細(xì)菌性食源性疾病及其病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程

1、細(xì)菌性食源性疾病及其病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程小組成員張妤、韋琰琰、吳丹丹、蘇靖、李曉晶1細(xì)菌性食源性疾病 其主要臨床特征兩個(gè)案例沙門氏菌金黃色葡萄球菌細(xì)菌性食源性疾病概述01病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程02兩種種常見病原菌的檢測(cè)03細(xì)菌性食源性疾病及其病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、采樣、送檢樣品處理及檢測(cè)結(jié)果判定及報(bào)告檢驗(yàn)樣品處置及檢出菌種保存2細(xì)菌性食源性疾病由細(xì)菌通過攝食而進(jìn)入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。屬食源性疾病范疇，主要包括細(xì)菌性腸道傳染病和細(xì)菌性食物中毒3細(xì)菌性腸道傳染病屬我國(guó)法定傳染病，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及新近參照傳染病管理的由腸出血性大腸埃希菌O157引起的出血性腸炎4細(xì)菌性食物

2、中毒 人體攝入了被細(xì)菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病 如：沙門氏菌（除傷寒、甲、乙、丙、副傷寒沙門菌）、副溶血弧菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希氏菌（除O157）、葡萄球菌（腸毒素）、空腸彎曲菌、單增李斯特菌等5細(xì)菌性食源性疾病有關(guān)癥狀與病原學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)樣品關(guān)系6廣州大學(xué)城 食物中毒事件廣州中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)城校區(qū)第二飯?zhí)迷?006年4月12日發(fā)生的食物中毒事件，累計(jì)有258名學(xué)生及員工到醫(yī)院就診，實(shí)際符合中毒的病例有206人。截至4月18日上午，全部就診患者治愈出院。7事件原因經(jīng)調(diào)查，此事件被確認(rèn)為由沙門氏菌引起的食物中毒。造成食物中毒的主要原因是廣州中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)城校區(qū)第

3、二飯?zhí)檬⒀b食品的容器、分切熟食的菜板等工具沒有按規(guī)定進(jìn)行消毒。4月10和11日這兩天恰逢廣州氣溫高，細(xì)菌繁殖快，4月11日向?qū)W生供應(yīng)的午餐、晚餐中，飯?zhí)檬称肥艿搅巳萜骱筒税迳夏c炎沙門氏菌的污染。番禺區(qū)衛(wèi)生監(jiān)督所對(duì)這一飯?zhí)米龀隽说蹁N衛(wèi)生許可證和罰款5萬元的處理。8肉毒梭菌 新疆察布查爾地區(qū)是我國(guó)肉毒梭菌中毒多發(fā)地區(qū)，以該地區(qū)為例，其土壤中該菌檢出率為22.2，未開墾荒地該菌檢出率為 28.25，該地區(qū)糧谷、豆類經(jīng)厭氧條件的發(fā)酵制品該菌檢出率分別為12.6和14.88。 青海省19601995年間共發(fā)生肉毒中毒45起，主要分布在牧區(qū)，中毒食品是動(dòng)物性食品主要是密封越冬牛肉，食用方式以生食為主。9細(xì)

4、菌性食源性疾病檢驗(yàn)規(guī)程1. 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查2. 檢驗(yàn)程序3. 采樣及送檢4.樣品處理及檢驗(yàn)5. 結(jié)果判定及報(bào)告6. 檢驗(yàn)樣品處置及檢出菌種保存10現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查根據(jù)患者的臨床癥狀，核實(shí)診斷，初步判斷是否屬食物中毒或食源性疾病 現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)個(gè)案調(diào)查 衛(wèi)生學(xué)調(diào)查 確定常見細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒的樣品采集種類與范圍和相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目 11檢驗(yàn)程序樣品采集及送檢分離培養(yǎng)全面鑒定純培養(yǎng)初篩試驗(yàn)初步檢測(cè)直接鏡檢（涂片染色鏡檢涂片染色鏡檢）活菌數(shù)增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)12樣品采集無菌采樣方法采集及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣送檢申請(qǐng)單詳細(xì)填明檢樣名稱、來源、送檢時(shí)間、中毒情況、患者主要臨床癥狀、檢驗(yàn)項(xiàng)目等 13樣品采集

