生物安全實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)驗(yàn)證全國(guó)培訓(xùn)班市公開(kāi)課獲獎(jiǎng)?wù)n件

1、生物安全試驗(yàn)室檢測(cè)驗(yàn)證 /051第1頁(yè)第1頁(yè)概 述生物安全試驗(yàn)室是通過(guò)物理圍場(chǎng)方式將病原微生物操作局限在能預(yù)防感染性材料尤其是預(yù)防感染性生物氣溶膠擴(kuò)散到試驗(yàn)室外環(huán)境。為了確保病原微生物試驗(yàn)室在試驗(yàn)操作過(guò)程中產(chǎn)生含有病原微生物“三廢”（即感染性固體廢物、感染性液體廢物和感染性空氣）不擴(kuò)散到試驗(yàn)室外環(huán)境，通過(guò)各種物理和/或化學(xué)手段，使排出試驗(yàn)室 “三廢”中病原微生物達(dá)到“零排放”。 /052第2頁(yè)第2頁(yè)概 述試驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489）11.4條，明確要求“對(duì)于新安裝生物安全柜和安全罩及其HEPA濾器安裝與更換，應(yīng)由有資格人員進(jìn)行，安裝或更換后應(yīng)按照經(jīng)確認(rèn)辦法進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)生物和物理檢測(cè)，并

2、每年進(jìn)行驗(yàn)證?！?/053第3頁(yè)第3頁(yè)概 述在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)原則微生物和生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則（WS 233），在附錄B（規(guī)范性附錄）相關(guān)級(jí)生物安全柜現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)B.5中要求，“在頒布實(shí)行我國(guó)級(jí)生物安全柜相關(guān)原則之前，進(jìn)口級(jí)生物安全柜必須符合生產(chǎn)國(guó)相應(yīng)原則，生產(chǎn)國(guó)無(wú)相關(guān)原則產(chǎn)品不得進(jìn)口使用。國(guó)產(chǎn)級(jí)生物安全柜生產(chǎn)廠家必須制定相應(yīng)公司原則，其性能指標(biāo)不得低于國(guó)外同類產(chǎn)品原則。出廠時(shí)必須按公司原則對(duì)每臺(tái)生物安全柜進(jìn)行檢測(cè)并出具檢測(cè)匯報(bào)，使用微生物進(jìn)行生物安全防護(hù)檢測(cè)不得省略。” /054第4頁(yè)第4頁(yè)概 述生物安全試驗(yàn)室設(shè)施檢測(cè)與驗(yàn)證，主要是排放口HEPA濾器；生物安全試驗(yàn)室設(shè)備檢測(cè)與驗(yàn)證

3、，主要是生物安全柜和安全罩。高壓滅菌器檢測(cè)驗(yàn)證，國(guó)家已有相關(guān)原則和要求。 /055第5頁(yè)第5頁(yè)一、生物安全試驗(yàn)室設(shè)施檢測(cè)驗(yàn)證 生物安全試驗(yàn)室設(shè)施檢測(cè)對(duì)象主要：半污染區(qū)和污染區(qū)潔凈度檢測(cè)半污染區(qū)和污染區(qū)以及緩沖間負(fù)壓值檢測(cè)半污染區(qū)和污染區(qū)氣流流速和流向檢測(cè)HEPA濾器物理檢測(cè)氣密性檢測(cè)驗(yàn)證對(duì)象主要是半污染區(qū)和污染區(qū)排風(fēng)口HEPA濾器對(duì)微生物氣溶膠濾除率生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證。 /056第6頁(yè)第6頁(yè)半污染區(qū)和污染區(qū)潔凈度檢測(cè)檢測(cè)技術(shù)辦法參考潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范（JGJ 7190）。BSL3和ABSL3試驗(yàn)室、BSL4和ABSL4試驗(yàn)室半污染區(qū)和污染潔凈度檢測(cè)合格范圍應(yīng)當(dāng)是空氣中0.5m塵粒數(shù)35粒/m3到

