DB15-T 2796-202225羥基維生素D判定產(chǎn)后奶牛子宮疾病發(fā)病技術(shù)規(guī)程

1、ICS65.020.30CCSB 4115內(nèi) 蒙 古 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB15/T 2796202225 羥基維生素 D 判定產(chǎn)后奶牛子宮疾病發(fā)病技術(shù)規(guī)程Technical regulations for determining the incidence of uterinedisease in postpartum dairy cows with 25 hydroxyvitamin D2022-08-30 發(fā)布2022-09-30 實(shí)施內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā) 布前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙

2、古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC 19）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院、寧夏大學(xué)、西北農(nóng)林科技大學(xué)。本文件主要起草人員：馬燕芬、張春華、羿靜、寶華、特日格勒、劉瑞芳。25 羥基維生素 D 判定產(chǎn)后奶牛子宮疾病發(fā)病技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了25羥基維生素D判定產(chǎn)后奶牛子宮疾病發(fā)病技術(shù)規(guī)程的術(shù)語和定義、檢測方法和判定標(biāo)準(zhǔn)。本文件適用于奶牛場以及畜牧工作者對產(chǎn)后奶牛子宮疾病發(fā)病的判定。規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。干奶期 dry-off奶牛在產(chǎn)犢前的一段時期內(nèi)停止擠奶，使乳房、奶牛機(jī)體得到

3、休整的過程。干奶期通常為45 d75 d，平均為60 d。對初產(chǎn)牛、高產(chǎn)牛及瘦?？蛇m當(dāng)延長干奶期，可延長為65 d75 d；對體況較好、產(chǎn)奶量低的牛，可縮短為45 d。圍產(chǎn)期 transition period奶牛產(chǎn)前21 d至產(chǎn)后21 d。其中，產(chǎn)前21 d稱為圍產(chǎn)前期，產(chǎn)后21 d稱為圍產(chǎn)后期。尿 酮 urine ketone尿中的酮體，是脂肪酸在肝臟內(nèi)正常分解代謝的中間產(chǎn)物，包括乙酰乙酸（acetoacetic acid， ACAC）、丙酮（acetone）和-羥丁酸（beta hydroxybutyric acid，BHBA）。注：通常只測定乙酰乙酸來判定產(chǎn)前奶牛尿酮濃度升高。25 羥

4、基維生素 D 25-hydroxyvitamin D 25(OH)D維生素D在體內(nèi)的主要存在形式，維生素D為類固醇衍生物，屬于脂溶性維生素。維生素D在肝臟中通過羥基化作用轉(zhuǎn)化為25-羥基維生素D，然后在腎臟中轉(zhuǎn)換為具有活性的1，25-二羥基維生素D。通過測定血清25羥基維生素D可反映機(jī)體內(nèi)維生素D的儲存水平。胎衣不下 retained placenta胎衣滯留，是指胎衣未在胎兒娩出后24 h內(nèi)排出的一種家畜產(chǎn)科疾病。子宮炎 metritis分娩后母牛子宮松弛，收縮不正常，并在產(chǎn)后21 d內(nèi)出現(xiàn)異常陰道分泌物的一種家畜產(chǎn)科疾病。檢測方法檢測設(shè)備、試劑和耗材酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑。酶標(biāo)儀（

5、450 nm）。加樣器和槍頭。37 水浴鍋。血樣采集及血清分離采集干奶期15 d18 d，圍產(chǎn)前期13 d15 d，圍產(chǎn)后期5 d10 d奶牛尾靜脈血3 mL置于5 mL真空采血管中，室溫靜置半小時，打開離心機(jī)，3500 rpm離心15 min，分離得到血清。測定指標(biāo)25(OH)D。測定步驟從室溫平衡 20 min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4 冰箱。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在第 1 孔和第 2 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100 L，然后在第 1 孔和第 2 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50L，混勻后從第 1 孔和第 2 孔中各取 100 L 分別加

6、到第 3 孔和第 4 孔；在第 3 孔和第 4 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50L，混勻后在第 3 孔和第 4 孔中先各取 50 L 棄掉，再各取 50L 分別加到第 5 孔和第 6 孔中；再在第 5 孔和第 6 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50 L，混勻后從第 5 孔和第 6 孔中各取 50L 分別加到第 7 孔和第 8 孔中；再在第 7 孔和第 8 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50L，混勻后從第 7 孔和第 8 孔中分別取 50L 加到第 9 孔和第 10 孔中； 再在第 9 孔和第 10 孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50 L，混勻后從第 9 孔和第 10 孔中各取 50 L 棄掉（稀釋后各孔加樣量均為

7、50 L，濃度分別為 60 g/L、40g/L、20g/L、10 g/L、5g/L）。加樣：分別設(shè)空白孔（不加樣品及酶標(biāo)試劑）、待測樣本孔，在待測樣品孔中先加樣品稀釋液40L，然后再加待測樣品 10L（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37 孵育 30 min。配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋 30 倍后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，用吸水紙去除多余水分，每孔加滿洗滌液，靜置 30 s 后棄去，用吸水紙去除多余水分，如此重復(fù)洗板 5 次。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 L，空白孔除外，37 孵育 30 min。洗滌：操作同 4.4.5。顯色：每孔先加入顯色劑 A50 L，再加入顯色劑 B50L，輕輕震蕩混勻，37 避光顯色 15 min。終止：每孔加入終止液 50 L，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色）。測定：以空白孔調(diào)零，450 nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15 min 內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算：OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù) 5，即為樣品的實(shí)際濃度。判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)產(chǎn)犢后奶牛發(fā)病特點(diǎn)、臨床癥狀可對干奶期和圍產(chǎn)期奶牛作出初步診斷，經(jīng)測定血清25(OH)D 濃度予以確診，可判定奶牛產(chǎn)前尿酮濃度增加，產(chǎn)后子宮疾病患病風(fēng)險(xiǎn)增加。干奶期和圍產(chǎn)前期奶牛尿酮濃度升高