XpertMTB-RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用價(jià)值

1、 XpertMTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用價(jià)值 孫菱郭桂英楊建科歐陽(yáng)慧王燕玲姚莉成莉【摘 要】目的：探討Xpert MTB/RIF檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌在結(jié)核感染診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：回顧分析2019年6月至8月我院151例臨床患者標(biāo)本，所有樣本均同時(shí)采用抗酸染色法、Xpert MTB/RIF試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：Xpert MTB/RIF檢測(cè)的總陽(yáng)性率明顯高于抗酸染色法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P前景。【Key】結(jié)核分枝桿菌;Xpert 結(jié)核分枝桿菌/利福平試驗(yàn);抗酸染色R52 【文獻(xiàn)識(shí)別碼】B 1002-8714（2019）11-0011-02【Abstract】Obj

2、ective：To investigate the clinical application value of Xpert Mycobacterium tuberculosis（MTB）/rifampicin（RIF）assay in the diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 151 patients were determined by XpertMTB/RIF assayand acid-fast stain，respectively. The results were compared.Results The positive r

3、ates of Xpert MTB/RIF assay for all types of samples were higher than those of acid-fast stain，and the difference is statistically significant（P【Key words】Mycobacterium tuberculosis;Xpert MTB/RIF assay;acid-fast stain我國(guó)一直是世界上結(jié)核疫情較嚴(yán)重的國(guó)家之一，目前用于診斷結(jié)核病的方法有抗酸桿菌染色和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，但在臨床使用的過(guò)程中，前者陽(yáng)性率低，后者周期長(zhǎng)，可能延誤診斷及治療

4、1。近幾年來(lái)，新的分子檢測(cè)方法Xpert MTB/RIF逐步發(fā)展，可在2h同時(shí)對(duì)MTB和RIF耐藥進(jìn)行檢測(cè)2。我們對(duì)Xpert MTB/RIF與抗酸染色法以及Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測(cè)情況進(jìn)行了比較，初步探討Xpert MTB/RIF技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 樣本來(lái)源收集樂(lè)山市人民醫(yī)院2019年6月至8月同時(shí)進(jìn)行了抗酸涂片檢查和Xpert MTB/RIF的151例患者樣本，樣本包括痰80例、支氣管肺泡灌洗液35例、胸水19例，以及腹水、腦脊液、尿、膿液等非呼吸道標(biāo)本17例。1.1.2 儀器和試劑抗酸桿菌染色液購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;Xpert MT

5、B/RIF 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó) Cepheid 公司。1.2 方法對(duì)所有標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行 Xpert MTB/RIF 檢測(cè)、抗酸染色法檢測(cè)。1.2.1 抗酸染色法 按照結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)進(jìn)行操作。1.2.2 Xpert MTB/RIF核酸擴(kuò)增檢測(cè)按試劑說(shuō)明書(shū)對(duì)各類標(biāo)本分別進(jìn)行前處理，然后渦旋振蕩15s，靜置15min，取2mL處理后的樣本加入反應(yīng)盒，然后將反應(yīng)盒放入檢測(cè)模塊，儀器開(kāi)始進(jìn)行自動(dòng)化檢測(cè)。反應(yīng)結(jié)束后對(duì)MTB及RIF結(jié)果進(jìn)行判讀。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，抗酸染色和Xpert MTB/RIF陽(yáng)性率的比較采用McNemar檢驗(yàn);三種不同樣本陽(yáng)性率

6、之間的比較采用Pearson檢驗(yàn)，以P灌洗液40.0%（14/35）胸水5.2%（1/19）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=16.58，P=0.00）。3 討論結(jié)核感染是目前世界公共衛(wèi)生面臨的最為嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)之一。目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院對(duì)結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)還是依賴于抗酸染色涂片鏡檢，鏡檢方法簡(jiǎn)單快速，但是靈敏度不高，容易導(dǎo)致漏診。培養(yǎng)方法分離出結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，但結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別要求高，在國(guó)內(nèi)大多醫(yī)院還未開(kāi)展，且培養(yǎng)周期長(zhǎng)不利于結(jié)核病的早期診斷。XpertMTB/RIF是一種能在2小時(shí)內(nèi)完成結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性快速檢測(cè)的方法。Xpert MTB/RI

7、F為全自動(dòng)一體化熒光定量PCR儀，其最低檢測(cè)限值低于TB-DNA，且手工時(shí)間僅需約20min。這種新型的診斷方法是由美國(guó)Cepheid公司開(kāi)發(fā)的，Xpert MTB/RIF 基于全自動(dòng)半巢式實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 原理，將樣本的準(zhǔn)備、擴(kuò)增、檢測(cè)集于一體，對(duì)結(jié)核分枝桿菌特有的序列rpo B基因進(jìn)行檢測(cè)。Xpert MTB/RIF 有5條分子信標(biāo)探針，覆蓋目標(biāo)基因，第6條探針用于質(zhì)量控制。與傳統(tǒng)的結(jié)核檢測(cè)方法相比，XpertMTB/RIF更加簡(jiǎn)便、快捷、安全、準(zhǔn)確，其對(duì)硬件設(shè)備和人員的要求比較低，成本也在可接受的范圍內(nèi)，且在診斷結(jié)核分枝桿菌感染的同時(shí)對(duì)利福平耐藥一并進(jìn)行了檢測(cè)，在結(jié)核病診治中具有非常

8、重要的作用。本研究通過(guò)比較Xpert MTB/RIF與痰涂片抗酸染色鏡檢的陽(yáng)性率，初步探討其在診斷結(jié)核感染方面的價(jià)值，結(jié)果表明，其陽(yáng)性率明顯高于痰涂片抗酸染色鏡檢法，提示可以通過(guò) Xpert MTB/RIF聯(lián)合痰涂片抗酸染色鏡提高診斷結(jié)核感染的敏感度，降低漏檢率。另外，通過(guò)比較Xpert MTB/RIF檢測(cè)不同標(biāo)本陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)其診斷價(jià)值受到標(biāo)本類型的影響。但由于本次研究采用的標(biāo)本量較少，結(jié)果存在一定局限性，接下來(lái)應(yīng)收集更多標(biāo)本以彌補(bǔ)此不足，且增加培養(yǎng)結(jié)果。總之Gene Xpert系統(tǒng)具有簡(jiǎn)便快速、安全、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，XpertMTB/RIF在結(jié)核病診斷以及利福平耐藥檢測(cè)等方面必將具有廣闊的應(yīng)

9、用前景。Reference1 Bates M，Ogrady J，Maeurer M，et al. Assessment of the xpert MTB / RIF assay for diagnosis of tuberculosis with gastric lavage as-pirates in children in sub-Saharan Africa：a prospective descriptive studyJ.Lancet Infect Dis，2013，13（1） ： 36-42.2 Lawn SD，Nicol MP.Xpert MTB/ RIF assay： development，evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistanceJ.Future Microbiol，2011，6（9）：1067-1082.健康