4、350粒/m3，5m塵粒數(shù)2930粒/m3到29300粒/m3。 /057第7頁(yè)第7頁(yè)半污染區(qū)和污染區(qū)以及緩沖間負(fù)壓值檢測(cè)BSL3和BSL4試驗(yàn)室由外向內(nèi)分別是清潔區(qū)、緩沖間、半污染區(qū)、緩沖間和污染區(qū)，它們負(fù)壓值分別是0Pa、10Pa、20Pa、30Pa和40Pa。 ABSL3和ABSL4試驗(yàn)室由外向內(nèi)分別是清潔區(qū)、緩沖間、半污染區(qū)、緩沖間和污染區(qū)，它們負(fù)壓值分別是0Pa、10Pa、25Pa、40Pa和60Pa。負(fù)壓值測(cè)定應(yīng)在所有門(mén)關(guān)閉時(shí)進(jìn)行，并應(yīng)從平面上最里面房間依次向外測(cè)定。/058第8頁(yè)第8頁(yè)半污染區(qū)和污染區(qū)氣流流速和流向檢測(cè)氣流流速檢測(cè) （1）單向流氣流測(cè)定辦法 在距送風(fēng)面0.5垂直截

5、面測(cè)定。截面上測(cè)點(diǎn)間距不應(yīng)2，測(cè)點(diǎn)數(shù)應(yīng)不少于10個(gè)，均勻布置。采用熱球風(fēng)速儀作為檢測(cè)儀器。（2）評(píng)價(jià)原則 應(yīng)符合生物安全試驗(yàn)室設(shè)計(jì)每小時(shí)換氣次數(shù)換算氣流流速，同時(shí)應(yīng)考慮試驗(yàn)室內(nèi)氣流流速不應(yīng)0.24m/s。 /059第9頁(yè)第9頁(yè)半污染區(qū)和污染區(qū)氣流流速和流向檢測(cè)氣流方向檢測(cè)和評(píng)價(jià)（1）測(cè)定辦法 用發(fā)煙器裝置測(cè)定，測(cè)點(diǎn)在送風(fēng)口和排風(fēng)口之間連線方向上，高度為1.1m，均勻布置不少于3個(gè)。（2）評(píng)價(jià)原則 氣流流向應(yīng)符合GB194896.3.3條要求。 /0510第10頁(yè)第10頁(yè)HEPA濾器物理檢測(cè)HEPA濾器物理檢測(cè)項(xiàng) 目送風(fēng)系統(tǒng)HEPA濾器檢漏 排風(fēng)HEPA濾器檢漏 檢漏辦法粒子計(jì)數(shù)掃描法，執(zhí)行潔凈

6、室施工及驗(yàn)收規(guī)范（JGJ 71） 粒子計(jì)數(shù)掃描法，執(zhí)行潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范（JGJ 71） 檢漏工況送、排風(fēng)系統(tǒng)正常運(yùn)營(yíng) 關(guān)閉送風(fēng)，只開(kāi)排風(fēng)，室內(nèi)含塵濃度（0.5m）不小于5000粒/L 評(píng)價(jià)原則 超出3粒/L，即判斷為泄漏 第一道濾器，超出3粒/L，即判斷為泄漏；第二道濾器，超出2粒/升，即判斷為泄漏 /0511第11頁(yè)第11頁(yè)氣密性檢測(cè) 生物安全試驗(yàn)室緩沖間、半污染區(qū)、緩沖間和污染區(qū)房間氣密性應(yīng)按下列要求進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)價(jià)。1. BSL-3試驗(yàn)室應(yīng)通過(guò)直觀檢查證實(shí)圍護(hù)結(jié)構(gòu)密封完好。2. BSL-4試驗(yàn)室除了應(yīng)通過(guò)直觀檢查證實(shí)圍護(hù)結(jié)構(gòu)密封完好外，還應(yīng)進(jìn)行下列檢測(cè)和評(píng)價(jià)： /0512第12頁(yè)第12

