介導(dǎo)CTLA4Ig及IκBα重組腺病毒載體對(duì)燒傷創(chuàng)面皮片移植的影響

1、介導(dǎo)CTLA4Ig及IB重組腺病毒載體對(duì)燒傷創(chuàng)面皮片移植的影響摘要目的討論重組TLA4Ig及IB重組腺病毒載體延長(zhǎng)燒傷創(chuàng)面皮片移植存活情況。方法采用istar大鼠36只，隨機(jī)分為3組，1組:正常對(duì)照組，2組:用AdTLA4Ig液室溫浸泡轉(zhuǎn)染1h，3組:用AdvD40LIg-IRES2-TLA4Ig液室溫浸泡轉(zhuǎn)染1h。麻醉后常規(guī)背部備皮，在44面積上涂3%凝固汽油2l，燃燒20s，致大鼠背部皮膚度燒傷，于燒傷后第3天，將所制備1.02.0大小長(zhǎng)方形皮瓣移植于創(chuàng)面，加壓包扎。觀察重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染移植物后，在大鼠背部燒傷創(chuàng)面移植人斷層皮膚的存活情況的影響。結(jié)果重組腺病毒載體能延長(zhǎng)大鼠燒傷創(chuàng)面移植人

2、斷層皮膚的存活時(shí)間。結(jié)論重組腺病毒可用于延長(zhǎng)燒傷創(chuàng)面異基因移植皮膚的存活期。關(guān)鍵詞TLA4Ig;IB;腺病毒，重組;異體移植PrlngingthesurvivalftransplantedxenskinbytransfetedtheTLA4IgandIBlallyithrebinantadenvirusvetrinratsAbstrat:bjetiveTbservetheeffetfrebinantexpressinvetrfTLA4IgandIBnthesurvivaltiefxenskingraftnburnund.ethdsAttalf36istarratsestablishedasde

3、greeburnnthebakererandlydividedint3grupsn=12ineahgrup:nralntrlthexenskinithutanyspeialtreatent，AdTLA4IggrupthexenskinastransfetedithAdTLA4Ig，andAdvD40LIg-IRES2-TLA4IggrupthexenskinastransfetediththerebinantadenvirusexpressinvetrfTLA4IgandIBAdvD40LIg-IRES2-TLA4Igthatasnstrutedbyeansfhrebinatin.Aftert

4、hehuanskingraftseretransplantedttheburnedrats，thesurvivaltieandbipsyfgraftedskinserebserved.ResultsTherebinantadenvirusexpressinvetrfTLA4IgandIBuldpr-lngthesurvivaltiefthegraftedxenskinsnburnundsinrats.nlusinTherebinantAd-TLA4Ig-IRES2IBuldbeusedtpr-lngthesurvivaltiefthegraftedxenskinsnburnunds.Keyrd

5、s:TLA4Ig;IB;xenskin;survival燒傷治療的最終目的是及時(shí)有效地覆蓋封閉創(chuàng)面1。覆蓋封閉創(chuàng)面除自體皮膚外，異基因異體.異種移植皮膚是燒傷創(chuàng)面最正確覆蓋物，異體皮雖能暫時(shí)有效地覆蓋封閉創(chuàng)面，但在較短時(shí)間內(nèi)被排擠。T-LA4Ig是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4TLA4與IgGF段的基因重組交融蛋白，可阻斷抗原特異性T細(xì)胞活化過程起重要作用的B72D28共刺激通路，從而導(dǎo)致這類T細(xì)胞的無能或凋亡，對(duì)控制器官移植排擠反響的發(fā)生具有重要作用。本文討論重組TLA4Ig及IB重組腺病毒載體延長(zhǎng)燒傷創(chuàng)面皮片移植存活情況，為臨床及實(shí)驗(yàn)研究提供參考根據(jù)。1材料與方法1.1組腺病毒載體的制備重組

6、腺病毒載體的制備見參考文獻(xiàn)1，AdTLA4Ig由第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院燒傷研究所提供。1.2燒傷創(chuàng)面的制備采用istar大鼠36只，體重220250g，隨機(jī)分為3組，麻醉后常規(guī)背部備皮，在44面積上涂3%凝固汽油2l，燃燒20s，致大鼠背部皮膚III度燒傷經(jīng)病理檢查證實(shí)3。傷后腹腔注射生理鹽水抗休克。1.3供皮的制備取自無菌條件下自意外死亡安康人新穎尸體取厚約0.4斷層皮膚，用無菌生理鹽水沖洗后浸入含青、鏈霉素各200u.l抗菌素生理鹽水中備用，使用前用酒精漂洗皮膚三次，生理鹽水漂洗一次。1組:正常對(duì)照組，不做特殊處理。2組:用AdTLA4Ig液室溫浸泡轉(zhuǎn)染1h。3組:用AdvD40LIg-

7、IRES2-TLA4Ig液室溫浸泡轉(zhuǎn)染1h。用前將皮膚修成約1.02.0大小長(zhǎng)方形皮瓣。1.4燒傷創(chuàng)面異基因皮膚移植于燒傷后第3天，將大鼠再次麻醉，完全切除大鼠背部燒傷壞死變性組織，徹底止血、沖洗后，將所制備相應(yīng)大小的待移植皮膚縫植于創(chuàng)面，常規(guī)打包加壓包扎。1.5術(shù)后觀察指標(biāo)于術(shù)后第5天去除包扎的敷料后半暴露，開場(chǎng)每天從顏色、充盈、溫度、質(zhì)地等方面觀察記錄移植皮膚的存活情況，以壞死總面積90%定義為排擠反響。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理每組動(dòng)物的存活時(shí)間均用SPSS軟件處理，結(jié)果以xs表示，P0.05為相差顯著，并行ANVA單因素方差分析2結(jié)果由實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，重組腺病毒能明顯延長(zhǎng)大鼠燒

