全顯性遺傳,基因位于X染色體上。 缺失： 男性只有一條X染色體, 一旦這唯一的染

4、色體缺失G6PD基因, 則表現(xiàn)為G6PD重度缺乏, 而女性有兩條X染色體, 如果僅有1條X染色體缺失G6PD基因, 則為雜合子, 表現(xiàn)為中度缺乏, 只有兩條X染色體均缺G6PD基因才表現(xiàn)為重度缺乏。 基因突變：不同的基因突變類型，可以導(dǎo)致G6PD結(jié)構(gòu)不一樣，酶活性有差異，即使G6PD基因沒有缺失，也有可能存在不同程度缺乏。2、G6PD的檢測方法 2.1 比色法（生化儀）G6PD 活性校正值測定原理：紅細(xì)胞G6PD 催化G6P 生成6-磷酸葡萄糖內(nèi)脂，后者很快氧化成6-磷酸萄糖酸(6-PGA) ，同時NADP 被還原成NADPH 。在340 nm 處監(jiān)視NADPH 吸光度的升高，計算酶的活性。紅

5、細(xì)胞中還含有6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶( 6PGD)，催化6-PGA 脫羧，生成核酮體糖-5-磷酸，同時使輔酶NADP 還原成NADPH。在本測定系統(tǒng)中，由6-PGA和G6 P 組成的底物系統(tǒng)，測得的酶活性，減去單獨以6-PGA 為底物時測得的酶活性，代表真正G-6-PD 的活性。本法測定包含如下2 個反應(yīng)式:（1）G6P+ NADP+ 6PGA+NADPH+H+ (2) 6PGA+NADP+ R-5-P+NADPH+H+CO2 G6PD6-PGDG6PD活力計算： G6PD=(G6PD+6PGD )6PGD (U/L) G-6-PD , U/g Hb= G6PD/Hb意義：每克血紅蛋白中G6PD

6、的活性參考值： 健康成年人，紅細(xì)胞G6PD 活性(己校正6-PGD) 8.341.59 U/g Hb 紅細(xì)胞活6PGD性為6.8 - 12.0U/g Hb注意一：NADPH比值法或G6PD/6GPD法，在上面基礎(chǔ)上不采用兩個指標(biāo)相減，而是相除，原理是6GPD尚未報道在G6PD患者和正常人之間有差異，通過比值法篩查，一定程度上可以確認(rèn)女性雜合子，也就是G6PD基因缺陷攜帶者。此法受到一些試劑廠家和醫(yī)院青睞。其他方法：2.2高鐵血紅蛋白還原試驗:2.3免疫斑點雜交法：G6PD活性測定注意事項： 1、Mg2+是G6PD的激活劑，銅離子和鋅離子有輕度抑制作用，汞離子和對氯汞苯甲酸有完全抑制作用，因此日

7、常使用中盡量避免抑制劑的污染。 2、避免樣本溶血，樣本溶血后G6PD活性不穩(wěn)定，影響其活性測定。溶血后活性降低很快，25min內(nèi)需要及時測定。五、華南常見G6PD試劑盒概況 目前，市場常見的生化儀比色試劑盒分為兩種方法，一是G6PD直接測定法（速率法），直接測量G6PD活性，二是NADPH比值法，測定G6PD/6PGD。有的試劑盒提供血紅蛋白測定試劑，多數(shù)沒有提供血紅蛋白測試試劑。 G6PD直接測定法的廠家有： 寧波美康、北京利德曼、上海執(zhí)成、長春匯力、廣州科方 參考值：成人1300-3600U/L 兒童1700-4000U/L NADPH比值法的廠家有： 廣州科方、廣州米基 參考值：成人G6

8、PD/6PGD 1.0-2.3（0.95-1.05為可疑，建議復(fù)查） 新生兒（臍帶血、靜脈血）1.1-2.5（1.05-2.05為可疑，建議復(fù)查）不同廠家試劑盒比較1、底物方面：長春匯力說明書反應(yīng)底物為G6PDNa2外，其它廠家為G6P，但是實際上兩者是同一物質(zhì)的不同叫法。2、樣本類型：寧波美康、上海執(zhí)成、北京利德曼采用壓積紅細(xì)胞，長春匯力、廣州科方、廣州米基可以采用全血、臍帶血，長春匯力還可以采用末梢血。3、參考值方面： G6PD直接測定法一般為成人1300-3600U/L 兒童1700-4000U/L NADPH比值法成人G6PD/6PGD 1.0-2.3（0.95-1.05為可疑，建議復(fù)

9、查） 新生兒（臍帶血、靜脈血）1.1-2.5（1.05-2.05為可疑，建議復(fù)查）長春匯力與以上有所區(qū)別，具體如下：全血G6PD: 638-1980U/L 4.2-14.5U/gHb臍帶血或末梢血G6PD：832-2460U/L 4.9-14.5U/gHb血清G6PD：0-5U/L北京利德曼對參考值也規(guī)定的比較細(xì):EDTA抗凝血：1300U/L以上正常，600-1300U/L可疑，需要血紅蛋白校正。肝素抗凝血： 1100U/L以上正常，500-1100U/L可疑，需要血紅蛋白校正。每克血紅蛋白中G6PD活性： 3.8U/gHb4、G6PD活性校正：G6PD活性測定與血紅蛋白含量和紅細(xì)胞老幼有關(guān)，因此正確的做法是與血紅蛋白求比值來校正，長春匯力提供血紅蛋白試劑校正，其他均無此試劑。由于血紅蛋白測定有劇毒試劑以及占用通道和試劑，一般都不測定。G6PD/6PGD在篩查基因突變雜合子方面比較有優(yōu)勢，其他廠家沒有5、美康G6PD測定副波長為660nm，其他為4