蛋白質(zhì)抗體芯片

1、蛋白質(zhì)抗體芯片蛋白質(zhì)抗體芯片第1頁蛋白質(zhì)芯片是指固定于支持介質(zhì)上蛋白質(zhì)組成微陣列。蛋白芯片技術(shù)基礎(chǔ)原理: 將各種蛋白質(zhì)有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上，然后，用標識了特定熒光蛋白質(zhì)或其它成份與芯片作用，經(jīng)漂將未能與芯片上蛋白質(zhì)互補結(jié)合成份洗去，再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術(shù)，測定芯片上各點熒光強度，經(jīng)過熒光強度分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用關(guān)系，由此到達測定各種蛋白質(zhì)功效目標。固定在芯片上蛋白能夠是：抗原、抗體、小肽、受體和配體、蛋白質(zhì)-DNA和蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物等。蛋 白 芯 片蛋白質(zhì)抗體芯片第2頁 分類： 蛋白功效芯片-天然蛋白點加在基片上，了解體 系中哪種蛋 白能與已

2、知某種蛋白結(jié)合，用于天 然蛋白活性及分子親和性研究。 蛋白檢測芯片- 將含有高度親和特異性探針 分子（如單克隆抗體）固定在基片上，用于識別復(fù) 雜生物樣品中目標蛋白/多肽。蛋白質(zhì)抗體芯片第3頁蛋白芯片較之傳統(tǒng)分析方法主要有以下優(yōu)點:(1)蛋白芯片上能夠?qū)崿F(xiàn)成千上萬個蛋白質(zhì)樣品高通 量平行分析, 一次試驗可提供大量數(shù)據(jù)-高通量;(2)有高信噪比，高準確性、高靈敏度;(3)所需樣品量極少-微量化;(4)在整個基因組和蛋白質(zhì)組水平將序列信息與 蛋白質(zhì)產(chǎn)物直接聯(lián)絡(luò)起來。(5)快速、微型化和自動化。 蛋白質(zhì)抗體芯片第4頁應(yīng)用：1.基因表示產(chǎn)物篩選德國Lueking2.病變細胞中分子標識蛋白研究 對病原微生

3、物檢測 Rowe 對腫瘤診療 Englert 3.分子相互作用研究： 抗原/抗體相互作用研究， 酶與底物相互作用研究， 、及小分子與蛋白質(zhì)相互作用研究 蛋白質(zhì)抗體芯片第5頁蛋白芯片平臺包含：芯片制造、處理、表面化學(xué)、檢 測試劑、掃描和分析該系統(tǒng)適合用于各種蛋白檢測，包含：多樣品微量免疫測定、蛋白質(zhì)-抗體、抗體-蛋白質(zhì)、抗體-抗原、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-藥品檢測。生物芯片技術(shù)關(guān)鍵是生物芯片制備及反應(yīng)信號檢測。蛋白質(zhì)芯片制作原理有各種,片基可采取尼龍膜、聚丙烯酰胺凝膠、玻片、硅片和金片等蛋白質(zhì)抗體芯片第6頁芯片制作系統(tǒng)蛋白質(zhì)抗體芯片第7頁芯片制作系統(tǒng)主體蛋白質(zhì)抗體芯片第8頁4針機械手從384孔板

4、中取樣蛋白質(zhì)抗體芯片第9頁48針機械手進行點樣（48針機械手能夠在6小時內(nèi)對50個含有1,000點樣點芯片進行點樣）蛋白質(zhì)抗體芯片第10頁針狀點樣槍頭：蛋白質(zhì)抗體芯片第11頁點樣針點樣示意圖蛋白質(zhì)抗體芯片第12頁操作控制板蛋白質(zhì)抗體芯片第13頁洗滌/干燥臺 蛋白質(zhì)抗體芯片第14頁信號檢測系統(tǒng)蛋白質(zhì)抗體芯片第15頁掃描軟件主操作界面蛋白質(zhì)抗體芯片第16頁抗體芯片抗體芯片稱謂起源于免疫學(xué)角度,因為其在微生物感染檢測中巨大潛在應(yīng)用價值而引發(fā)大家廣泛興趣,是蛋白質(zhì)芯片研究中進展速度較快一個分支?？贵w芯片：生物樣品蛋白表示抗體芯片完整系統(tǒng)作用是用于比較兩個生物樣品，檢測二者蛋白表示相對差異?？贵w芯片由數(shù)

