凍干保護(hù)劑對(duì)HB有效組分脂質(zhì)體包封率和粒徑的影響

1、凍干庇護(hù)劑對(duì)HB有用組分脂質(zhì)體包封率和粒徑的影響劉娟胡水根卞俊汪國華柯天地【摘要】目的研究差異凍干庇護(hù)劑種類和濃度對(duì)HB有用組分脂質(zhì)體凍干前后包封率寧靜均粒徑的影響。要領(lǐng)按16個(gè)處方制備了HB有用組分脂質(zhì)體，接納熒光分光光度法測(cè)定包封率，用顯微鏡和數(shù)碼圖象闡發(fā)軟件測(cè)定了均勻粒徑，通過凍干前后脂質(zhì)體包封率和粒徑的比力優(yōu)選出最正確的凍干庇護(hù)劑。結(jié)果最正確凍干庇護(hù)劑為甘露醇和二元庇護(hù)劑蔗糖-甘氨酸，包封率到達(dá)69.91%和66.70%，外不雅結(jié)果精良，比例別離為，甘露醇PHHB=410.50.2；蔗糖甘氨酸PHHB=40.810.50.2。結(jié)論凍干庇護(hù)劑可淘汰脂質(zhì)體囊泡在凍干歷程受到的粉碎以及對(duì)脂質(zhì)

2、體包封率和粒徑的影響?！娟P(guān)鍵詞】脂質(zhì)體凍干庇護(hù)劑包封率粒徑Keyrds：Lipse;Lyprtetents;Entrapenteffiieny；PartilesizeHB有用組分是從海洋湖沼類貝殼軟體動(dòng)物園背角無齒蚌andntadiana(Lea)中提取的一組具抗腫瘤活性的糖卵白類物質(zhì)。將該有用組分制成了脂質(zhì)體后，經(jīng)小鼠移植性腫瘤體內(nèi)實(shí)行表白，口服具有抗腫瘤活性，對(duì)S180肉瘤，Leis肺癌，玄色素B16肺轉(zhuǎn)移癌的抑瘤率別離為48.76%,54.38%,52.66%1。但液態(tài)的HB有用組分脂質(zhì)體是混懸乳劑，只能貯存幾周2，在50以上的介質(zhì)情況中，布局不不變，磷酯雙分子層布局易氧化粉碎，不但影響

3、藥物包封率，且天生的溶血磷脂會(huì)危害機(jī)體3。為使脂質(zhì)體能在常溫下恒久不變貯存，比年來普及用冷凍枯燥技能制備凍干品。冷凍枯燥法是如今制備儲(chǔ)存脂質(zhì)體的最正確要領(lǐng)。但在冷凍歷程形成的冰晶使脂質(zhì)體聚攏交融，在冷凍息爭(zhēng)凍歷程中，膜表里冰晶形成速率差異引起滲出壓差，造成脂質(zhì)體裂解，以是在冷凍枯燥歷程中，應(yīng)參加冷凍庇護(hù)劑AP以淘汰粉碎。此法辦理了脂質(zhì)體制備歷程和儲(chǔ)存中的物理不變性和滲漏題目，并制止了不不變藥物的失活、剖析4。本實(shí)行在制備脂質(zhì)體中參加熒光素，預(yù)實(shí)行中創(chuàng)造藥物和熒光素存在著一樣的包封幾率，所測(cè)的熒光素包封率和藥物包封率根本同等，以是本實(shí)行接納熒光分光光度法測(cè)定藥物包封率。前文5已報(bào)道過對(duì)HB-a凍

