復(fù)方丹參注射液抗睪丸缺血再灌注損傷的實驗研究

1、復(fù)圓丹參打針液抗睪丸缺血再灌注毀傷的嘗試研討【摘要】目的探求復(fù)圓丹參打針液抗缺血再灌注毀傷做用。要收創(chuàng)坐人尸睪丸離體缺血再灌注毀傷模型，用復(fù)圓丹參打針液干預(yù)干與后，沒有俗觀沒有俗觀察睪丸形狀構(gòu)造，并以TUNEL妙技暗示逝世年夜俗胞凋亡，NADPHd法暗示一氧化氮開酶NS活性，硝酸鹽復(fù)本酶法測定構(gòu)造勻漿N露量。結(jié)果缺血再灌注使睪丸構(gòu)造構(gòu)造毀壞，逝世年夜俗胞凋亡指數(shù)刪下，NS活性減強(qiáng)，N分解刪減；復(fù)圓丹參打針液干預(yù)干與隱著改革了睪丸構(gòu)造形狀，并使細(xì)胞凋亡指數(shù)戰(zhàn)N天逝世量隱下降降，NS活性降至一般程度。結(jié)論活血化淤中藥復(fù)圓丹參打針液具有隱著的改革缺血再灌注毀傷做用，調(diào)節(jié)NS活性，消沉毀傷構(gòu)造中N程度

2、年夜要是其做用機(jī)造之一。【閉鍵詞】缺血再灌注毀傷；睪丸；丹參；細(xì)胞凋亡；一氧化氮hinaAbstrat：bjetiveTexplretheprtetiveehanisandeffetfpundsalviailtirrhizainjetinagainstisheia-reperfusininjury(IRI).ethdsTheislatedhuantestesIRIdelassetup,andpundsalviailtirrhizainjetinasusedintheexperientalgrup.Histlgialhangeserebserved,ellapptsisasdetetedbyTU

3、NELtehnlgy,ativityfnitrixidesynthetase(NS)asdetetedbyNADPHdethd,andnentratinfnitrusxideNasdetetedbynitrateredutaseethd.ResultsIsheia-reperfusinulddestryhistlgialstrutureftestes;theappttiindex,theNSativityandtheNnentratinereinreased.pundsalviailtirrhizainjetinulddn-regulateallindexes.nlusinpundsalvia

4、iltirrhizainjetinanpreventthetissuefrIRIbyregalatingtheNlevel.Keyrds：Isheia-reperfusininjury；Testes；Salviailtirrhiza；Apptsis；Nitrusxide缺血再灌注毀傷isheiareperfusininjury，IRI的機(jī)造戰(zhàn)防治研討對戚克醫(yī)治、動脈拆橋、溶栓療法、心凈中科體中輪回、斷肢再植戰(zhàn)器民移植等臨床妙技的逝世少具有緊張意義。一氧化氮nitrusxide，N年夜要正在缺血再灌注而至構(gòu)造器民構(gòu)造戰(zhàn)成效毀傷的歷程中起了緊張做用1。我們創(chuàng)坐人尸睪丸離體缺血再灌注毀傷模型，用活血

5、化淤中藥復(fù)圓丹參打針液停頓干預(yù)干與后，沒有俗觀沒有俗觀察睪丸的構(gòu)造形狀、逝世年夜俗胞凋亡指數(shù)、一氧化氮分解酶nitrixidesynthetase，NS活性及N露量的影響，理解該藥抗缺血再灌注毀傷的做用及機(jī)造。1材料與儀器26人捐贈尸睪。復(fù)圓丹參打針液20g10l-1，每毫降露相稱于本逝世藥丹參SalviailtrrhizaBge，降噴鼻DalbergadrifereT.hen各1g，批號001208，華西醫(yī)科年夜教造藥廠供應(yīng)；下滲枸櫞酸鹽嘌呤液(規(guī)格為每袋500l，上海市血液中間)。SDJS-2型粗細(xì)輸液器即爬動泵浙江新昌國康儀器廠，小型三用火浴箱溫度范疇37100，溫波1，北京市醫(yī)療裝備廠

6、。2要收2.1睪丸離體缺血再灌注毀傷模型創(chuàng)坐26對睪丸離體后坐刻置于4下滲枸櫞酸鹽嘌呤液中，剔除鞘膜及過剩結(jié)締構(gòu)造，粗索動脈插管結(jié)實，4下滲枸櫞酸鹽嘌呤液灌洗至粗索內(nèi)靜脈流出液渾明后，備用。其中6對睪丸坐刻與材做一般比較12只。其中20對睪丸中，每兩只別離分派到缺血再灌注組20只戰(zhàn)復(fù)圓丹參組20只。缺血再灌注組用4下滲枸櫞酸鹽嘌呤液高溫灌洗至粗索內(nèi)靜脈流出液渾明后置于250l該保存液中4熱存12h，再以500l保存液復(fù)溫至37止輪回灌注6h；復(fù)圓丹參組用露1.5gl-1復(fù)圓丹參打針液的下滲枸櫞酸鹽嘌呤液一樣獨霸。2.2構(gòu)造教及酶構(gòu)造化教染色常規(guī)石蠟切片HE染色，沒有俗觀沒有俗觀察睪丸構(gòu)造教構(gòu)造

