實(shí)驗(yàn)動物的設(shè)施與環(huán)境

1、實(shí)驗(yàn)動物的環(huán)境與設(shè)施1主要內(nèi)容環(huán)境因素對實(shí)驗(yàn)動物的影響實(shí)驗(yàn)動物的生物學(xué)分類常規(guī)實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施分類、使用和管理同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心簡介同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心崗前培訓(xùn)2引言3小樣！你們想拿我干什么？4設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的基本原則1：對照原則2：隨機(jī)化原則3：條件一致性原則4：重復(fù)性原則？56樹鼩適宜溫度：2528適宜濕度：60以上7EnvironmentRoomCage8實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施對環(huán)境控制的意義1. 保證實(shí)驗(yàn)動物健康和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化2. 保障實(shí)驗(yàn)研究獲得正確結(jié)果3. 為動物實(shí)驗(yàn)工作者提供適宜的工作環(huán)境，避免傷害，確保研究的順利進(jìn)行 9第一節(jié)環(huán)境因素對實(shí)驗(yàn)動物的影響10 動物對實(shí)驗(yàn)處理的反應(yīng)：R=(A+B+C)D

2、+ER實(shí)驗(yàn)動物的總反應(yīng)（實(shí)驗(yàn)結(jié)果）；A動物種的共同反應(yīng)；B品種及品系特有的反應(yīng)；C個(gè)體反應(yīng)（個(gè)體差異）；D環(huán)境影響；E實(shí)驗(yàn)誤差。 環(huán)境因素與動物的總反應(yīng)呈正相關(guān)，要盡量減少D的變化，排除實(shí)驗(yàn)處理以外的影響。11環(huán)境因素對實(shí)驗(yàn)動物的影響R=（A+B+C） D EA+B+C 實(shí)驗(yàn)動物本身的反應(yīng)，遺傳因素起決定性作用。D 動物生活環(huán)境影響和實(shí)驗(yàn)處理影響的綜合作用。 12第二節(jié) 影響實(shí)驗(yàn)動物的自然環(huán)境因素 13影響實(shí)驗(yàn)動物的自然環(huán)境因素 1 環(huán)境溫度2 相對濕度3 光照4 噪聲5 空氣潔凈度6 通風(fēng)7 人為因素 142.1 環(huán)境溫度需控制的最關(guān)鍵的環(huán)境參數(shù)高溫比低溫的問題更嚴(yán)重與推薦范圍的重大偏離是首

3、要問題日溫差315溫度對實(shí)驗(yàn)動物的影響：1：新陳代謝：低溫時(shí)新陳代謝增加，攝食增加2：散熱：除靈長類，其他動物汗腺不發(fā)達(dá)或無汗 腺，高溫時(shí)散熱困難，難以維持體溫恒定3：臟器重量：負(fù)相關(guān)4：生殖：高溫時(shí)雄性睪丸萎縮，精子活力下降；雌性動物性周期紊亂，泌乳下降。 16 喜馬拉雅（Himalaya）兔在20環(huán)境下飼養(yǎng)時(shí)，耳、尾、鼻和四肢尖端生長白毛，而飼養(yǎng)在10時(shí)，則生長黑毛。 小鼠在21環(huán)境下每年能繁殖3代，而在13下僅能繁殖2代。 （性周期）17氣溫與體溫的關(guān)系適宜溫區(qū)生理調(diào)節(jié)生理調(diào)節(jié)物理調(diào)節(jié)化學(xué)調(diào)節(jié)高體溫低體溫T臨界10（小鼠為例）T臨界：26小鼠為例）冷死熱死舒適區(qū)等熱區(qū)體溫恒定區(qū)生存區(qū) 1

4、8 幾種實(shí)驗(yàn)動物的體溫和舒適區(qū)溫度動物種類 體溫 舒適區(qū)溫度 小鼠 37-39 20-24 大鼠38.5-39.5 20-24 豚鼠38.2-38.9 18-22 兔37-39 16-23 犬38-39 17-20 獼猴36-39 18-25 豬38-40 18-25 192.2 相對濕度絕對濕度a：某溫度下，樣品空氣中的水蒸氣的實(shí)際含量飽和濕度b：某溫度下，樣品空氣中所能容納的水蒸氣的最大值相對濕度c：某溫度下，樣品的絕對濕度與該溫度下的飽和濕度的比值（和樣品多少無關(guān)，能夠客觀衡量濕度的大小）c=（a/b）100空氣中的含水量和溫度有關(guān)，溫度越高，能容納的水蒸氣也越多推薦濕度：407020相

5、對濕度- 偏高微生物易于繁殖飼料、墊料易于霉變動物易發(fā)生傳染病 21相對濕度- 偏低使動物皮膚和黏膜發(fā)生干裂使室內(nèi)灰塵飛揚(yáng)，易引起動物的呼吸道疾病相對濕度低于20%時(shí)，大鼠容易發(fā)生 環(huán)尾癥 22Ringtail 23大鼠不耐低濕度，如濕度低于20%，容易發(fā)生一種表現(xiàn)為尾根部壞死的環(huán)尾癥（ring-tail），死亡率甚高。 242.3 光照光照對哺乳動物生物鐘具有重要作用，光照的晝夜交替使動物體的一些活動，如血壓、激素水平、體溫、神經(jīng)活動等都變成了一種節(jié)律。25 光周期光周期的控制對嚙齒類動物至關(guān)重要動物設(shè)施內(nèi)的光周期： 12小時(shí)（明）/12小時(shí)（暗） 14小時(shí)（明）/10小時(shí)（暗） 一般都會有