4、干脂質(zhì)體粒徑及其漫衍的研究，本部門重要闡述差異凍干庇護(hù)劑對(duì)HB有用組分脂質(zhì)體在包封率、外不雅形態(tài)、粒徑的影響，為創(chuàng)立一種不變的脂質(zhì)劑型和脂質(zhì)體的貯存、包裝、運(yùn)輸?shù)确矫骈_發(fā)精良的途徑。1儀器與試藥1.1儀器SENR系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海申生科技，JY92-超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)寧波新芝生物科技股份，Z233K-2低溫高速離心機(jī)(HERLE)，F(xiàn)-3000熒光分光光度計(jì)HITAHI，AR2140電子闡發(fā)天平奧豪斯公司，SZ-93主動(dòng)雙重純水蒸餾器上海亞榮生化儀器廠，DLB2顯微鏡LEiA，QINV3數(shù)碼圖象闡發(fā)軟件LEIA，YRD1501A真空冷凍枯燥機(jī)安裝功率：6.7k，上海玉成枯燥裝備。1.2試藥膽固醇

5、hlesterl,H,闡發(fā)純，上海新興化工試劑研究所，批號(hào)030318，大豆卵磷脂SybeanLeithin,Serva入口分裝，生化試劑，上海伯奧生物科技公司，批號(hào)050314，熒光素Fluresein，闡發(fā)純，上海華東師范大學(xué)華工場(chǎng)，上海靈錦精致化工，批號(hào)20221212，HB廉價(jià)，蔗糖Surse，闡發(fā)純，上海試劑總廠，批號(hào)68-01-06，甘氨酸Glyine，生化試劑，上海南翔試劑，批號(hào)031010，甘露醇annitl，闡發(fā)純，國藥團(tuán)體化學(xué)試劑，批號(hào)F20220527，山梨醇D-Srbitl，生化試劑，上海試劑二廠，海藻糖Trehalse，生化試劑，上海熔巖精致化工，批號(hào)040801，聚

6、乙烯吡咯烷酮K30Plyvinlpyrrlidne，入口分裝，國藥團(tuán)體化學(xué)試劑，批號(hào)F20220531。磷酸氫二鈉Na2HP412H2，闡發(fā)純，上海凌峰化學(xué)試劑，磷酸二氫鈉NaH2P42H2，闡發(fā)純，江蘇太倉化工二廠，磷酸鹽緩沖液PBS：15lL-1氯化鈉，0.2lL-1Na2HP412H20.2lL-1NaH2P42H28119，pH7.4。2要領(lǐng)與結(jié)果2.1凍干庇護(hù)劑的選擇方案實(shí)行處方方案PHHB=500g250g100g1SuPHHB=410.50.22SuPHHB=210.50.23GlyPHHB=410.50.24GlyPHHB=210.50.25anPHHB=410.50.26an

7、PHHB=210.50.27D-SrPHHB=410.50.28D-SrPHHB=210.50.29TrePHHB=410.50.210TrePHHB=210.50.211SuGlyPHHB=40.810.50.212SuanPHHB=40.810.50.213SuD-SrPHHB=40.810.50.214SuTrePHHB=40.810.50.215SuPVPPHHB=40.810.50.216PHHB=10.50.22.2HB有用組分脂質(zhì)體的制備接納逆相蒸發(fā)法制備，取處方量的P和H溶于乙醚10l；另取HB、凍干庇護(hù)劑、熒光素1l8g/l溶于5l生理鹽水中，將兩溶液混淆于茄形瓶中，探針超聲

8、30s每超聲15s，間歇4s；40下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)撤除乙醚，至成黏稠溶液后再參加5l生理鹽水，探針超聲60s每超聲15s，間歇4s；繼承常壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1h,得HB有用組分脂質(zhì)體混懸乳濁液。2.3冷凍枯燥工藝取遍地方脂質(zhì)體混懸液1l，各3份，別離置于2.5l西林瓶中，熱電偶漫衍于瓶底。預(yù)凍歷程，在2h內(nèi)，樣品溫度到達(dá)-50。抽真空，保持真空度在10Pa擺布，舉行第1次枯燥歷程升華階段，連續(xù)17h，此時(shí)樣品溫度由-50升到2.4，擱板溫度保持在10。升高擱板溫度到40，舉行第2次枯燥歷程剖析階段，連續(xù)8h，凍干歷程竣事。凍干曲線見圖1。圖1凍干曲線略2.4熒光分光光度法測(cè)定包封率表1包封率測(cè)定結(jié)果略圖

