DB1301-T080-2013雞蛋中三聚氰胺的測(cè)定-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1、B46DB130199石家莊市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1301/T0802013雞蛋中三聚氰胺的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2013-07-19 發(fā)布2013-08-20 實(shí)施石家莊市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB1301/T0802013 PAGE 5前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A 為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由石家莊市畜牧水產(chǎn)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心 。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人： 魏昆鵬、左曉磊、崔榮飛、賈琳、張彩云、杜彥儒、何立寧、岳海祥。雞蛋中三聚氰胺的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞蛋中三聚氰胺的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞蛋中三聚氰胺的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)限為 0.005 mg/k

2、g，定量限為 0.015 mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。NY/T 5344.6-2006 無公害食品 產(chǎn)品抽樣規(guī)范 第 6 部分；畜禽產(chǎn)品。農(nóng)業(yè)部農(nóng)牧發(fā)20031 號(hào) 獸藥殘留試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（試行）。原理試樣用三氯乙酸溶液提取，經(jīng)陽離子交換固相萃取凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。試劑與材料本法所用試劑均為分析純；水符合 GB/T 6682 二級(jí)用水的規(guī)

3、定。乙腈：色譜純。甲醇：色譜純。三氯乙酸。氨水：分析純，含量為 25%28%。乙酸銨：分析純。冰醋酸。甲醇水溶液：取 50mL 甲醇和 50mL 純水，混勻后備用。三氯乙酸溶液（3%）：準(zhǔn)確稱取 30g 三氯乙酸于 1L 容量瓶中，用水溶解定容至刻度，混勻后備用。氨化甲醇（5%）：準(zhǔn)確量取 5mL 氨水和 95mL 甲醇，混勻后備用。10mmoL/L 乙酸銨溶液: 準(zhǔn)確稱取 0.772g 乙酸銨于 1L 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度,混勻后備用。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取適量三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品于 100mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（4.7） 溶解定容至刻度，混勻后制成

4、 1mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4避光保存。儀器與設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀。分析天平：精度為 0.01g。5.3精密天平：0.0001g。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于 10000r/min。固相萃取裝置。氮?dú)獯蹈蓛x。渦旋振蕩器。濾膜，0.22m，有機(jī)系。固相萃取小柱：混合型陽離子交換柱（PCX），3mL/60mg，或其他性能類似的小柱。分析步驟提取準(zhǔn)確稱取勻漿后的雞蛋 2g（精確至 0.01g），置于 50mL 具塞離心管內(nèi)，加 3%三氯乙酸溶液 18mL，渦旋混合 30s，超聲提取 10min，10000r/min 離心 10min,取全部上層溶液作為備用溶液。凈化PCX 小柱依次用甲醇、水各

5、3mL 預(yù)洗；取備用溶液 10mL 過柱，用水、甲醇各 3mL 淋洗，真空抽至近干后；用 5%氨化甲醇溶液 3mL 洗脫，整個(gè)萃取過程流速不超過 1mL/min， 洗脫液于 50下用氮?dú)獯蹈?，殘留余物用流?dòng)相 1.0mL 定容，過微孔濾膜后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定液相色譜條件色譜柱：ZORBAX Rx-Sil, 2.1 mm x 150 mm, 5 m 柱溫：40流動(dòng)相：10mmol/L 乙酸銨溶液（用冰醋酸調(diào) pH 至 3.0）+乙腈（20+80） 進(jìn)樣量：10L流速：0.6mL/min質(zhì)譜條件電離方式：電噴霧電離，正離子離子噴霧電壓：4kV霧化氣：氮?dú)猓?0ps

6、i干燥氣：氮?dú)?，流?10L/min，溫度 350 碰撞氣：氮?dú)鈷呙枘Ｊ剑憾喾磻?yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）,母離子 m/z127,定量離子 m/z85,定性離子 m/z68 裂解電壓：100V碰撞能量：m/z12785 為 35V， m/z12768 為 20V。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用流動(dòng)相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋得到的濃度為 0，0.05、1、15、100g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，直接上機(jī)檢測(cè)，以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。三聚氰胺對(duì)照品的多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）色譜圖參見附錄 A。定量測(cè)定待測(cè)樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)

7、樣分析。定性判斷按照上述條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果待測(cè)樣品的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于 2.5%，且樣品譜圖中目標(biāo)化合物的兩個(gè)定性離子的相對(duì)離子豐度比與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)品工作液的相對(duì)離子豐度比的偏差不超過表 1 規(guī)定，則可判斷樣品中存在三聚氰胺。表 1 定性離子相對(duì)豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度50%20%至 50%10%至 20%10%允許的相對(duì)偏差20%25%30%50%平行試驗(yàn)按照上述步驟，對(duì)樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。結(jié)果計(jì)算與表達(dá)雞蛋中三聚氰胺的含量 X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）計(jì)算：X C Vm f式（1）式中：c 上機(jī)溶液中三聚氰胺的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）； V 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m 試樣的質(zhì)量，單位為克（g）； f 稀釋倍數(shù)。結(jié)果保留 3 位有效數(shù)字。方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度靈敏度本方法三聚氰胺檢測(cè)限 0.005mg/kg、定量限 0.015mg/kg準(zhǔn)確度空白雞蛋樣品中添加對(duì)照工作液，按照樣品制備步驟操作，測(cè)定后計(jì)算樣品添加的回收率。在空白雞蛋中添加 0