霍亂病原菌檢測(cè)標(biāo)本的采集方法、運(yùn)輸和保存課件

1、霍亂病原菌檢測(cè)標(biāo)本的采集方法、運(yùn)輸和保存重慶市南岸CDC許 磊 ：一、標(biāo)本的采集和送檢（一）標(biāo)本采集和送檢的要求標(biāo)本采集是否規(guī)范，能從很大程度上影響檢驗(yàn)工作的質(zhì)量。標(biāo)本采集應(yīng)由受過(guò)專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)的人員來(lái)執(zhí)行，同時(shí)注意生物安全防護(hù)，防止樣品污染、交叉污染和自身感染。標(biāo)本應(yīng)有唯一編號(hào)作為唯一性標(biāo)識(shí)。標(biāo)本在采集后應(yīng)立即放入冷藏箱中，注意勿使標(biāo)本局部冷凍，并盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)。送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)填寫(xiě)“標(biāo)本送檢單”（樣單見(jiàn)附表2和3），寫(xiě)明姓名、住址、聯(lián)系方式、發(fā)病時(shí)間、采集時(shí)間、臨床診斷等，為環(huán)境和食品標(biāo)本等時(shí)，也需要記錄采集時(shí)間、地點(diǎn)、種類(lèi)等相關(guān)信息。標(biāo)本管/袋或瓶上標(biāo)記樣品編號(hào)。因病人標(biāo)本含有病原體，

2、標(biāo)本裝入試管或小瓶時(shí)，注意勿污染容器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏等，放在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專(zhuān)人送往檢驗(yàn)室，運(yùn)送過(guò)程中注意安全。送檢箱每次用后須經(jīng)消毒處理。（二）標(biāo)本種類(lèi)及其采樣方法 病人標(biāo)本應(yīng)盡可能采集糞便。根據(jù)調(diào)查需要以及標(biāo)本的可及性，如下標(biāo)本也作為檢材：病人嘔吐物、尸體腸內(nèi)容物、糞便污染衣物及相關(guān)物體表面如地面、水體、食品、水生動(dòng)物、蒼蠅等，但根據(jù)實(shí)際情況，也不限于這些標(biāo)本。標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基配方見(jiàn)附件3“常用的標(biāo)本保存液和細(xì)菌培養(yǎng)基”。41. 病人糞便糞便標(biāo)本的采集應(yīng)盡可能在發(fā)病早期（能采集到的最早期）。即便病人已使用抗生素，為盡可能獲得霍亂病原學(xué)診斷，也需在能采集的最早期采集標(biāo)本。用采

3、集糞便標(biāo)本（包括水樣便）的器材采取新鮮糞便，避免采便量過(guò)少，一般要求水樣便采取1mL3mL，放入無(wú)菌帶螺旋蓋的試管中，擰緊管蓋；成形便采取指甲大小的糞量，裝入滅菌小瓶中，蓋好瓶蓋。如病人不能自然排出大便、可使用肛拭或肛門(mén)采便管采集。用棉拭子（用于PCR檢測(cè)的標(biāo)本，不要使用棉拭子而應(yīng)使用滅菌人造纖維拭子或塑料棒采集）或肛門(mén)采便管先在滅菌生理鹽水中蘸濕后（棉拭子貼管壁擠出多余的液體），由肛門(mén)插入直腸內(nèi)3cm5cm（幼兒約2cm3cm）處，旋轉(zhuǎn)360，自肛管內(nèi)壁表面拭取采集。應(yīng)注意棉拭子大小是否適宜、光滑、結(jié)實(shí)且不易脫落。然后立即置于冷藏箱內(nèi)，送往實(shí)驗(yàn)室。肛拭子標(biāo)本如不能在2h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)插入C

4、ary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送，注意培養(yǎng)基應(yīng)埋住糞便拭子，手接觸的部分在管口折斷棄去。糞便標(biāo)本如果運(yùn)送時(shí)間不超過(guò)24h，還可將其放在堿性蛋白胨水中室溫運(yùn)送。標(biāo)本與堿性蛋白胨水的比例為8mL10mL堿性蛋白胨水可加入1mL3mL液體便或指甲大小的成形便。過(guò)多的糞便量會(huì)降低保存液的pH值。如果沒(méi)有合適采便器材以及沒(méi)有運(yùn)送培養(yǎng)基時(shí)，可用無(wú)菌吸水紙條浸于液體糞便中，然后將吸水紙條密封于塑料袋中，放入冷藏箱中運(yùn)往實(shí)驗(yàn)室。水樣標(biāo)本的采集方法有多種，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查需要及實(shí)驗(yàn)室自身檢測(cè)條件，如有無(wú)過(guò)濾器等，作相應(yīng)的選擇。(1) 鹽水瓶法 (2) Moore紗布集菌法 (3) Spira 紗布集菌法 4. 食品針對(duì)不同的可疑食品，采集整體或部分標(biāo)本，帶至實(shí)驗(yàn)室。注意采集過(guò)程中不同食品及不同部位不能交叉污染。5. 海水產(chǎn)品選取活海水產(chǎn)品或涂抹拭子，置于塑料袋內(nèi)（拭子標(biāo)本可按糞便拭子保存運(yùn)輸方法處置），盡快送往實(shí)驗(yàn)室。如在一箱甲魚(yú)中可采取數(shù)只甲魚(yú)的體表作為一個(gè)標(biāo)本送檢，這比只做一只甲魚(yú)體內(nèi)檢查其陽(yáng)性檢出機(jī)會(huì)可能更多。霍亂監(jiān)測(cè)時(shí)，海水產(chǎn)品常作為重點(diǎn)采集監(jiān)測(cè)的對(duì)象。注意采集過(guò)程中不同食品及不同部位不能交叉污染。對(duì)于霍亂疫情或疑似霍亂疫情的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和樣本采集過(guò)程中，必須注意生物安全防