復(fù)方蜥蜴散對(duì)慢性萎縮性胃炎模型大鼠腫瘤壞死因子α及胃黏膜病

1、復(fù)方蜥蜴散對(duì)慢性萎縮性胃炎模型大鼠腫瘤壞死因子-及胃黏膜病【摘要】目的觀察復(fù)方蜥蜴散對(duì)慢性萎縮性胃炎hrniAtrphiGastritis，AG模型大鼠腫瘤壞死因子-TNF及胃黏膜病理形態(tài)學(xué)的影響,討論其治療AG的作用機(jī)制。方法將90只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，復(fù)方蜥蜴散大、中、小劑量組及維酶素組,除正常組以外，均采取55熱鹽水、2%水楊酸、20l/L脫氧膽酸鈉3個(gè)致萎縮因素配合饑飽失常造成AG模型大鼠,分別運(yùn)用復(fù)方蜥蜴散大、中、小劑量及維酶素治療,觀察各組大鼠血清TNF的含量及胃黏膜的病理學(xué)形態(tài)。結(jié)果蜥蜴散大、中、小劑量組血清中TNF-含量顯著低于模型組P0.01，蜥蜴散大、中劑量

2、組血清中TNF-含量顯著低于維酶素組P0.05。各組胃黏膜組織形態(tài)學(xué)觀察，復(fù)方蜥蜴散組較模型組及維酶素組有明顯改善。結(jié)論復(fù)方蜥蜴散可以使AG模型大鼠血清中TNF含量降低，可以明顯改善AG模型大鼠胃黏膜的炎癥、萎縮性病變,對(duì)AG模型大鼠有明顯的治療作用。【關(guān)鍵詞】慢性萎縮性胃炎復(fù)方蜥蜴散腫瘤壞死因子-病理組織學(xué)Abstrat：bjetiveTinvestigatetheeffetfpundlizardspder(TLP),apundhineseediine,ntheturnersisfatr(TNF),andgastriusapathlgialhangeinratdelfhrniAtrphiGa

3、stritisAG.andtheehaniss.ethdsNinetyaleSDratsererandlydividedintsixgrups:thenralntrlgrup,thedelgrup，theVitaenzyentrlgrup，thel-dse,iddle-dseandhigh-dseTLPgrups.Exeptnralntrlgrup,thergrupstk55htaterhihntained150g/LNal,2%Salieylasand20l/Lsdiudexyehlate,binedithvereatingandhungering.Allratseretreatedithd

4、ifferentediines，afteranththeratseresarified，andthEirgastriusaandseruerelletedtdetettheserulevelfTNFandbservethehistlgyusahangesbyirspe.Resultsparedithdelgrup，theserulevelfTNFintheratsfallTLPgrupsassignifiantlylered(P0.01).paredithVitaenzyentrlgruptheserulevelfTNFintheratsfiddle-dseandhigh-dseTLPgrup

5、sassignifiantlylered(P0.05),andthepathlgialhangeseresignifiant.nlusinTLPansignifiantlyadjustlevelfTNF,andhasprtetivefuntinagainstthegastriusalinjury.Keyrds：hrniAtrphiGastritis(AG);Thepundlizardspder;TurPutreseneFatr(TNF);Pathlgialhistlgy慢性萎縮性胃炎(hrniAtrphiGastritis，AG)是消化系統(tǒng)的常見(jiàn)病，其以胃黏膜變雹固有腺體萎縮或伴有腸化、異型增