6、手動操作的定時(shí)器 26 持續(xù)光照可使生殖系統(tǒng)過度興奮，造成連續(xù)發(fā)情。還可性成熟年齡提早。 27光強(qiáng)度隨距離光源的距離增大而遞減高強(qiáng)度會引起白化鼠的視網(wǎng)膜病變工作照度150300lx動物照度1520lx（小鼠）282.4 噪聲引起動物聽力性痙攣。60db對生殖影響較大，如豚鼠流產(chǎn)。引起動物呼吸、心跳、血壓、腎上腺皮質(zhì)激素等生理指標(biāo)變化。心跳、呼吸次數(shù)及血壓增加，大鼠出現(xiàn)高血壓、心臟肥大29噪聲對實(shí)驗(yàn)動物生殖生理具有嚴(yán)重不良影響噪聲對實(shí)驗(yàn)動物的生殖生理具有嚴(yán)重不良影響?？墒箲言袆游锏娜焉镞^程中斷；或使大鼠和小鼠雄雌雙方的生育力都減退。 302.5 空氣潔凈度 塵埃：是各種生物粒子的載體，這些生物粒

7、子可附著在120m的塵埃上飄浮在空中 生物粒子：包括病毒、細(xì)菌、芽孢、粉螨、霉菌孢子等 清潔級以上的動物設(shè)施，都采用3層過濾器過濾后的空氣。31空氣過濾器 初效過濾器：阻擋5微米直徑以上的顆粒物。 中效過濾器：阻擋15微米直徑的細(xì)顆粒物， 過濾效率85以上 高效過濾器：99.7阻擋0.3微米直徑以上的細(xì)顆粒物。此為醫(yī)學(xué)級空氣（1.12億個(gè)0.3微米的微粒大小等同于鉛筆尖）32氨濃度動物室中的臭氣物質(zhì)，對人和動物具有衛(wèi)生學(xué)意義的是含氮物質(zhì)分解產(chǎn)生的氨。 在衛(wèi)生管理方面，以氨的含量作為指標(biāo)。高濃度的氨（200mg/m）可引起呼吸器官黏膜異常，發(fā)生流淚、咳嗽黏膜發(fā)炎、肺水腫和肺炎。SPF動物房氨濃度

8、 14mg/m3 332.6 通風(fēng)我們想通過通風(fēng)系統(tǒng)達(dá)到什么目的？可作用于動物體表皮膚的蒸發(fā)和對流散熱，氣流速度和 散熱正相關(guān)?？烧{(diào)節(jié)室內(nèi)溫度和濕度，又可降低室內(nèi)粉塵和有害氣體污染，控制傳染病的流行。氣流布局模式 - 水平層流式 - 垂直層流式 - 亂流式 34水平層流模式圖送風(fēng)墻回風(fēng)墻 35垂直層流模式圖天花板送風(fēng)地面回風(fēng) 36亂流式模式圖 送風(fēng)口回風(fēng)口回風(fēng)口回風(fēng)口 37亂流式飼養(yǎng)室 38影像資料39換氣次數(shù)，潔凈程度越高，要求換氣次數(shù)越多。 屏障環(huán)境：1020次/h 隔離環(huán)境： 2050次/h.壓強(qiáng)梯度：潔凈區(qū)高于污染區(qū)。飼養(yǎng)間60pa走廊40pa緩沖間20pa清洗區(qū)合理組織氣流和風(fēng)速可調(diào)

9、節(jié)室內(nèi)溫度和濕度，又可降低室內(nèi)粉塵和有害氣體污染，控制傳染病的流行。 通風(fēng)系統(tǒng)中的兩個(gè)重要參數(shù)402.7 人為因素居住條件飼養(yǎng)技術(shù)工作人員的操作規(guī)范實(shí)驗(yàn)人員操作的管理4142溫度2024換氣次數(shù)1020次/h日溫差：3氣流速度0.10.2m/s相對濕度4070壓差強(qiáng)度2060pa噪聲60dB落下細(xì)菌數(shù)3個(gè)/皿氨濃度14mg/m動物照度1530lx工作照度150300lx空氣凈化等級萬級晝夜明暗交替時(shí)間12/2或10/14小時(shí)2.8動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施環(huán)境指標(biāo)（以屏障系統(tǒng)小鼠為例）43第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)動物微生物學(xué)等級分類無菌級SPF級（無特定病原體級）清潔級普通級44常用實(shí)驗(yàn)動物微生物學(xué)等級分類無菌級SPF

10、級清潔級無菌級SPF級清潔級普通級小鼠大鼠豚鼠兔45犬猴SPF級清潔級普通級豬463.1無菌動物與悉生動物無菌動物（Germ free animal；Gf anmial）:指通過無菌剖宮產(chǎn)手術(shù)或無菌胚胎移植進(jìn)行無菌化獲得的動物，第一代通過人工哺乳成長，利用無菌飼養(yǎng)方法維持于無菌隔離器，利用現(xiàn)有發(fā)放檢測不到活的微生物或寄生蟲的動物。悉生動物（Gnotobiotic animal；GN animal)：源于gf動物，在絕對屏障系統(tǒng)內(nèi)飼育，只能從動物體內(nèi)外檢測到已知生物體的動物。47飼養(yǎng)隔離器48SPF級動物即無特定病原體動物（指動物體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲）是不攜帶潛在感染或條件致病菌，但帶有非

11、特定的微生物和寄生蟲的動物，要求在屏障系統(tǒng)內(nèi)生長，國際上普遍采用的動物。3.2無特定病原體級動物（Specific Pathogen Free)49 無特定病原體動物的飼育通常是:先培育出無菌動物或悉生動物;然后,再將其后代轉(zhuǎn)移到屏障系統(tǒng)設(shè)施內(nèi)飼育繁殖建群。若屏障系統(tǒng)內(nèi)有應(yīng)排除的微生物或寄生蟲污染動物,則須重新消毒或重建。503.3清潔級動物（clean animal;CL animal）亦稱最少疾病動物Minimal Disease animal。必須是不攜帶主要人獸共患病原體和動物烈性傳染病的病原體，又不攜帶對動物危害大和對科學(xué)研究干擾大的病原體。51清潔動物通常來自SPF動物的后代或降級