5、百個按一定次序共價結(jié)合在載玻片上單克隆抗體組成。由細胞單克隆產(chǎn)生單一構(gòu)型蛋白，這些抗體能夠大量產(chǎn)生，而且對能夠在細胞表面發(fā)覺特定目標抗原含有特異親和力，這些抗原往往是惡性。蛋白質(zhì)抗體芯片第17頁抗體芯片優(yōu)點：1.能夠經(jīng)過同時比較數(shù)百種蛋白，使特定蛋白與咱們感 興趣生理和病理過程發(fā)生關(guān)系。2.使用單克隆抗體準確性高，敏感度高，專一性強。3.單克隆抗體使用時芯片制作只需知道其DNA序列。4.通用性?？贵w芯片應(yīng)用： 不一樣蛋白表示測定 ； 毒性檢測； 疾病研究，診療篩選； 癌癥研究； 藥品開發(fā)等。蛋白質(zhì)抗體芯片第18頁蛋白質(zhì)抗體芯片第19頁Ab Microarray 380(Cat.No.K1847

6、-1)-Clontech企業(yè)第一個商業(yè)化抗體芯片蛋白質(zhì)抗體芯片第20頁特點:* 整個分析過程能夠在一天內(nèi)完成* 用熒光分析方法比較兩個樣品之間378個蛋白質(zhì)相 對豐度* 適合用于包含組織、細胞系、體液在內(nèi)各種生物樣品* 試劑盒提供完整樣品抽提制備、標識、孵育所需 Buffer，尤其設(shè)計樣品制備過程能保持樣品完整 性和溶解性，確保制備樣品含有代表性和一致性。* 芯片上抗體包含針對信號傳導(dǎo)、癌癥、細胞周期調(diào)控、 細胞結(jié)構(gòu)、凋亡和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛生物功效相關(guān) 蛋白，跨度大、適用范圍廣。* 芯片上抗體分別經(jīng)過特異性抗原、細胞系和組織檢 測，靈敏度高達pg/ml* 開放性芯片平臺設(shè)計，能夠用各種型號DN

7、A芯片熒 光掃描儀進行檢測。 蛋白質(zhì)抗體芯片第21頁Ab Microarray 380上抗體，包括信號傳導(dǎo)、腫瘤發(fā)生、細胞周期調(diào)控、細胞結(jié)構(gòu)和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛領(lǐng)域，不但能夠識他人源蛋白而且對小鼠和大鼠樣品一樣有效。蛋白質(zhì)抗體芯片第22頁 抗原標識方法： 同位素標識 熒光標識 化學(xué)發(fā)光標識 熒光標識類型： A 直接熒光標識 B 半抗原標識 C 抗體夾心法標識蛋白質(zhì)抗體芯片第23頁 蛋白質(zhì)抗體芯片第24頁抗體芯片操作原理示意圖蛋白質(zhì)抗體芯片第25頁整個操作流程包含：1.從50200mg組織或細胞、體液中進行蛋白質(zhì)抽提；2.用Cy5和Cy3兩種不一樣顏色熒光分子分別標識兩個樣 品；3.洗去多出標識分

8、子；4.與芯片雜交孵育；5.掃描分析結(jié)果。整個過程從樣品制備到結(jié)果分析只要一天即可完成，操作者只要準備好樣品、熒光染料、脫鹽純化柱（處理體液樣品時用）和熒光掃描儀，其它試劑全部由試劑盒提供。 蛋白質(zhì)抗體芯片第26頁注意： 1.抗原抗體結(jié)合效率差異 2.不一樣熒光分子標識效率差異（Cy5 標識樣品信號偏高） 內(nèi)源標準化處理內(nèi)源標準化處理是指對兩個樣品（A、B）中分別用兩種熒光標識分子（Cy3和Cy5）標識，并交叉與芯片雜交（A-Cy5和B-Cy3一組,A-Cy3和B-Cy5一組分別和芯片雜交） 蛋白質(zhì)抗體芯片第27頁 蛋白質(zhì)抗體芯片第28頁 結(jié)果分析： 抗體芯片熒光掃描儀掃描軟件處理內(nèi)源 標準化信噪比（Internally Normalized Ratio ，INR） 原理： 芯片1 Ratio 1 = A-Cy5/B-Cy3 芯片2 Ratio 2 = B-Cy5/A-Cy3 INR 蛋白質(zhì)抗體芯片第29頁蛋白質(zhì)抗體芯片第30頁當INR值1, 說明某抗原在A樣品中量大于其在樣品B中量，當INR值 1, 說明某抗原在A樣品中量小于其在樣品B中量。盡管INR