6、生為主要病理改變。AG與胃息肉同時(shí)存在或腸化生合并中度或高度不典型增生時(shí)可發(fā)生癌變，張玲霞等1對(duì)AG患者1020年的隨訪發(fā)現(xiàn),有5%10%的患者發(fā)生了胃癌,H將其列為胃癌前期狀態(tài)。本課題以朱西杰教授治療AG療效確切的臨床驗(yàn)方復(fù)方蜥蜴散(thepundLizardsPder，TLP；以下簡(jiǎn)稱蜥蜴散),來(lái)觀察其對(duì)AG模型大鼠腫瘤壞死因子TurNersisFatr，TNF及胃黏膜病理組織學(xué)的影響，討論其對(duì)AG的治療機(jī)理，為臨床治療提供根據(jù)。1材料與儀器1.2藥物及試劑蜥蜴散：由蜥蜴粉、鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白術(shù)粉、半枝蓮粉等組成，由寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)消化病研究所提供。維酶素：0.2g/片,新鄉(xiāng)恒長(zhǎng)遠(yuǎn)藥

7、業(yè)消費(fèi)，批號(hào)20220311；脫氧膽酸鈉：北京市海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠消費(fèi)(含量95%)，批號(hào):080716；氯化鈉：天津市福晨化學(xué)試劑廠消費(fèi)(含量99.5%)，批號(hào):20220624；水楊酸：天津市福晨化學(xué)試劑廠消費(fèi)(含量99.5%)，批號(hào)：20220427；腫瘤壞死因子放射免疫分析藥盒:北京科美東雅生物技術(shù)出品，批號(hào)：S20223093。2方法2.1藥物配制脫氧膽酸鈉溶液:用生理鹽水配成20l/L的脫氧膽酸鈉溶液(pH值77.8)。氯化鈉溶液:用雙蒸水配成150g/L的氯化鈉溶液，臨用時(shí)加熱至55；用雙蒸水配成0.9%的氯化鈉溶液。水楊酸溶液:用生理鹽水配成濃度為2%的水楊酸溶液。維酶素

8、混懸液:維酶素片研末，用生理鹽水配成0.1/1的混懸液。蜥蜴散糊劑：蜥蜴散經(jīng)過(guò)粉碎、高溫滅菌、蒸2h，晾干后，用雙蒸水分別配成0.28，0.14，0.07g/l糊劑混懸液裝瓶，4冰箱保存?zhèn)溆谩?.2動(dòng)物分組將90只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組A組、模型組B組、維酶素組組、蜥蜴散大劑量組D組、蜥蜴散中劑量組E組、蜥蜴散小劑量組F組6組，每組15只，除A組外，其余大鼠均給予造模處理。2.3動(dòng)物模型的建立及處理措施2.3.1AG模型的建立參閱大量的文獻(xiàn)資料26，結(jié)合中西醫(yī)理論，詳細(xì)的造模方法為配制濃度為150g/L鹽水，加熱到55，10l/kgd，灌胃，1次/d；2%水楊酸溶液10l/kgd，灌胃，1

9、次/d；20l/L脫氧膽酸鈉溶液，自由飲用;同時(shí)配以饑飽失常處理，即2d飽食，ld禁食。BF組按上述造模方法造模90d，A組大鼠充足供給標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料及清潔自來(lái)水。2.3.2處理措施分別在造模第30天、60天、90天各組處死1只大鼠，取胃黏膜做病檢以證實(shí)造模成功后，A組大鼠仍然充足供食及飲清潔自來(lái)水，BF組大鼠那么停頓造模，A組與B組大鼠開(kāi)場(chǎng)給予生理鹽水10l/(kgd)灌胃，1次/d；組大鼠給予0.1/l維酶素混懸液10l/(kgd)灌胃，1次/d；D組、E組、F組大鼠分別給予蜥蜴散大劑量20g/kgd、中劑量10g/kgd、小劑量5g/kgd灌胃，1次/d；連續(xù)用藥1個(gè)月(蜥蜴散中劑量按照正