7、頁(yè)氣密性檢測(cè)辦法一：壓力衰減試驗(yàn)A. 檢測(cè)辦法 關(guān)閉送風(fēng)氣密閥門(mén)，關(guān)閉門(mén)窗，啟動(dòng)排風(fēng)機(jī)，使室內(nèi)外壓差達(dá)到160Pa，然后關(guān)閉排風(fēng)機(jī)和排風(fēng)密閉閥。B. 評(píng)價(jià)原則 觀測(cè)微壓差計(jì)壓力上升速度，每分鐘上升不超出16Pa即為合格。 /0513第13頁(yè)第13頁(yè)氣密性檢測(cè)誘導(dǎo)泄漏試驗(yàn)A. 檢測(cè)辦法a在室內(nèi)靠近檢測(cè)部位,發(fā)生0.5m下列粒子NaCl氣溶膠，使粒徑局部濃度達(dá)到1106/m3以上。b. 在試驗(yàn)室四周外側(cè)，貼近要評(píng)估墻面和門(mén)口結(jié)構(gòu)連接處，用光學(xué)粒子計(jì)數(shù)器以大約30cm/min速度在離表面20cm處進(jìn)行掃描。c. 在敞開(kāi)房間門(mén)外，用光學(xué)粒子計(jì)數(shù)器60 cm處進(jìn)行掃描。B. 評(píng)價(jià)原則 結(jié)構(gòu)連接無(wú)泄漏，門(mén)

8、外60 cm處粒子濃度應(yīng)室內(nèi)粒子濃度0.1%。 /0514第14頁(yè)第14頁(yè)其它檢測(cè)項(xiàng)目 除上述檢測(cè)內(nèi)容之外，還需要溫度、濕度、噪聲和照度等檢測(cè)，這些參數(shù)檢測(cè)均應(yīng)按潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范(JGJ 71)檢測(cè)辦法進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果符合試驗(yàn)室生物安全通用要求 (GB19489)和生物安全試驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范(GB50346-) 或生物安全試驗(yàn)室設(shè)計(jì)指標(biāo)即可。 /0515第15頁(yè)第15頁(yè)HEPA濾器對(duì)微生物氣溶膠濾除率生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)表達(dá)三方面防護(hù)效果：一是HEPA濾器對(duì)微生物氣溶膠濾除效果；二是能夠反應(yīng)出安裝過(guò)程中對(duì)HEPA濾器有無(wú)損傷；三是反應(yīng)出HEPA濾器安裝是否嚴(yán)密，不漏氣。因此，在

9、對(duì)生物安全試驗(yàn)室排風(fēng)口HEPA濾器物理檢測(cè)完畢后，必須用經(jīng)確認(rèn)生物學(xué)辦法進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證。 /0516第16頁(yè)第16頁(yè)HEPA濾器對(duì)微生物氣溶膠濾除率生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證生物安全試驗(yàn)室排風(fēng)口HEPA濾器生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證主要包括下列幾種環(huán)節(jié)：檢查試驗(yàn)室是否處于正常工作狀態(tài)；本底采樣；發(fā)生批示微生物氣溶膠和批示微生物氣溶膠本底采樣；一級(jí)和二級(jí)HEPA濾器后空氣樣本采集；采集樣本培養(yǎng)計(jì)數(shù)和HEPA濾器濾除率計(jì)算。 /0517第17頁(yè)第17頁(yè)二、生物安全試驗(yàn)室設(shè)備檢測(cè)驗(yàn)證 生物安全試驗(yàn)室設(shè)備檢測(cè)驗(yàn)證主要是生物安全柜和安全罩。高壓滅菌器檢測(cè)驗(yàn)證，國(guó)家已有相關(guān)技術(shù)原則，參考執(zhí)行即可。 /0518第18頁(yè)第18頁(yè)生物安