12、；飼育在屏障系統(tǒng)設(shè)施中；飼育所用的墊料，飼料，飲水和用具等均應(yīng)經(jīng)過高壓蒸汽消毒。 工作人員需穿無菌服裝才能進(jìn)行飼育或?qū)嶒?yàn)操作。523.4普通級動物（ conventional animal;CV animal） 在開放系統(tǒng)的動物室內(nèi)飼養(yǎng)，空氣未經(jīng)過凈化，動物本身所攜帶的微生物狀況不明確。要求不攜帶主要人獸共患病和動物烈性傳染病病原的動物。53飼育在開放環(huán)境里,使用的墊料和飼料,只消毒不滅菌;其飲水須符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)。普通動物只能用于教學(xué)實(shí)驗(yàn)和某些科研工作的預(yù)實(shí)驗(yàn)。 54無菌操作及SPF環(huán)境設(shè)施影片55第四節(jié) 常規(guī)實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施分類實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施根據(jù)對飼養(yǎng)動物的空氣凈化程度分為三類。開放系統(tǒng)(op

13、en system)屏障系統(tǒng)(barrier system)隔離系統(tǒng)(isolation system)564.1 開放系統(tǒng)普通環(huán)境定義：符合動物基本居住要求，但在硬件設(shè)施上不能完全控制傳染因子。溫濕度、塵埃等受外界環(huán)境影響?？諝鈨艋粺o空氣凈化適用：飼育普通級動物NOVEMBER, 200757開放系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室NOVEMBER, 20075859604.2 屏障系統(tǒng)屏障環(huán)境定義：通過嚴(yán)格控制人員、物品和環(huán)境空氣的進(jìn)出，形成控制微生物進(jìn)入的屏障空氣凈化:空氣進(jìn)出經(jīng)高效過濾，空氣凈化等級達(dá)到萬級適用：飼育SPF級動物和清潔級動物NOVEMBER, 200761屏障系統(tǒng)照片NOVEMBER, 200

14、76263定義：采用無菌隔離裝置以保證與外界環(huán)境的絕對隔離空氣凈化：空氣進(jìn)出經(jīng)超高效過濾，空氣凈化等級達(dá)到百級適用：飼育無特定病原體動物，無菌動物和已知菌動物（悉生動物）4.3 隔離系統(tǒng)隔離環(huán)境 64隔 離 系 統(tǒng) 照 片6566貯存室和庫房洗刷消毒室工作人員用房走廊后勤用房廢物處理設(shè)施飼料原料倉庫和飼料加工室第五節(jié) 常規(guī)實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施組成與布局常規(guī)實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施的組成1. 隔離檢疫室和健康動物觀察室2. 飼養(yǎng)室3. 各種實(shí)驗(yàn)室4. 輔助區(qū)域NOVEMBER, 200767實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施布局原則有利于防止疾病的傳播、各種動物保持各自的獨(dú)立性，避免相互干擾相互感染方便工作人員操作能夠使人員、動物、其他

15、物品和凈化空氣盡可能的按“單向”路線移動NOVEMBER, 200768內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室女二更女一更男一更男二更緩沖緩沖高壓滅菌鍋傳遞窗清洗間風(fēng)淋飼養(yǎng)室屏障系統(tǒng)人流走向圖69一樓SPF大鼠實(shí)驗(yàn)室動物流走向圖內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室女一更女二更男一更男二更緩沖緩沖風(fēng)淋高壓滅菌鍋傳遞窗清洗間屏障系統(tǒng)物流走向圖70內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室高壓滅菌鍋緩沖緩沖女一更女二更男一更男二更風(fēng)淋傳遞窗清洗間屏障系統(tǒng)動物流走向圖71實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施內(nèi)所有數(shù)據(jù)的監(jiān)控監(jiān)控

16、內(nèi)容 溫度 濕度 壓差 人員進(jìn)出情況 設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)情況72關(guān)鍵服務(wù)的連續(xù)性應(yīng)急電源 -充足的發(fā)電機(jī)容量，足以維持基本的環(huán)境控制以及關(guān)鍵的研究設(shè)備（如樣品冰柜、組織培養(yǎng)箱等） -自動轉(zhuǎn)換及根據(jù)負(fù)載定期測試 -應(yīng)考慮將幾個(gè)機(jī)組的負(fù)載通過交叉來分流，以防單個(gè)機(jī)組故障73關(guān)鍵服務(wù)的連續(xù)性應(yīng)考慮為以下提供后背供水 -動物飲用水 -冷卻塔運(yùn)行儲存至少14天的飼料和墊料供給74第六節(jié) 動物設(shè)施的日常管理1：人員的走向2：物品的走向3：動物的走向4：動物尸體的處理756.1 動物設(shè)施內(nèi)人員的走向屏障系統(tǒng)中人的移動路線(雙走廊或三走廊式)人員入口（脫衣） 一更（清潔） 二更（穿衣） 風(fēng)淋室（風(fēng)淋） 清潔走廊 飼養(yǎng)室

