活性氧（ROS）介導(dǎo)的乙醛氧化損傷心肌致細(xì)胞凋亡的初步研究課件

1、活性氧（ROS）介導(dǎo)的乙醛氧化損傷心肌致細(xì)胞凋亡的初步研究上海中山醫(yī)院心血管病研究所 研究背景 酒精性心肌病迅速蔓延在西方世界，酒精是繼發(fā)性非缺血性擴(kuò)張型心肌病主要原因1) 據(jù)統(tǒng)計(jì)，成年人2/3不同程度飲酒2) 酒精性心肌病,1/3以上與酒精有關(guān)在中國(guó)，隨著生活水平不斷提高，酒精性代謝相關(guān)疾病增多乙醇？乙醛？損傷心肌乙醇，乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞比較實(shí)驗(yàn)1）養(yǎng)化應(yīng)激水平2）細(xì)胞凋亡水平轉(zhuǎn)基因過表達(dá)ADH或ALDH比較實(shí)驗(yàn)1）過表達(dá)ADH加劇心肌收縮功能障礙2）過表達(dá)ALDH減少心肌細(xì)胞凋亡乙醇 乙醛 乙酸ADHALDH乙醛通過何種途徑損傷心?。啃募》蚀?、凋亡致功能改變遺傳因素病毒感染DNA突變免疫改變

2、T細(xì)胞殺傷心肌炎R(shí)OSROS途經(jīng)導(dǎo)致靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡J. Biol. Chem. 279:11244. 心肌細(xì)胞胞漿特異表達(dá) -MHC, 200 體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)0 2 6 12 18 24 48 h不同條件誘導(dǎo)下ROS的變化乙醛誘導(dǎo)細(xì)胞培液上清SOD活性hSD鼠心力衰竭模型中ALDH2明顯下調(diào)染色體定位：12q24.2 蛋白定位：線粒體內(nèi)膜醛脫氫酶 2 aldehyde dehydrogenase(ALDH2)線粒體功能ROS產(chǎn)生主要場(chǎng)所引起氧化損傷ATP能量來源抗氧化酶系凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl家族線粒體功能心肌組織ALDH2活性測(cè)定結(jié)果RT-PCRWes

3、tern Blot在SD鼠心衰模型中DDDDReal time-PCR54KD36KDALDH2/pAd-HM4質(zhì)粒構(gòu)建CAG poly API-SceII-CeuIKpnIApaIXhoI (2)SalI (2)BamHI(2)XbaI (2)SalI (2)PstI (2)?SphIHindIII (3)total 35.3kb1720bp730bp30.3kbAmprXbaI（ 2)ALDH21954bpEcoRPstBglBglHind0.8kb2.5kbAdeno virus genomeE3(-)(28133-30818)Adeno virus genomeE1(-)(342-3523)ITRITRPacIPacI技術(shù)路線細(xì)胞培液上清DCM組轉(zhuǎn)ALDH2*1形 DNA ladder態(tài) TUNEL基 ALDH2因 ADH-1蛋 Bcl-2家族白 caspase移植心臟組織 SD鼠心肌細(xì)胞 活 ALDH2性 ROS對(duì)照組對(duì)照組乙醛干預(yù)轉(zhuǎn)ALDH2*2未轉(zhuǎn)未干預(yù)通 MAP