7種中草藥醇提取物抑菌殺菌作用的研究

1、我國的中草藥資源非常豐富，我國勞動人民應(yīng)用中藥已有數(shù)千年的歷史，許多中草藥具有抗菌消炎的作用。該課題組在前期研究的根底上，挑選出地榆、蒼術(shù)、紫花地盯半枝蓮、大黃、枸骨、千里光等7種常見中草藥，用95%酒精提取其活性成分，選取大腸桿菌、枯草桿菌菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌等常見污染菌作為靶標菌，通過抑菌、殺菌試驗，檢測中草藥對靶標菌的作用效果，為開發(fā)綠色殺菌劑提供參考。1材料與方法1.1試驗材料1.1.1供試中草藥。地榆Radixsanguisrbae、蒼術(shù)Atratyldesrhize、紫花地丁Vilaeherba半枝蓮Prtulaagrandiflrahk、大黃Rheupalatu、枸骨Ile

2、xrnuta、千里光Seneisandens，以上7種中草藥均購置于咸寧市溫泉中藥店，烘干備用。1.1.2供試菌種。枯草桿菌Baillussubtilis、金黃色葡萄球菌Staphylusaureus、大腸桿菌Esherihiali、酵母菌Saharyeserevisiae，上述菌種均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)發(fā)酵工程室提供。1.2試驗儀器和試劑1.2.1試驗儀器。DH5000AB型電熱恒溫培養(yǎng)箱、SJ1D型單人超凈工作臺、YX280A手提式不銹鋼消毒器、J2菌落計數(shù)器、DH-101電熱恒溫本文由論文聯(lián)盟.Ll.搜集整理鼓風(fēng)枯燥箱、84型加熱磁力攪拌器、BD216榮事達冰箱。1.2.2試驗試劑。1l/LN

3、aH溶液、1l/LHl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。1.3試驗方法1.3.1菌懸液的配制。將大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌接種在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，37培養(yǎng)24h；酵母菌接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，28培養(yǎng)48h。將培養(yǎng)好的菌種，分別用接種環(huán)挑取少許菌體于裝有無菌水的試管內(nèi)，震蕩均勻，制成菌懸液。用平板菌落計數(shù)法測定其菌液濃度，并用稀釋法，使菌液含量數(shù)為104fu/l，即為供試菌液。1.3.2中草藥提取液的配制。將中草藥烘干、粉碎，分別用95%酒精1常溫下萃取4d2，將提取液離心后，減壓蒸餾溫度約為5052，將中草藥提取液中的酒精蒸

4、發(fā)。然后用蒸餾水定容到質(zhì)量濃度為1g/l，置于04冰箱中備用。1.3.3體外抑菌試驗測定3。將固體培養(yǎng)基加熱熔化，每20l固體培養(yǎng)基參加已裝有預(yù)定量中草藥提取液0.5、2.0l的無菌培養(yǎng)皿直徑為15中，再參加0.2l菌液稀釋后菌液濃度約為103個/l，用涂布器涂布均勻，每一處理重復(fù)3次，用無菌水作對照。上述操作均在超凈工作臺內(nèi)進展。將細菌培養(yǎng)皿倒置，置3637恒溫培養(yǎng)24h，將酵母菌培養(yǎng)皿置恒溫箱中28恒溫培養(yǎng)48h后統(tǒng)計菌落個數(shù)，計算抑菌率4。抑菌率=對照菌落數(shù)-處理菌落數(shù)/對照菌落數(shù)100%。1.3.4體外殺菌試驗測定。試驗時，菌懸液的濃度約為104fu/l。取0.5l菌懸液和4.5l提取