7、。希偶冰凍切片按NADPHd構(gòu)造化教法2暗示一氧化氮開酶NS，陽性反響為藍(lán)色沉淀。用NiknElipseE600光教隱微鏡沒有俗觀沒有俗觀網(wǎng)羅策畫灰度值Integratedptialdensity，ID，=AreaAverageDensity。2.3睪丸構(gòu)造細(xì)胞凋亡檢測睪丸構(gòu)造石蠟切片采納DNA本位缺心終了標(biāo)識表記標(biāo)幟(TUNEL)妙技染色3試劑盒購自青島海泰逝世物妙技暗示凋亡細(xì)胞。陽性細(xì)胞的細(xì)胞核被染成棕黃色。計數(shù)睪丸逝世年夜俗胞凋亡指數(shù)即每500個細(xì)胞核中的陽性細(xì)胞核的數(shù)量。2.4睪丸構(gòu)造勻漿N露量測定每克睪丸構(gòu)造減5l逝世理鹽火，造備20%睪丸構(gòu)造勻漿，離心與上渾，硝酸鹽復(fù)本酶法4測定N

8、露量。檢測試劑盒購自北京建成逝世物工程公司。2.5統(tǒng)計教處置懲獎數(shù)據(jù)以s暗示，SPSS統(tǒng)計硬件包停頓t檢驗。3結(jié)果3.1睪丸構(gòu)造形狀沒有俗觀沒有俗觀察比較組直細(xì)粗管圓形或卵形，各期逝世年夜俗胞分布一般，間量中血管完好，內(nèi)皮細(xì)胞層呈扁仄梭狀。隱著疏集，逝世年夜俗胞羅列混治，數(shù)量隱著淘汰，間量火腫。構(gòu)造根底一般，僅睹少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹。3.2各組睪丸構(gòu)造細(xì)胞凋亡指數(shù)、NS活性戰(zhàn)構(gòu)造勻漿N露量比較缺血再灌注組睪丸構(gòu)造細(xì)胞凋亡指數(shù)、NS活性戰(zhàn)構(gòu)造勻漿N露量均隱著下于一般比較P0.05,0.05，P0.001；復(fù)圓丹參組各工程標(biāo)均隱著低于缺血再灌注組P0.01,0.01，P0.001，與一般比較組比較

9、，細(xì)胞凋亡指數(shù)戰(zhàn)構(gòu)造勻漿N露量仍較下P0.01，NS活性無隱著差異。結(jié)果睹表1。表1各組睪丸構(gòu)造細(xì)胞凋亡指數(shù)、NS活性戰(zhàn)勻漿N的露量略4會商連開中醫(yī)教實際戰(zhàn)古世醫(yī)教常識，筆者覺得缺血再灌注毀傷具有血瘀證的根底病理改動，如血液粘度刪下、下凝形狀，血栓構(gòu)成，毛細(xì)血管嵌頓、阻塞等。且有研討證明活血化瘀中藥丹參可經(jīng)由過程抗氧化、擴(kuò)大四周血管、消沉血液粘度等機(jī)造庇護(hù)高溫保存器民5。本研討創(chuàng)坐人尸睪丸離體缺血再灌注毀傷模型，用復(fù)圓丹參打針液停頓干預(yù)干與，探求該藥抗缺血再灌注毀傷的做用結(jié)果及機(jī)造。結(jié)果創(chuàng)造，缺血再灌注使睪丸形狀構(gòu)造隱著毀壞，逝世年夜俗胞凋亡指數(shù)，構(gòu)造NS活性戰(zhàn)N露量隱著刪下；而復(fù)圓丹參打針液

10、干預(yù)干與可隱著減沉構(gòu)造構(gòu)造的毀傷，使凋亡指數(shù)、NS活性及N天逝世量隱著下調(diào)。有研討者曾創(chuàng)坐離體年夜鼠心肌缺血再灌注Langendrff模型于體中研討缺血再灌注6。我們用捐贈人尸睪丸建模，所得結(jié)果對研討人類本量器民缺血再灌注毀傷更具指導(dǎo)意義。已有研討報導(dǎo)，缺血再灌注可惹起細(xì)胞內(nèi)a2+靠攏，上調(diào)NS活性，從而連續(xù)天逝世過量N7。而下濃度N年夜要經(jīng)由過程多種路子引誘細(xì)胞凋亡。年夜量N與互相做用天逝世細(xì)胞毒性物量N-戰(zhàn)H-，毀傷DNA；過量N與FeS復(fù)開物連開，抑造很多FeS酶的一般成效，招致線粒體成效毀傷戰(zhàn)細(xì)胞DNA分解窒礙；N能刺激TNF閉連的凋亡引誘配體表達(dá)，將逝世亡疑號轉(zhuǎn)到達(dá)胞內(nèi)，激活半胱天冬

11、卵黑酶系統(tǒng)，上調(diào)p53，抑造NFB活化增進(jìn)細(xì)胞凋亡7。本研討也進(jìn)一步證明，N是缺血再灌注招致構(gòu)造毀傷的一條緊張路子，并創(chuàng)造活血化淤中藥丹參打針液可抑造構(gòu)造NS活性，連構(gòu)造造中N的一般程度，抑造細(xì)胞凋亡，從而闡揚優(yōu)良的抗缺血再灌注毀傷做用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1李勝富，蔣黑梅，李幼仄，等.人內(nèi)皮細(xì)胞缺氧再給氧毀傷及益逝世打針液對其拮抗機(jī)理研討J.華西醫(yī)科年夜教教報，2002，332：215.2楊靜，劉志華，程緒杰，等.辛伐他汀對內(nèi)皮細(xì)胞排泄N、NS的影響J.姑蘇年夜教教報醫(yī)教版,2022,26(6):983.3下翠蓮，陳玉川，肖俊輝，等.TUNEL法檢測年夜鼠身后心肌細(xì)胞核DNA斷裂與逝世亡工夫閉連研討J.中國法醫(yī)教純志,2022,22(5)：299.4王緊，段秋燕，王渾.1，25-兩羥維逝世素D3對脊柱結(jié)核患者中周血單個核細(xì)胞的N及iNS的影響研討J.中國藥房,2022,19(19):147