17、或動物實(shí)驗(yàn)室（實(shí)驗(yàn)） 清潔走廊 人員出口 更衣 外部區(qū)域NOVEMBER, 200776一更衣衣柜二更入口鞋柜NOVEMBER, 200777二更衣通向一更通向風(fēng)淋通向內(nèi)準(zhǔn)備室NOVEMBER, 200778風(fēng)淋 NOVEMBER, 200779清潔走廊通向?qū)嶒?yàn)室NOVEMBER, 200780實(shí)驗(yàn)室入口 壓差計(jì)NOVEMBER, 200781實(shí)驗(yàn)室內(nèi) NOVEMBER, 200782清潔走廊人員出口NOVEMBER, 2007836.2 動物設(shè)施內(nèi)物品的走向清潔準(zhǔn)備室 清潔物品儲存室 清潔走廊 飼養(yǎng)室或動物實(shí)驗(yàn)室 清潔走廊 物品出口外部區(qū)域高壓滅菌鍋?zhàn)贤鈧鬟f窗物品NOVEMBER, 2007

18、84外準(zhǔn)備室雙扉高壓滅菌器（外扉）傳遞窗高壓噴霧器NOVEMBER, 200785內(nèi)準(zhǔn)備室雙扉高壓滅菌器（內(nèi)扉）傳遞窗NOVEMBER, 200786清潔物品儲藏室出入口NOVEMBER, 200787清潔物品儲存室內(nèi)NOVEMBER, 200788清潔走廊NOVEMBER, 200789實(shí)驗(yàn)室NOVEMBER, 200790實(shí)驗(yàn)室內(nèi)NOVEMBER, 200791清潔走廊污物出口NOVEMBER, 200792清洗室NOVEMBER, 200793物品的消毒與滅菌高壓鍋：121，0.11Mpa，30分鐘 132 ，0.21Mpa，15分鐘傳遞窗：紫外線，表面消毒，30分鐘Co60照射2%過氧

19、乙酸噴霧高錳酸鉀、福爾馬林熏蒸94物品進(jìn)出動物房的三個(gè)原則原則1：物品進(jìn)入動物房盡可能采取高壓滅菌的方式，不能高壓的物品方可使用紫外照射滅菌。原則2：經(jīng)傳遞窗紫外照射進(jìn)入的物品，當(dāng)天必須取出。原則3：經(jīng)高壓滅菌進(jìn)入的物品，至多在動物房內(nèi)存放7天。物品進(jìn)出明細(xì)表（物品傳遞窗旁），見下圖95物品進(jìn)出明細(xì)表途徑適用物品高壓滅菌121 30min金屬類：各類金屬手術(shù)器械、小型儀器、容器、飼料鏟等可以高壓的金屬制品。玻璃類：試管、玻片、燒杯、量筒、培養(yǎng)皿等可以高壓的玻璃器皿。耐高壓塑料制品：籠盒、EP管、移液槍槍頭，小鼠運(yùn)輸盒等耐高壓塑料制品。棉、紗類、紙制品：凈化服、抹（拖）布、棉花、紗布、包裝用紙盒

20、、口罩、小鼠信息卡片。小鼠飼養(yǎng)用品：飲用水瓶、墊料、瓜子。傳遞窗過氧乙酸噴灑+紫外燈照射滅菌：紫外燈照射20min。紫外燈穿透力很弱，僅限于表面消毒，請盡量將物品攤開來。實(shí)驗(yàn)記錄紙制品；不可高壓的塑料和橡膠制品：文具，手套，果凍，飼料。不可高壓的儀器設(shè)備：天平、接線板、血糖儀、環(huán)境監(jiān)測儀，酒精燈，移液槍、進(jìn)口離心管等。消毒液：酒精、84、文華、新潔爾滅。新進(jìn)小鼠：請用動物傳遞窗，過氧乙酸噴灑表面后，紫外燈照射1min966.3 動物實(shí)施內(nèi)動物的走向屏障系統(tǒng)中動物的移動路線(雙走廊或三走廊式)外來動物 傳遞窗 檢疫室或健康動物觀察室 清潔走廊 飼養(yǎng)室或動物實(shí)驗(yàn)室 清潔走廊污物出口 外部區(qū)域NOV

21、EMBER, 2007976.4 實(shí)驗(yàn)動物的居住環(huán)境98開放式籠具99IVC （Individually Ventilated Cages）100101IVC的特點(diǎn)IVC(Individually Ventilated Cages)是獨(dú)立通風(fēng)籠盒的簡稱.它的特點(diǎn)是具有一定的密閉性,同時(shí)讓經(jīng)HEPA過濾器的潔凈空氣流入盒內(nèi),使盒內(nèi)保持正壓,減少了可能的感染來源,適合于飼養(yǎng)SPF級動物,以及一些免疫缺陷動物1026.5 實(shí)驗(yàn)動物的飲水實(shí)驗(yàn)動物的飲用水應(yīng)符合衛(wèi)生部門頒發(fā)的人飲用水的質(zhì)量和衛(wèi)生指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)動物飲用水應(yīng)由新鮮、純凈的水源直接提供。微生物質(zhì)量等級不同的動物應(yīng)供應(yīng)與其級別相適應(yīng)的飲用水，這些飲

22、用水通常都采用高壓、過濾、酸化等滅菌處理措施。103各種動物每日的飲水需要量動 物 品 種飲水需要量小鼠（成熟齡）47ml大鼠（50g）2045ml豚鼠（成熟齡）85150ml兔 （1.4-2.3kg）60140ml/kg(體重)金黃地鼠（成熟齡）812ml小型豬（成熟齡）11.9l狗 （成熟齡）2535ml/kg(體重)貓（2-4kg）100200ml紅毛猴（成熟齡）200950ml104各種飲水瓶（大、小鼠用）105106天然飼料原料：如谷物、脫水蔬菜、草粉、魚粉、骨粉、礦物質(zhì)、酵母等加工飼料原料：如玉米淀粉作為飼料糖類來源，牛奶中提取酪蛋白作為蛋白質(zhì)來源等純化學(xué)物質(zhì)：如氨基酸、必需脂肪酸