10、常人劑量換算而來(lái)，大劑量加倍，小劑量減半)。2.4標(biāo)本采集和處理至預(yù)定階段，大鼠禁食24h后，全部用l0%水合氯醛溶液腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠，心臟取血5l置于無(wú)菌試管，待測(cè)。剖腹，距賁門(mén)和幽門(mén)1.5離斷取出全胃并處死。沿胃大彎側(cè)剖開(kāi)，冰生理鹽水沖洗后，濾紙吸干鋪開(kāi)。胃黏膜標(biāo)本固定于10%的中性福爾馬林溶液中，固定48h后剪成約2的條狀物，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色，觀察病理組織學(xué)改變。2.5用放射免疫法測(cè)定血清TNF取血2l，在4，4000r/in條件下離心10in，取上清液，零下20凍存。測(cè)定方法采用固相放射免疫檢測(cè)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，在曲線上查得的待測(cè)樣品的含量，以ng/l表示。2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處

11、理TNF數(shù)據(jù)采用s表示，數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。3結(jié)果3.2胃黏膜病理組織學(xué)結(jié)果光鏡觀察見(jiàn)圖16。結(jié)果說(shuō)明：黏膜上皮完好,固有黏膜密集排列的腺體,散在淋巴細(xì)胞,未見(jiàn)胃黏膜萎縮圖1。大鼠胃黏膜顯示慢性炎，黏膜腺萎縮，固有層淋巴細(xì)胞灶性侵潤(rùn)，淋巴濾泡形成，黏膜基層增厚圖2?？梢?jiàn)大鼠黏膜固有腺體輕度萎縮,淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，小血管擴(kuò)張充血纖維組織增生，黏膜下肌層增厚圖3。大鼠胃黏膜可見(jiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞散在浸潤(rùn)圖4。大鼠胃黏膜可見(jiàn)固有層淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn),小血管擴(kuò)張充血圖5。在鼠黏膜組織呈慢性炎癥,黏膜固有層可見(jiàn)多量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),黏膜下基層增厚圖6。4討論本

12、實(shí)驗(yàn)以20l/L的脫氧膽酸鈉模擬膽汁反流，用2%水楊酸鈉損傷胃黏膜,并用濃度為150g/L，55熱鹽水模擬人類高鹽飲食以及過(guò)熱飲食對(duì)胃黏膜的損害，同時(shí)配合饑飽失常對(duì)胃黏膜進(jìn)展損害,建立大鼠AG模型。病理檢查發(fā)現(xiàn)大鼠胃腺體數(shù)目和厚度降低,固有膜中各種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(主要是淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞),黏膜肌層增厚,部分大鼠出現(xiàn)腸化。其病理形態(tài)符合AG的臨床表現(xiàn),說(shuō)明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型復(fù)制成功。TNF-是特異性免疫應(yīng)答與炎癥反響之間的一種重要介質(zhì)，在炎癥的發(fā)生、開(kāi)展過(guò)程起重要作用，是炎癥趨化因子和激活因子7。適量的TNF-可參與免疫細(xì)胞的活化炎癥反響，具有抗感染、抗病毒和抗腫瘤作用；而過(guò)量的TNF-那么增強(qiáng)微血管壁

13、通透性，改變黏膜血管內(nèi)皮細(xì)胞反響性，致微血管內(nèi)凝血，導(dǎo)致細(xì)胞破壞，溶酶體漏出，炎性介質(zhì)釋放，使黏膜營(yíng)養(yǎng)不良。同時(shí)，還可以趨化中性粒細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬殺傷才能,增強(qiáng)炎癥部分淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和增殖，從而誘發(fā)了一系列的炎癥改變，加重黏膜炎癥反響。尤其是在中、重度萎縮性胃炎的病理改變中可能存在著TNF-所致的免疫損傷。其在體內(nèi)的表達(dá)也影響腫瘤的發(fā)生、開(kāi)展。AG屬中醫(yī)學(xué)“胃脘痛“胃痞等范疇，中醫(yī)認(rèn)為AG多由濁毒瘀阻胃絡(luò)，導(dǎo)致黏膜失潤(rùn)，胃液減少,腺體萎縮,黏膜變蒼灰色。筆者認(rèn)為：蜥蜴散對(duì)AG的治療機(jī)制可能有：抑制TNF-的特異性免疫應(yīng)答，阻止抗原產(chǎn)生不適當(dāng)應(yīng)答所造成組織損傷或器官功能障礙，即阻止其產(chǎn)生超敏反響。