5、液于無菌小試管中混合均勻?qū)φ战M為無菌水，作用至預(yù)定時間5、15in后，取0.2l菌藥混合液接種到裝好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，用涂布器涂布均勻，每次操作重復(fù)3次。將做好的細菌平板倒置放入3637恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，將酵母菌培養(yǎng)皿置恒溫箱中28恒溫培養(yǎng)48h后統(tǒng)計菌落個數(shù)，統(tǒng)計菌落個數(shù)，計算殺菌率5。殺菌率=對照菌落數(shù)-處理菌落數(shù)/對照菌落數(shù)100%。2結(jié)果與分析2.17種中草藥酒精提取液的抑菌試驗由表1可見，7種中草藥的酒精提取液對4種菌有明顯的抑制效果。隨著藥物劑量的增大，對4種菌的抑制效果顯著增強。在藥物為2.0l時，中草藥對枯草桿菌的抑菌作用大小依次為大黃枸骨千里光蒼術(shù)紫花地丁半枝蓮地榆，

6、大黃抑菌率為99.4%，效果最好；中草藥對酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌才能最強，抑菌率為91.5%；中草藥對大腸桿菌的抑菌作用大小依次為地榆蒼術(shù)大黃半枝蓮紫花地丁千里光枸骨，地榆抑菌率最高，為97.2%；中草藥對金黃色葡萄球菌的抑菌作用大小依次為大黃地榆枸骨千里光蒼術(shù)半枝蓮紫花地丁，大黃抑菌率為88.3%，效果最好。綜合抑菌率看，7種中草藥提取液對酵母菌抑菌率均較高。抑菌試驗說明，同一中草藥對不同細菌的抑制作用亦存在著顯著差異，不同中草藥對同一種菌抑菌效果也不同。2.27種中草藥酒精提取液的殺菌試驗從表2可看出，7種中草藥95%酒精提取液對4種菌均有明顯的殺菌效果。在中草藥

7、質(zhì)量濃度為1g/l時，隨著殺菌時間的延長，殺菌率有顯著的進步。靶標菌與藥物作用15in后，中草藥對枯草桿菌的殺菌作用大小依次為大黃枸骨千里光紫花地丁蒼術(shù)半枝蓮地榆，大黃殺菌率為92.2%，效果最好；中草藥對酵母菌的殺菌率均在57.9%以上，千里光殺菌率最高，為90.7%；中草藥對大腸桿菌的殺菌顯著，殺菌率均在60.1%以上，大黃殺菌率最高，為94.3%；中草藥對金黃色葡萄球菌的殺菌最為顯著，殺菌率均在70.0%以上，大黃、地榆殺菌率為100%，效果最好。殺菌試驗說明，不同中草藥對同一種細菌的殺菌作用有顯著差異，同一中草藥對不同菌的殺菌作用亦存在著較大差異。3結(jié)論與討論3.1討論3.1.17種中

8、草藥的抑菌試驗。7種中草藥提取液抑菌率的上下與藥劑量有關(guān)，中草藥劑量越大抑菌率越高；藥物的抑菌效應(yīng)呈現(xiàn)劑量效應(yīng)；同一中草藥對不同菌的抑菌效果也存在著較大的差異，可能是藥物的成分對不同菌作用機理不同所致。不同中草藥種在一樣的濃度下對同一細菌的殺菌效果有明顯差異，其原因主要是因為不同中草藥所含的有效成分不同所致。目前對于中藥抑菌機制的研究報導(dǎo)很少，的中藥抑菌途徑主要在三方面：干擾微生物的酶系，破壞其正常的新陳代謝，抑制酶的活性；使微生物的蛋白質(zhì)疑固和變性，干擾其生存和繁殖；改變細胞膜的浸透性，使其體內(nèi)的酶類和代謝產(chǎn)物逸出導(dǎo)致其失活6。3.1.27種中草藥的殺菌試驗。同種中草藥在不同作用時間下對同種細菌的殺菌作用效果不同，這是因為作用時間越長，藥物中的有效成分對細菌的作用越充分，對菌的殺滅效果越好。不同中草藥種在一樣的濃度、一樣時間下對同一細菌的殺菌效果有明顯差異，其原因主要是因為不同中草藥所含的有效成分不同所致。同一中草藥對不同菌的殺菌效果也存在著較大的差異。可能是藥物的成分對不同菌作用機理不同所致。抑菌才能強的中草藥，其殺菌才能也強。中草藥提取液殺菌的作用機理方面的研究還處在探究階段7。中草藥所含的活性成分受生長地域、不同季節(jié)、植物不同部位、不同提取方