23、等6.6 實(shí)驗(yàn)動物的飼料107飼料的配合任何單一的飼料都不能滿足不同動物的不同生長時(shí)期對營養(yǎng)的需要，因此需要進(jìn)行配制，使其含有全面而均衡的各種營養(yǎng)素，以滿足動物生長繁殖或特殊實(shí)驗(yàn)的需要。這種飼料叫“全價(jià)營養(yǎng)飼料”。108實(shí)驗(yàn)動物飼料加工生產(chǎn)原料的粉碎飼料配合飼料的混合成型成品分裝109飼料的分類飼料按物理性狀的分類顆粒料粉料膨化料凝膠料液體飼料大、小鼠配合顆粒飼料110顆粒飼料的優(yōu)點(diǎn)加工過程中高溫作用使蛋白質(zhì)變性和淀粉糊化，容易消化吸收。加工過程中高溫具有殺菌作用，使細(xì)菌數(shù)大量減少，飼料不易變質(zhì)。加工過程中高溫能滅活原料中有害物質(zhì)。顆粒飼料便于運(yùn)輸、儲存、飼喂。顆粒飼料適合于嚙齒類動物啃咬習(xí)性

24、。易掌握每日攝食量，不易造成浪費(fèi)111根據(jù)所含營養(yǎng)成分進(jìn)行分類配合飼料濃縮飼料添加劑預(yù)混料代乳飼料按所飼喂的動物種類及生理階段進(jìn)行分類按所飼喂的動物種類分類按生理階段分類：育成料、繁殖料、維持料按飼料的用途或功能分類高脂飼料高膽固醇飼料蛋白質(zhì)缺乏料1126.8 實(shí)驗(yàn)動物的墊料1.墊料要求 - 對動物無刺激作用或其他有毒、有害作用 - 吸水性能好，并應(yīng)有吸附臭氣的作用 - 使用方便2. 墊料種類木屑（粗、細(xì)），木刨花，打碎的玉米棒及稈，吸水紙，棉花 1131141151163. 墊料的使用（1）需經(jīng)滅菌后才能使用（2）根據(jù)不同要求選擇使用（3）使用后及時(shí)更換清除，頻度視飼養(yǎng)動物數(shù)量和通風(fēng)換氣條件

25、而定117第七節(jié) 同濟(jì)動物中心簡介118同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心位于同濟(jì)大學(xué)本部的西南角，成立于2010年，是一個(gè)集教學(xué)、科研為一體的綜合性公共服務(wù)平臺。同時(shí)也是上海市實(shí)驗(yàn)動物管理委員會的團(tuán)體會員單位。中心使用面積2000，各類儀器設(shè)備500余件，設(shè)備總值達(dá)1000余萬。擁有SPF大鼠籠位500個(gè)，SPF小鼠籠位接近10000個(gè)，普通級兔共有216個(gè)籠位，全部房間都有全自動溫控送風(fēng)系統(tǒng)，可滿足大批科研課題需求。119申請實(shí)驗(yàn)流程申請-需要到同濟(jì)動物中心進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)的人員，需提前兩周到動物中心填寫申請表。審查-每周五同濟(jì)動物管理委員會進(jìn)行開會討論。培訓(xùn)-討論通過后可到動物中心參與崗前培訓(xùn)，培訓(xùn)通過后

26、方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。120QUESTION121同濟(jì)大學(xué)SPF級動物房操作培訓(xùn)李天明/65983907tianmingpumpki 同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心122基本概念123實(shí)驗(yàn)動物（laboratory animal）：用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動物。這些動物應(yīng)是經(jīng)人工培育、其攜帶微生物狀況受到控制、遺傳背景明確、來源清楚、符合科學(xué)實(shí)驗(yàn)、要配及生物制品的鑒定及其他科學(xué)研究的要求。124無特定病原體（Specific Pathogen Free)：即無特定病原體動物（指動物體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲）是不攜帶潛在感染或條件致病菌，但帶有非特定的微生物和寄生蟲的動物，要求在屏障系統(tǒng)內(nèi)生長，國際上普遍采用的動物。12

27、5基本原則126進(jìn)入SPF動物房，必需嚴(yán)格遵循動物中心的操作流程。每天每人只能進(jìn)入一次SPF動物房。不同飼養(yǎng)區(qū)域、不同飼養(yǎng)級別的實(shí)驗(yàn)人員不得串流。門禁卡一人一張，不得擅自外借。動物中心工作人員門禁卡不外借。人流、物流、動物流必需分開。手機(jī)一律不準(zhǔn)帶入SPF動物房。7：00 PM 7：00 AM為動物的休息時(shí)間 禁止人員進(jìn)入。以免頻繁開關(guān)燈而影響動物節(jié)律。飼養(yǎng)籠盒禁止帶回實(shí)驗(yàn)室。127實(shí)驗(yàn)動物的福利128合理地選擇實(shí)驗(yàn)動物品種、數(shù)量與質(zhì)量科學(xué)地避免或減少實(shí)驗(yàn)動物的不安、不適及疼痛請有資質(zhì)的技術(shù)人員從事或指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)管理工作3R原則1293R原則Replacement（替代） 是指使用其他方