5、注意事項(xiàng)采樣用的試管、瓶子、盛器、剪刀、鑷子、棉拭等均應(yīng)無菌采樣用的生理鹽水、培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合采樣所需要的試劑量采樣量須滿足必須開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，食品采樣應(yīng)盡量多于25g（ml）以上采樣的同時(shí)，應(yīng)及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗(yàn)室，并有交接手續(xù) 14樣品送檢檢樣采取后立即由專人在3小時(shí)內(nèi)送區(qū)縣疾病預(yù)防控制中心或（和）市疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 送檢檢樣時(shí)，應(yīng)附送采樣送檢申請(qǐng)單，并按要求注意冷藏 樣品送檢人員應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室收樣或檢驗(yàn)人員履行樣品交接手續(xù)15細(xì)菌性食源性疾病的檢驗(yàn)宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準(zhǔn)確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相

6、同 16初步檢測(cè)按國(guó)標(biāo)菌落總數(shù)測(cè)定方法進(jìn)行，以了解可疑食品被污染情況 直接涂片染色鏡檢觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細(xì)菌如霍亂弧菌、彎曲菌，為進(jìn)一步的檢驗(yàn)提供有用的信息一般活菌數(shù)的測(cè)定17分離培養(yǎng)檢樣的處理非病源檢樣包括可疑食物、水樣及環(huán)節(jié)樣品等最好按110的比例用胰大豆胨肉湯（TSB）37預(yù)增菌46h以保護(hù)和放大目的病原菌 病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預(yù)增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的或是從業(yè)人員帶菌查源的檢樣應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求而進(jìn)行預(yù)增菌處理（直接插入2ml TSB管37預(yù)增菌46h ）18直接培養(yǎng) 將處理后的非病源檢樣及無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求直接接種于各相應(yīng)培養(yǎng)

7、基 19增菌培養(yǎng)及接種將預(yù)增菌處理后的非病源檢樣、服過抗生素后采集的病源檢樣及從業(yè)人員帶菌查源的檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求接種各相應(yīng)增菌液培養(yǎng) 增菌培養(yǎng)后接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基 20可疑菌落的選取沙門ss平板沙門ws平板21金葡bp金葡 血平板22初篩試驗(yàn)克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2沙門 TSI23PCRVIDAS24可疑菌的鑒定 全面生化試驗(yàn)（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鑒定等） 噬菌體試驗(yàn) 血清分型 毒素或毒素基因測(cè)試 25檢驗(yàn)結(jié)果的判定應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考 應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的

8、病原體的統(tǒng)一性 26檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 檢驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)在收到食源性細(xì)菌性突發(fā)事件采樣送檢申請(qǐng)單后立即進(jìn)行樣品檢驗(yàn)，并在5日內(nèi)出具檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。特殊情況需延長(zhǎng)出具檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)限的，應(yīng)報(bào)相應(yīng)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)一旦檢驗(yàn)結(jié)果確定后，在檢驗(yàn)報(bào)告還未完成前可先向有關(guān)部門電話報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果檢驗(yàn)報(bào)告送達(dá)單位：市、區(qū)、縣疾控中心實(shí)驗(yàn)室完成樣品檢驗(yàn)結(jié)果，將檢驗(yàn)報(bào)告送達(dá)樣品送檢單位27檢驗(yàn)樣品的處置 市、區(qū)、縣疾控中心在未完成細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒的樣品檢驗(yàn)工作前，所有采集的樣品應(yīng)在合適的條件下保存，其中對(duì)經(jīng)檢驗(yàn)確屬陰性的或已經(jīng)檢測(cè)出病原菌并鑒定的樣品完成檢驗(yàn)報(bào)告后即可消毒銷毀；對(duì)經(jīng)檢驗(yàn)為可疑的、暫時(shí)無法確認(rèn)和需要復(fù)測(cè)的標(biāo)

9、本應(yīng)予保留 28檢出病原菌的保存 區(qū)縣疾控中心完成對(duì)細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒樣品檢驗(yàn)后，對(duì)檢到的細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒病原菌菌株應(yīng)在3日內(nèi)由專人送市疾控中心，由市疾控中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存；市疾控中心對(duì)細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒標(biāo)本中檢到的病原菌，移交市疾控中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存 29細(xì)菌檢驗(yàn)重要篩檢試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)接觸酶試驗(yàn)30氧化酶試驗(yàn)用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細(xì)菌革蘭氏陰性桿菌陽性反應(yīng) 弧菌科陰性反應(yīng)腸桿菌科31接觸酶試驗(yàn)用于分辨G+球菌中葡萄球菌及鏈球菌革蘭氏陽性球菌陽性反應(yīng)葡萄球菌陰性反應(yīng)鏈球菌接觸酶接觸酶+32細(xì)菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗(yàn)常規(guī)程序33兩種常見病原菌的檢測(cè)沙門氏菌 1 mL EB10mL