走馬胎提取液體內(nèi)抗血栓作用研究

1、走馬胎提取液體內(nèi)抗血栓作用研究沈詩軍周定剛黎德兵【關(guān)鍵詞】走馬胎提取液血液流變學(xué)病理模子血栓Keyrds：ArdisiagigantifliaStapfextrat；Herrhelgy；Pathlgialdel；Thrbus走馬胎別名大葉紫金牛1、走馬風(fēng)2、豆收3，學(xué)名ArdisiagigantifliaStapf，為紫金?？谱辖鹋僦参铮昃哂谢钛?、祛風(fēng)濕壯筋骨、止血生肌等成果4，為民間常用的跌打傷科藥。只管臨床上已利用，但對(duì)該科屬植物的研究報(bào)道很少，如今有關(guān)走馬胎的抗血栓藥理作用研究國(guó)表里尚未見報(bào)道。據(jù)此，本實(shí)行應(yīng)用小劑量腎上腺素一連屢次給藥，模擬恒久疼痛告急焦急應(yīng)激反響導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)血

2、栓形成5，開端探究走馬胎提取液對(duì)SD大鼠體內(nèi)血栓形成的影響。1質(zhì)料與儀器1.1藥品與試劑走馬胎(產(chǎn)地:四川)，購于德仁堂藥業(yè)；血塞通片(PanaxntginsengSapnins,PNS)重要身分三七總皂苷，維和制藥，批號(hào):20220523；鹽酸腎上腺素(adrenalin，AD)注射液，重慶迪康長(zhǎng)江制藥，批號(hào):051102；凝血酶，三九團(tuán)體昆明確馬制藥，批號(hào):041201；牛纖維卵白原(fibringen，F(xiàn)g)，中國(guó)藥品生物成品檢定所；白陶土，成都博瑞克生物技能；兔腦粉(凝血活酶)和腦磷脂廉價(jià)。1.2動(dòng)物干凈級(jí)SD大鼠，各半，體重(26020)g，購于上海斯萊克實(shí)行動(dòng)物。實(shí)行動(dòng)物自由采食、

3、飲水(自來水)，投喂尺度顆粒大鼠飼料。1.3儀器Universal320R冷凍離心機(jī)，Hettih消費(fèi)；UV-2000紫外分光光度計(jì)，Uni消費(fèi)；A620全主動(dòng)血細(xì)胞闡發(fā)儀，edni消費(fèi)；NXE-1B型椎板粘度計(jì)，成都儀器廠消費(fèi)；電熱恒溫水浴箱，北京復(fù)興偉業(yè)儀器廠消費(fèi)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鞏義市英峪高科儀器廠消費(fèi)。2要領(lǐng)2.1藥品制備要領(lǐng)每次取枯燥走馬胎100g，先用60%乙醇室溫浸泡24h后,第一次加10倍量60%乙醇回流2.5h，第二次8倍量60%乙醇回流2h，歸并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至10l，置4保存?zhèn)溆?。臨用前用生理鹽水配制成差異濃度溶液。2.2模子復(fù)制及給藥5取SD大鼠36只，隨機(jī)分為正常、

4、模子、PNS藥物比擬組，同時(shí)設(shè)走馬胎提取液高、中、低劑量組(別離為10g生藥/kg，5g生藥/kg，2.5g生藥/kg；簡(jiǎn)稱高劑量組、中劑量組和低劑量組。下同)。除正常組外，將別的各組大鼠別離用0.015%AD，按0.08g/kg皮下注射，1次/d，一連12d(正常比擬組注射雷同體積的生理鹽水)復(fù)制血栓病理生理模子。末了1天造模8h后，別離灌胃給藥，1次/d，一連12d，給藥容積1l/100g，正常和模子組賜與等體積的生理鹽水。2.3大鼠體內(nèi)凝血酶原時(shí)間(prthrbintie,PT)的測(cè)定6別離對(duì)各組大鼠舉行斷頭采血7.2l，參加相應(yīng)盛有0.109l/L枸櫞酸鈉溶液0.8l的離心管內(nèi)混勻,取

