實(shí)驗(yàn)二PMSG生物效價(jià)測定市公開課獲獎?wù)n件

1、試驗(yàn)二 PMSG生物學(xué)效價(jià)測定一試驗(yàn)?zāi)康?掌握用生物測定法測定PMSG生物學(xué)效價(jià)。 二試驗(yàn)原理 PMSG含有FSH、LH成份，因此含有FSH、LH相同生物學(xué)作用，即能促使性成熟前小鼠子宮增大、增進(jìn)卵泡發(fā)育、排卵和黃體形成； 對雄性動物含有增進(jìn)精細(xì)管發(fā)育和性細(xì)胞分化。第1頁第1頁三、測試材料（一）試驗(yàn)動物：取健康無傷殘2428日齡(即將達(dá)到性成熟日齡)、體重1215g，同源雌幼小鼠。各測試組內(nèi)試驗(yàn)鼠出生日齡相差不得超出5天，體重相差不得超出3g。第2頁第2頁(二)測試樣品：孕馬血清PMSG生物制劑。(三)器械及藥物：1ml注射器、4號針頭、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管，酒精棉球、生理

2、鹽水、剪子、大號鑷子、帶齒小鑷子、鼠解剖臺(或用小木板及圖釘)、玻璃片(2030cm)，鼠罐、小玻瓶。第3頁第3頁四、測試方法（一）測試組確實(shí)定：每取0.1ml孕馬血清（0.5 IU/l），按表加入不同量生理鹽水，稀釋成不同濃度，作為各測試組。（二）對照組：注射生理鹽水。測定辦法：生物測定法、細(xì)胞培養(yǎng)生物測定法、免疫測定法、受體測定法第4頁第4頁第5頁第5頁第6頁第6頁五、檢定方法(一)注射1注射次數(shù) 按各測試組要求，按照稀釋成不同濃度一定劑量。每個測試組需注射3只雌幼小鼠，孕馬血清只作一次注射。 對照組亦為3只雌幼小鼠，在每次給各測試組小鼠注射同時，注射一樣劑量生理鹽水。2注射部位 按照各組

3、要求藥品劑量,準(zhǔn)確地注射于小鼠皮下,注意不得將藥液注射于胸腔或腹腔內(nèi)，亦不可溢漏于體表。第7頁第7頁3劑量 每只小鼠注射劑量為0.2ml。4注射辦法 用手指捏住小鼠頭及尾部固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮膚，將注射針頭平插刺入皮下，將針頭微向上挑起不露出針尖時，再注入藥物。伴隨藥物推入，在皮下可看到鼓起一個小泡，即證實(shí)藥物確已注入皮下部位。注射針頭宜選取小號細(xì)針頭,以預(yù)防注射后藥液從針孔處逸出。第8頁第8頁(二)剖檢1.剖檢時間 測試小鼠應(yīng)在注射藥物后72-78h內(nèi)進(jìn)行。2.剖檢環(huán)節(jié)(1)處死小鼠 采用頸椎脫臼法處死小鼠。將小鼠頭部固定，用力牽拉鼠尾，可感到頸椎部位脫臼振動。也可采用將小鼠

4、頭部經(jīng)撞擊致死。然后用圖釘將小鼠呈仰臥姿勢固定于小木板上或鼠解剖臺上。(2)剖腹 將處死并固定好小鼠，沿腹中線剪開腹腔，向前方揭去腸胃內(nèi)臟，即可在腎臟后方看到兩側(cè)呈乳白色卵巢及與輸尿管相平行兩子官角。第9頁第9頁(3)組織剝離 將卵巢及子宮周圍組織剝離，于膀胱后陰道段剪斷，向上提起即可將子宮及卵巢摘出。(4)剔除附屬組織 按各測試組順序，將摘出子宮平置于玻璃板上，剔除子宮周圍附屬組織。為了預(yù)防子宮干涸，可滴上數(shù)滴生理鹽水浸潤。 第10頁第10頁(三)效價(jià)擬定 將各測試組雌幼小鼠子宮與對照組子宮相對比觀測。在每組3只雌幼小鼠中，若有2只鼠子宮增大一倍者，則擬定該組為陽性反應(yīng)組。依據(jù)各測試組中以呈

5、陽性反應(yīng)最低濃度組效價(jià)值，換算出每毫升孕馬血清中含有小鼠單位。取最低有效劑量組，將其分母5，即為1ml血清樣品中含PMSG小鼠單位數(shù)。 第11頁第11頁表1 孕馬血清稀釋倍數(shù)折算鼠單位表組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實(shí)際鼠體內(nèi)血清量（ml）每ml血清中含有小鼠單位10.91/100.231/505021.21/130.231/656531.51/160.231/808041.81/190.231/959552.11/220.231/11011062.41/250.231/12512572.71/280.231/14014083.01/

6、310.231/15515593.31/340.231/170170103.61/370.231/185185第12頁第12頁組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實(shí)際鼠體內(nèi)血清量（ml）陽性小鼠數(shù)量（只）10.91/100.231/5021.51/160.231/8032.11/220.231/11042.71/280.231/14053.31/340.231/1706對照組30動物科學(xué)1001班0. 2第13頁第13頁組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實(shí)際鼠體內(nèi)血清量（ml）陽性小鼠數(shù)量（只）11.21/130.231/6521.81/190.231/9532.41/250.231/12