8、傷創(chuàng)面異基因皮膚移植后存活時(shí)間，與陰性對(duì)照組比擬有顯著差異，與TLA4Ig組比擬有顯著差異P0.05。表1重組腺病毒對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面皮片移植的影響略3討論如何及時(shí)有效地覆蓋封閉創(chuàng)面，重建或恢復(fù)皮膚屏障是燒傷治療的最終目的。除自體皮膚外，異基因異體.異種移植皮膚是燒傷創(chuàng)面最正確覆蓋物，異體皮雖能暫時(shí)有效地覆蓋封閉創(chuàng)面，但在較短時(shí)間內(nèi)被排擠，如能延長(zhǎng)異體皮在燒傷創(chuàng)面上的成活期，燒傷治療程度將得到極大進(jìn)步1-3。TLA4Ig是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4TLA4與IgGF段的基因重組交融蛋白，可阻斷抗原特異性T細(xì)胞活化過程起重要作用的B72D28共刺激通路，從而導(dǎo)致這類T細(xì)胞的無能或凋亡，對(duì)控制器官移

9、植排擠反響的發(fā)生具有重要作用，目前國內(nèi)用于誘導(dǎo)免疫耐受的基因治療多采取目的基因轉(zhuǎn)染腺病毒的方法，但這樣的方法用于體內(nèi)就存在一定的缺陷，問題在于腺病毒可以激活NF-B從而激活D成熟，誘導(dǎo)了對(duì)移植物的殺傷，利用IB有效的抑制NF-B的途徑可以大大的加強(qiáng)TLA4Ig基因誘導(dǎo)免疫耐受的效果，并對(duì)TLA4Ig在體內(nèi)的表達(dá)無明顯影響，因此二者在免疫耐受的誘導(dǎo)方面具有明顯的協(xié)同作用。目前尚無類似的文獻(xiàn)報(bào)道。燒傷的根本問題是創(chuàng)面問題，大面積深度燒傷創(chuàng)面和焦痂的存在造成了機(jī)體體液大量的喪失，而且是多種有害介質(zhì)釋放及導(dǎo)致全身侵襲性感染的滋生地，也是引發(fā)機(jī)體超高代謝及多種器官功能衰竭的重要原因3。因此，臨床上盡早切

10、痂后自體微粒+大張異體皮移植已成為當(dāng)今燒傷治療領(lǐng)域的成功經(jīng)歷，然而，異體皮膚由于免疫排擠反響而壞死脫落引發(fā)創(chuàng)面感染，從而嚴(yán)重影響了自體皮膚的進(jìn)一步生長(zhǎng)擴(kuò)展，使治療效果受到極大限制。而應(yīng)用免疫抑制劑雖能有效地減弱排擠反響的發(fā)生，延長(zhǎng)移植物存活，但極易誘發(fā)因燒傷后本身機(jī)體免疫功能低下的燒傷病人發(fā)生嚴(yán)重的全身感染4。研究說明，在免疫耐受中的抗原呈遞過程中，細(xì)胞之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是啟動(dòng)和維持免疫反響的關(guān)鍵。研究說明:體內(nèi)注射TLA4Ig阻斷B7.D28通路可以延長(zhǎng)皮片的存活期，減輕排擠反響的發(fā)生5，并在局部臨床實(shí)驗(yàn)中獲得了成功6。NF-B為機(jī)體基因轉(zhuǎn)錄過程中重要的轉(zhuǎn)錄激活因子，NF-B主要是與IB構(gòu)造形成

11、三聚體以無活性方式存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)細(xì)胞受到多種外界信號(hào)的刺激進(jìn)而啟動(dòng)第二信使系統(tǒng)，IB在IB激酶的作用下發(fā)生磷酸化并降解，NF-B被激活并移位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生一系列的基因轉(zhuǎn)錄，在腫瘤細(xì)胞凋亡，機(jī)體應(yīng)激，炎癥等方面都有重要作用。利用IB有效的抑制NF-B的途徑可以大大的加強(qiáng)T-LA4Ig基因誘導(dǎo)免疫耐受的效果，并對(duì)TLA4Ig在體內(nèi)的表達(dá)無明顯影響，因此二者在免疫耐受的誘導(dǎo)方面具有明顯的協(xié)同作用，重組腺病毒產(chǎn)生的蛋白可明顯抑制NF-B的活性，減少了相應(yīng)炎癥因子的表達(dá)，通過TLA4Ig-IRES2-IB雙基因治療增強(qiáng)對(duì)移植物的保護(hù)可以同時(shí)抑制這兩種因素，從而極大地促進(jìn)移植物的長(zhǎng)期存活。參考文獻(xiàn)1

12、李寧，袁育康，吳軍.人TLA4Ig，IB雙基因共表達(dá)腺病毒載體的構(gòu)建J.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，272:102-105.2易紹萱，吳軍.人TLA24胞外區(qū)DNA的克隆及Ig交融蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建J.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，229:834.3rakBP.FASptiizedutantsftheAequreavitriagreenflures-entprtEinJ.Gene，1992，1112:229-233.4halfie，TuY，EuskirhenG，etal.GreenfluresentprtEInasaark-erfrgeneexpressinJ.Siene，1994，2635148:802-805.5UhikshiF，YangZD，RstaiS，etal.Pre