28、法來代替動物而達(dá)到某一試驗(yàn)的目的，或者說使用沒有自覺的試驗(yàn)材料代替以往使用神智清醒的活的脊椎動物進(jìn)行試驗(yàn)的方法。Reduction（減少） 是指在科學(xué)研究中，使用較少的動物獲得同樣多的試驗(yàn)數(shù)據(jù)或使用一定數(shù)量的動物能獲得更多的試驗(yàn)數(shù)據(jù)的方法Refinement（優(yōu)化） 是指通過改進(jìn)和完善實(shí)驗(yàn)程序，減輕活減少給動物造成的疼痛和不安，以提高動物福利的方法。130美國動物福利專家提出動物應(yīng)有五大自由轉(zhuǎn)身自由，舔梳自由，站起自由，臥下自由，伸腿自由。131分籠132實(shí)驗(yàn)動物長期在生活在高動物密度的環(huán)境內(nèi)生活，飲水會變得困難、氨濃度、溫濕度也會因自身產(chǎn)熱、排泄等原因造成籠盒內(nèi)環(huán)境相應(yīng)的不穩(wěn)定，動物經(jīng)常會出

29、現(xiàn)呼吸困難、難產(chǎn)、食仔等狀況，也極易感染動物傳染病，如螨蟲、蟯蟲、小鼠肝炎、仙臺病毒等等。133大鼠根據(jù)體型大小來進(jìn)行分籠：4只 （200g以下）3只 （200300g)2只 （300400g)1只 （400g以上）134小鼠 每籠5只單一性別小鼠 每籠肥胖鼠（32g）3只繁育籠內(nèi)交配小鼠不得超過4只，最佳交配繁殖比例：1:2懷孕小鼠1只一籠，小鼠出生后21天必須分籠分籠標(biāo)簽貼出后，一周內(nèi)分籠，否則將進(jìn)行強(qiáng)制分籠，雌雄分開，數(shù)量各半。135實(shí)驗(yàn)申請、審查、預(yù)約136申請需到動物中心SPF級動物房進(jìn)行實(shí)驗(yàn)、飼養(yǎng)的人員，必須提前2周填寫實(shí)驗(yàn)申請審查表。必須詳細(xì)寫明：是否攜帶有毒有害物品，是否為感染

30、性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程的描述需盡可能的詳細(xì)，包括所有將會使用到的實(shí)驗(yàn)耗材。如EP管、手術(shù)器械、試劑、麻醉品等。137審核動物中心收到審查表后，在3個(gè)工作日內(nèi)給予實(shí)驗(yàn)人員回復(fù)。動物中心主任審查通過后，方可進(jìn)入預(yù)約環(huán)節(jié)。138預(yù)約審核通過后，需正確填寫小鼠籠位預(yù)約單。實(shí)驗(yàn)人員從實(shí)驗(yàn)起始日期的三個(gè)月內(nèi)，必須達(dá)到預(yù)約籠位的80%。否則工作人員有權(quán)將其剩余籠位進(jìn)行重新分配。即將超過預(yù)約籠位的，應(yīng)與樓面主管溝通后，進(jìn)行再一次的籠位預(yù)約。以保證實(shí)驗(yàn)有序進(jìn)行。139預(yù)約單日期課題組預(yù)約人預(yù)約籠位聯(lián)系方式 140實(shí)驗(yàn)動物的引進(jìn)與代購141引進(jìn)進(jìn)入到SPF動物房內(nèi)的動物，首先必須是SPF級動物；來源必須是從有資質(zhì)的生產(chǎn)

31、單位引進(jìn)的。且必須提供最近3個(gè)月的健康證明。國內(nèi)有四家生產(chǎn)單位的SPF級動物可以直接進(jìn)入上海中科院斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司南京大學(xué)模式動物研究所上海南方模式生物研究中心142代購中心提供免費(fèi)的代購服務(wù)（僅限斯萊克與必凱）：訂購電話：65983907 戴老師每周二訂購小鼠送到。周一下午3點(diǎn)前與動物中心取得聯(lián)系。自行訂購的小鼠必須提前一周通知，否則一律不得進(jìn)入143臨時(shí)動物房臨時(shí)動物房位于醫(yī)學(xué)類B119，是為因特殊原因不能進(jìn)入SPF動物房飼養(yǎng)的校內(nèi)課題組而開放使用的，沒有特殊原因的課題組不得在臨時(shí)動物房內(nèi)飼養(yǎng)動物。需要使用臨時(shí)動物房的課題組，需提前3天與本中心取得聯(lián)系并

32、填寫申請表，批準(zhǔn)通過后方能在臨時(shí)動物房進(jìn)行飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)。一個(gè)飼養(yǎng)周期不得超過3個(gè)月，超過飼養(yǎng)時(shí)間的動物，需到動物中心辦公室重新辦理申請手續(xù)，逾期不辦者，動物中心有權(quán)對其動物進(jìn)行安樂死。144SPF級動物房人員的進(jìn)出及操作流程145內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室檢疫室飼養(yǎng)室男女二更男女一更緩沖清洗間一樓SPF屏障系統(tǒng)人流走向圖146內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室女二更女一更男一更男二更緩沖緩沖高壓滅菌鍋傳遞窗清洗間風(fēng)淋飼養(yǎng)室二、三樓SPF屏障系統(tǒng)人流走向圖147進(jìn)門脫鞋，將自己的鞋子放在鞋柜上。進(jìn)門，隨即關(guān)門。登記，來到緩沖走廊填寫進(jìn)房登記。并仔細(xì)閱讀人員進(jìn)出屏障設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)操作