9、2凍干前后包封率變革圖略按照凍干前后包封率的比力可以得出：在樣品包封率的進(jìn)步和凍干庇護(hù)方面：各庇護(hù)劑在濃度高時(shí)均比濃度低時(shí)庇護(hù)結(jié)果好。此中甘氨酸和甘露醇結(jié)果較好，二元庇護(hù)劑中以蔗糖-甘氨酸，蔗糖-海藻糖兩組的庇護(hù)結(jié)果較好。山梨醇和二元庇護(hù)劑蔗糖-甘露醇、蔗糖-山梨醇庇護(hù)結(jié)果稍差。而以蔗糖、海藻糖和蔗糖-PVP庇護(hù)劑結(jié)果最差。2.5凍干前后形態(tài)和粒徑的變革凍干后外不雅：3，4，5，6號(hào)為白色，別的均呈黃色。取16個(gè)處方的凍干后脂質(zhì)體用PBS復(fù)溶，用顯微鏡和數(shù)碼圖象闡發(fā)軟件對(duì)圖象舉行處置懲罰，測(cè)定粒徑。結(jié)果見表2及圖3。表2粒徑測(cè)定結(jié)果略圖3凍干前后粒徑變革圖略按照樣品凍干前后粒徑的比力得出：大部

10、門樣品在凍干后均勻粒徑均增大，在樣品粒徑的凍干庇護(hù)方面，凍干庇護(hù)劑越好，凍干前后的粒徑變革也應(yīng)越校從圖上闡發(fā)得：蔗糖，甘露醇和二元庇護(hù)劑蔗糖-甘氨酸，蔗糖-山梨醇庇護(hù)結(jié)果較好，甘氨酸，海藻糖，蔗糖-海藻糖，蔗糖-PVP庇護(hù)結(jié)果次之，而山梨醇和蔗糖-甘露醇庇護(hù)結(jié)果較差。3討論通過凍干前后脂質(zhì)體包封率和粒徑的比力，確定最正確凍干庇護(hù)劑為甘露醇和二元庇護(hù)劑蔗糖-甘氨酸，包封率到達(dá)69.91%和66.70%，比例別離為，甘露醇PHHB=410.50.2；蔗糖甘氨酸PHHB=40.810.50.2。冷凍枯燥技能早期重要用于生物質(zhì)料的保存，其原理是使用冷凍的溶液在低溫低壓條件下，從凍結(jié)狀態(tài)不顛末液態(tài)直接升

11、華撤除水分完成枯燥。冷凍枯燥技能可以使藥物保持原有的理化性子和生理活性，且有用身分喪失少少。別的，凍干制劑特有的疏松多孔布局，可以使藥物易于重新復(fù)水而規(guī)復(fù)生性，并且凍干制劑含水量低，易恒久不變保存。凍干制劑的低共熔態(tài)多孔布局在口腔內(nèi)可敏捷溶化釋出藥物，因此該技能如今也用于口服速溶制劑。PVP屬高分子凍干庇護(hù)劑，在血細(xì)胞凍干的研究中常常用到。我們也曾實(shí)行單獨(dú)用PVP作庇護(hù)劑，預(yù)實(shí)行歷程中，當(dāng)參加PVP后，PVP溶解性較差，溶液變得很濃重，大概由于PVP黏附了部門熒光素，使得實(shí)行測(cè)得的熒光強(qiáng)度值偏小許多，由此盤算所得的包封率也偏離現(xiàn)實(shí)程度，以是未接納PVP作庇護(hù)劑?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1胡水根,嚴(yán)惠芳,王奕軍,等.園背角無齒蚌有用身分脂質(zhì)體抗小鼠腫瘤實(shí)行研究J.中國海洋藥物,2022,94(4)：23.2vanindenE,relinDJ.Shrtterstabilityffreezedried,lyprtetedlipsesJ.JntrlledRelease,1999,58(1)：69.3劉占杰.脂質(zhì)體藥物低溫冷凍枯燥的實(shí)行研究與機(jī)理闡發(fā)D.上海：上海理工大學(xué)，2