14、通過(guò)朱西杰教授多年臨床觀察復(fù)方蜥蜴散具有脫敏作用8。修復(fù)受損黏膜，蜥蜴生活在沙漠之中，能適應(yīng)惡劣的自然環(huán)境,而且遇敵常斷其尾以逃生，不久尾巴可自行重生，說(shuō)明蜥蜴對(duì)組織損傷有再生和修復(fù)功能。另再配以質(zhì)地較粘的中藥或礦物質(zhì),配成細(xì)粉,可使其粘附于胃黏膜外表，充分發(fā)揮藥力，促進(jìn)部分血液循壞,改善組織營(yíng)養(yǎng)，減少炎癥滲出，促進(jìn)炎癥吸收、減少上皮細(xì)胞增生，更有利于黏膜修復(fù)、病理改變的逆轉(zhuǎn)911。通過(guò)病理組織學(xué)觀察，蜥蜴散大劑量組黏膜修復(fù)作用顯著高于維酶素組，說(shuō)明蜥蜴散對(duì)AG大鼠胃黏膜細(xì)胞的過(guò)度增殖有抑制作用，并部分逆轉(zhuǎn)萎縮胃黏膜的病理組織學(xué)的變化。改善微血管內(nèi)凝血，減少炎癥細(xì)胞的釋放，改善黏膜營(yíng)養(yǎng)不良的狀

15、況。復(fù)方蜥蜴散以蜥蜴科的動(dòng)物麗斑麻蜥的全體(Ereiasarguspeters)為主藥，配合鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白術(shù)粉、半枝蓮等以活血化瘀為主。研究發(fā)現(xiàn)，蜥蜴散大、中、小劑量組血清中TNF-含量顯著低于模型組P0.01，蜥蜴散大、中劑量組血清中TNF-含量顯著低于維霉素組P0.05，說(shuō)明蜥蜴具有脫敏，活血化瘀功能，能改善TNF-程度升高引起的微血管內(nèi)凝血，從而改善粘膜營(yíng)養(yǎng)不良的狀況，同時(shí)抑制TNF-的釋放，并阻止其激活中性粒產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)，減少組織的損傷和炎癥，對(duì)萎縮的胃黏膜有很好的修復(fù)作用，對(duì)胃黏膜組織的保護(hù)具有積極的意義。但由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，對(duì)其作用機(jī)制還要從多環(huán)節(jié)進(jìn)一步研究?！緟?/p>

16、考文獻(xiàn)】1張玲霞，張瀝.細(xì)胞凋亡及其調(diào)控基因與萎縮性胃炎J.世界華人消化雜志，2002，10(5):581.2姒健敏，吳加國(guó)，曹倩，等.鼠慢性萎縮性胃炎模型的建立及致萎縮因素討論J.中華消化雜志，2001，2(2)：75.3邵雪輝，王建國(guó).大鼠慢性萎縮性胃炎模型的建立J.張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，19(2)：9.4張瀝，張玲霞，徐俊榮，等.熱鹽水導(dǎo)致大鼠萎縮性胃炎動(dòng)物模型建立J.世界華人消化雜志，2002，10(5):571.5陳小野，鄒世潔.大鼠AG證病結(jié)合模型的造模方法和思路J.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2002，19(3):35.6鄒世潔，鄒外一，陳小野，等.大鼠慢性萎縮性胃炎證病結(jié)合模型的臟器組織病理觀察J.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2022，177：983.7FujiaraY，ArakaaT，F(xiàn)ukudaT，etal.Interleukin-8siulatesleukyteigratinarssanlayerfulturedrabbitTNF，IL-1,IL-8andIL-lr