33、流程148一更室刷卡進(jìn)入一更。用0.1%新潔爾滅浸泡雙手30秒，擦干。149二更室在確認(rèn)一更室的門關(guān)上后，開門進(jìn)入二更室。無菌防護(hù)，在二更室內(nèi)按順序戴好手套、口罩，穿上滅菌過的隔離衣（聯(lián)體式）。門禁卡放入無菌衣右內(nèi)側(cè)口袋。穿戴完畢跨過防鼠板后穿拖鞋。整理裝著：要求頭發(fā)不能外露、口罩必須蓋住鼻孔，袖口蓋住手套、領(lǐng)口的紐扣需全部扭上等150風(fēng)淋室進(jìn)入風(fēng)淋前用酒精噴霧消毒手部及脫鞋底部。進(jìn)入風(fēng)淋室，隨即關(guān)門，風(fēng)淋自動啟動（時(shí)間為20秒）。風(fēng)淋過程中舉起雙手，叉開雙腿，適當(dāng)?shù)男D(zhuǎn)，使身體每一部分都能盡量被風(fēng)淋到。每次限進(jìn)一人。出風(fēng)淋檢查門是否關(guān)好151潔凈走廊進(jìn)入潔凈走廊，隨即關(guān)門。不得再經(jīng)風(fēng)淋間返回

34、。進(jìn)入潔凈走廊后根據(jù)工作需要進(jìn)入相關(guān)飼養(yǎng)間、實(shí)驗(yàn)室，切記隨手關(guān)門，不能同時(shí)開兩扇門進(jìn)行操作。152清掃實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)動物放回原處，如籠位有變化，即時(shí)在實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)記錄狀況表上做好登記。清理房間，清掃、拖地、將廢棄物裝入垃圾袋，并做好相關(guān)記錄。離開時(shí)隨手關(guān)門。每一位實(shí)驗(yàn)人員都有責(zé)任，保證實(shí)驗(yàn)室的干凈整潔。153離開屏障區(qū)經(jīng)人員出口進(jìn)入緩沖間，確認(rèn)門關(guān)上后，退出屏障區(qū)，隨即關(guān)門。脫下隔離服、手套、口罩、拖鞋，扔入指定桶內(nèi)。登記離開時(shí)間，換上自己的鞋子，離開。154SPF級動物房物品的進(jìn)出155內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室檢疫室飼養(yǎng)室 男女二更男女一更清洗間一樓SPF屏障系統(tǒng)物流走向圖緩沖156一樓SP

35、F大鼠實(shí)驗(yàn)室動物流走向圖內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室女一更女二更男一更男二更緩沖緩沖風(fēng)淋高壓滅菌鍋傳遞窗清洗間二、三樓SPF屏障系統(tǒng)物流走向圖157物品進(jìn)出動物房的三個(gè)原則原則1：物品進(jìn)入動物房盡可能采取高壓滅菌的方式，不能高壓的物品方可使用紫外照射滅菌。原則2：經(jīng)傳遞窗紫外照射進(jìn)入的物品，當(dāng)天必須取出。原則3：經(jīng)高壓滅菌進(jìn)入的物品，至多在動物房內(nèi)存放7天。物品進(jìn)出明細(xì)表（物品傳遞窗旁），見下圖158物品進(jìn)出明細(xì)表途徑適用物品高壓滅菌121 30min金屬類：各類金屬手術(shù)器械、小型儀器、容器、飼料鏟等可以高壓的金屬制品。玻璃類：試管、玻片、燒杯、量

36、筒、培養(yǎng)皿等可以高壓的玻璃器皿。耐高壓塑料制品：籠盒、EP管、移液槍槍頭，小鼠運(yùn)輸盒等耐高壓塑料制品。棉、紗類、紙制品：凈化服、抹（拖）布、棉花、紗布、包裝用紙盒、口罩、小鼠信息卡片。小鼠飼養(yǎng)用品：飲用水瓶、墊料、瓜子。傳遞窗過氧乙酸噴灑+紫外燈照射滅菌：紫外燈照射20min。紫外燈穿透力很弱，僅限于表面消毒，請盡量將物品攤開來。實(shí)驗(yàn)記錄紙制品；不可高壓的塑料和橡膠制品：文具，手套，果凍，飼料。不可高壓的儀器設(shè)備：天平、接線板、血糖儀、環(huán)境監(jiān)測儀，酒精燈，移液槍、進(jìn)口離心管等。消毒液：酒精、84、文華、新潔爾滅。新進(jìn)小鼠：請用動物傳遞窗，過氧乙酸噴灑表面后，紫外燈照射1min159實(shí)驗(yàn)物品的進(jìn)

37、出方向物品進(jìn)入：傳遞窗準(zhǔn)備室清潔走廊動物飼養(yǎng)室或?qū)嶒?yàn)室。物品離開：動物飼養(yǎng)室或?qū)嶒?yàn)室清潔走廊準(zhǔn)備室傳遞窗。傳遞窗紫外照射向內(nèi)傳遞的物品需詳細(xì)登記，包括傳入時(shí)間、傳入物品、使用人等相關(guān)信息。傳遞窗向外傳遞物品，從外側(cè)取出物品后，必須將傳遞窗門關(guān)上，并將紫外線再次開啟。160細(xì)節(jié)需高壓滅菌進(jìn)入動物房的實(shí)驗(yàn)用品可提前一天交給動物中心辦公室205，在第二天的下午就可以拿到自己實(shí)驗(yàn)用品。（免費(fèi)）每個(gè)飼養(yǎng)間內(nèi)都放有利器盒，針頭、槍頭等利器使用后放在利器盒內(nèi)，動物中心每周統(tǒng)一收集處理，不得隨意丟棄。161SPF級動物房實(shí)驗(yàn)動物（生物活性物）的進(jìn)出162內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室檢疫室飼養(yǎng)室清洗間 男女二更男女一更緩沖一