10、全柜檢測(cè)和驗(yàn)證級(jí)生物安全柜在出廠前就已經(jīng)完畢了物理（包括噪聲、照度、向內(nèi)風(fēng)速、下送風(fēng)速、氣流流型等）和生物學(xué)檢測(cè)驗(yàn)證，應(yīng)有檢測(cè)匯報(bào)。生物安全柜在試驗(yàn)室安裝后，應(yīng)進(jìn)行全面檢測(cè)，尤其是生物學(xué)檢測(cè)，包括人員保護(hù)、樣品保護(hù)、交叉污染保護(hù)和出風(fēng)口泄漏檢測(cè)驗(yàn)證。 /0519第19頁(yè)第19頁(yè)生物安全柜檢測(cè)和驗(yàn)證人員保護(hù)檢測(cè)驗(yàn)證 人員保護(hù)檢測(cè)驗(yàn)證詳細(xì)操作辦法能夠參考美國(guó)國(guó)家原則級(jí)（層流）生物安全柜（NSF49）。合格鑒定原則：從6個(gè)AGI-30采樣器采集到粘質(zhì)沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌CFU數(shù)量，在每次檢測(cè)時(shí)不得超出10個(gè)。采樣時(shí)間達(dá)30 min時(shí)，裂隙式空氣采樣器平板計(jì)數(shù)不得超出5個(gè)菌落。必須重復(fù)3次試驗(yàn)。對(duì)照

11、平板必須是陽(yáng)性結(jié)果。當(dāng)平板含有300個(gè)以上粘質(zhì)沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落時(shí)，即為陽(yáng)性。 /0520第20頁(yè)第20頁(yè)生物安全柜檢測(cè)和驗(yàn)證試驗(yàn)樣品保護(hù)檢測(cè)驗(yàn)證 試驗(yàn)樣品保護(hù)檢測(cè)驗(yàn)證詳細(xì)操作辦法能夠參考美國(guó)國(guó)家原則NSF49。合格鑒定原則：每次試驗(yàn)中，在瓊脂平板上粘質(zhì)沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落數(shù)不得超出5個(gè)。必須重復(fù)3次試驗(yàn)。對(duì)照平板必須是陽(yáng)性結(jié)果。當(dāng)平板含有300個(gè)以上粘質(zhì)沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落時(shí)，即為陽(yáng)性。 /0521第21頁(yè)第21頁(yè)生物安全柜檢測(cè)和驗(yàn)證交叉污染檢測(cè)驗(yàn)證 交叉污染檢測(cè)驗(yàn)證詳細(xì)操作辦法能夠參考美國(guó)國(guó)家原則NSF49。合格鑒定原則：從襲擊側(cè)壁到距離側(cè)壁36 cm之間一些瓊脂平板能夠得到粘質(zhì)沙雷氏菌或枯草芽孢桿菌菌落，它們用作陽(yáng)性對(duì)照。每次測(cè)試時(shí)，在不小于38 cm中心處瓊脂平板所得到菌落總數(shù)不得超出2個(gè)。在安全柜左側(cè)和右側(cè)各做3次重復(fù)試驗(yàn)。 /0522第22頁(yè)第22頁(yè)生物安全柜檢測(cè)和驗(yàn)證出風(fēng)口泄漏檢測(cè)驗(yàn)證 出風(fēng)口泄漏檢測(cè)是在美國(guó)NSF49原則、歐洲EN12469中沒(méi)有檢測(cè)驗(yàn)證項(xiàng)目。造成出風(fēng)口泄漏主要原因有兩個(gè)：一是HEPA濾器與固定框之間密封不嚴(yán)，二是HEPA濾器在安裝過(guò)程中有損傷。對(duì)出風(fēng)口生物檢測(cè)驗(yàn)證能夠及時(shí)發(fā)覺(jué)泄漏。出風(fēng)口泄漏檢測(cè)驗(yàn)證詳細(xì)操作辦法能夠參考美國(guó)國(guó)家原則NSF49人員保護(hù)測(cè)試驗(yàn)證中氣溶膠發(fā)生，采樣用Andersen 2級(jí)采樣器在出風(fēng)口處采樣30m