38、樓SPF屏障系統(tǒng)動物流走向圖163內(nèi)準(zhǔn)備室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室檢疫室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室飼養(yǎng)室高壓滅菌鍋緩沖緩沖女一更女二更男一更男二更風(fēng)淋傳遞窗清洗間二、三樓SPF屏障系統(tǒng)動物流走向圖164實(shí)驗(yàn)動物（生物活性物）的進(jìn)入動物進(jìn)入動物房必須由工作人員進(jìn)行操作。確認(rèn)外包裝盒完好無破損。通過清洗間的動物傳遞窗進(jìn)行內(nèi)外傳遞，并做好傳遞窗使用登記。用過氧乙酸消毒液噴灑外包裝盒四周、底部放入傳遞窗，打開紫外燈照射1Min。待紫外燈熄滅（滅菌結(jié)束）后，從內(nèi)側(cè)取出建議動物進(jìn)入1周后進(jìn)行試驗(yàn)。165實(shí)驗(yàn)動物（生物活性物）的離開中心提供一次性小碗或運(yùn)輸籠作為大小鼠轉(zhuǎn)移的臨時(shí)載體，請勿將飼養(yǎng)籠盒帶回實(shí)

39、驗(yàn)室。從內(nèi)側(cè)打開動物傳遞窗，將小鼠放入，確認(rèn)關(guān)閉傳遞窗門。從外側(cè)取走小鼠后，必須打開紫外燈再次消毒。166飼養(yǎng)籠盒的管理制度1：禁止將飼養(yǎng)籠盒帶回實(shí)驗(yàn)室。活動物在實(shí)驗(yàn)室存放時(shí)間不許超過24小時(shí)。2：提供消毒處理過的類似一次性飯盒作為小鼠臨時(shí)轉(zhuǎn)移的載體，放置在二樓、三樓飼養(yǎng)間內(nèi)。如有疑問或找不到情形請隨時(shí)與工作人員聯(lián)系。3：提供專門的運(yùn)輸籠盒作為大鼠臨時(shí)轉(zhuǎn)移的載體，在一樓的清潔級動物房內(nèi)存放，需要是可找工作人員領(lǐng)取并做好登記，及時(shí)歸還。4：提供白色的普通飼養(yǎng)籠盒外借服務(wù)，需要在實(shí)驗(yàn)室臨時(shí)短期飼養(yǎng)的課題組，請動物中心205辦公室辦理租借手續(xù)，大鼠白色飼養(yǎng)籠盒一套押金300元，小鼠白色飼養(yǎng)籠盒一套押

40、金200元，租借不收取租借費(fèi)，所有押金在籠盒歸還后一并退還。5：動物中心的所有工作人員（包括保安、保潔）將加強(qiáng)監(jiān)管，對于發(fā)現(xiàn)將飼養(yǎng)籠盒帶回自己實(shí)驗(yàn)室的人員進(jìn)行勸阻。每一位工作人員都有責(zé)任和義務(wù)。善意的提醒：動物中心每個(gè)樓層和出入口均安裝有攝像監(jiān)控裝置。167進(jìn)口小鼠種源地健康報(bào)告審查生物凈化（非JAX的進(jìn)口小鼠）新引入的動物（研究人員互相交換轉(zhuǎn)基因小鼠）,是小鼠感染微生物的最重要的來源！168進(jìn)口小鼠的隔離檢疫PI 如果自己進(jìn)口小鼠，需提前跟動物房申請籠位，不允許小鼠到中心后臨時(shí)通知按SOP接收小鼠（外包裝消毒、小鼠籠盒掛標(biāo)牌標(biāo)明進(jìn)口單位和日期等）專門的人員照料小鼠，對小鼠每日進(jìn)行觀察，如有特

41、殊情況，及時(shí)通知獸醫(yī)。JAX進(jìn)口的小鼠在檢疫室飼養(yǎng)繁殖，F(xiàn)1代需取一只做第三方檢測，檢測合格后方可進(jìn)入普通飼養(yǎng)間飼養(yǎng)。檢測費(fèi)用由PI承擔(dān)。169生物凈化（Rederivation）目的：減小或預(yù)防進(jìn)口小鼠所帶來的病原體感染的風(fēng)險(xiǎn)一、剖腹產(chǎn)對懷孕小鼠進(jìn)行子宮摘除取胎，取出仔鼠進(jìn)行代乳二、胚胎移植將著床前胚胎植入干凈的假孕母體內(nèi)，凈化后小鼠的干凈程度與代孕鼠及其飼養(yǎng)環(huán)境相同比剖腹產(chǎn)清除病原體更可靠降低某些感染子宮或胎盤的傳染因子風(fēng)險(xiǎn)170胚胎移植（Embryo transfer）將著床前胚胎植入干凈的假孕母體內(nèi)，凈化后小鼠的干凈程度與代孕鼠及其飼養(yǎng)環(huán)境相同比剖腹產(chǎn)清除病原體更可靠降低某些感染子宮或

42、胎盤的傳染因子風(fēng)險(xiǎn)，如Pasteurella pneumotropica, Mycoplasma pulmonis透明帶（附植前胚胎）可以阻擋傳染性因子的侵入避免了剖腹產(chǎn)對懷孕時(shí)間的精確要求，因?yàn)檗D(zhuǎn)基因和敲除品系的懷孕期會有所不同171注意事項(xiàng)172消毒每周五下午 2：303：00為動物中心內(nèi)部消毒時(shí)間。一切人員不得進(jìn)入。173傳遞窗的使用傳遞物品必須登記。消毒水噴灑范圍完全覆蓋物品表面且仔細(xì)。傳遞窗外側(cè)門一旦打開，必需用消毒水和紫外再次消毒。174超凈臺的使用超凈臺使用前應(yīng)填寫使用記錄。使用時(shí)玻璃門盡量壓低，以保持臺內(nèi)靜壓，避免外界細(xì)菌、微生物等進(jìn)入超凈臺內(nèi)。使用完畢用酒精棉球清潔臺面。175屏障系統(tǒng)內(nèi)無菌水使用