5、抗凝血4.5l，以3000r/in離心10in,分散乏血小板血漿，分裝后放入-70備用。取內(nèi)徑1的試管3支,每管參加凝血活酶和血漿各0.1l，混勻，置37水浴中溫育30s,然后參加0.025l/Lal2溶液0.1l，混勻后立即開始計(jì)時(shí)。每隔23s傾歪試管1次,記載試管內(nèi)出現(xiàn)凝膠狀纖維卵白，液面不動(dòng)所需時(shí)間，并求出3支試管的均值。2.4大鼠體內(nèi)凝血酶時(shí)間(thrbintie,TT)的測(cè)定6取內(nèi)徑1的試管3支,別離參加乏血小板血漿和Tris-Hl緩沖液各0.1l，混勻后置37育溫2in，再參加50U/l凝血酶0.1l，混勻。同時(shí)啟動(dòng)秒表，記載凝固時(shí)間，求出3支試管的均值。2.5大鼠體內(nèi)活化部門凝血

6、活酶時(shí)間(ativatedpartialthrbplastintie,APTT)的測(cè)定6取內(nèi)徑1試管3支，別離參加乏血小板血漿和白陶土腦磷脂的混懸液各0.1l，混勻，置37水浴溫育3in(其間輕輕搖蕩數(shù)次)。參加0.025l/Lal2溶液0.1l，立即啟動(dòng)秒表，輕輕傾歪并不雅察出現(xiàn)纖維卵白絲的時(shí)間，求出3支試管均值。2.6大鼠體內(nèi)血漿復(fù)鈣時(shí)間(realifiatintie,RT)的測(cè)定6取上述抗凝血1l，混勻后，以1000r/in離心10in，分散富含血小板血漿，放入-70備用。取內(nèi)徑1試管3支，別離參加血漿和生理鹽水各0.1l，置于37水浴中1in，加0.025l/Lal2溶液0.1l，混勻

7、，同時(shí)啟動(dòng)秒表，1in后每隔5s遲鈍傾歪試管1次，記載參加鈣至纖維卵白絲出現(xiàn)，液體不活動(dòng)所需時(shí)間，求出3支試管均勻值。2.7大鼠體內(nèi)Fg含量的測(cè)定62.10大鼠腎上腺重量大鼠斷頭取血后，立即接納大鼠兩側(cè)腎上腺(adrenalgland,AG)，并稱其重量。3效果與闡發(fā)表1走馬胎提取液對(duì)大鼠體內(nèi)PT，TT，APTT，RT和AG的影響略與正常組比力，1)P0.05，2)P0.01；與模子組比力，3)P0.05，4)P0.01；與PNS組比力，5)P0.05，6)P0.01；n=6表2走馬胎提取液對(duì)大鼠全血黏度和血漿Fg含量的影響略與正常組比力，1)P0.05，2)P0.01；與模子組比力，3)P0

8、.05，4)P0.01；與PNS組比力，5)P0.05，6)P0.01；n=63.3走馬胎提取液對(duì)大鼠血液生理指標(biāo)的影響表3效果表白，與生理鹽水比擬組比擬，病理模子組SD大鼠的RB，B，PLT，V，HGB，HT，H，H，PV，RD%，LY%，GRAN%，RDa，LPR，PT血液生理指標(biāo)都有所升高，但差異不明顯；與病理模子組比擬力，低劑量組SD大鼠RDa差異明顯(P0.05)，別的各組SD大鼠生理指標(biāo)有所改進(jìn)，但差異不明顯。4討論4.1模擬疼痛告急應(yīng)激復(fù)制慢性動(dòng)物血栓模子血栓形成是一龐大的歷程，其產(chǎn)生和生長(zhǎng)與凝血體系、纖溶體系、血液流變學(xué)、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板聚攏性等多種因素嚴(yán)密相干。隨著社會(huì)競(jìng)

9、爭(zhēng)日益猛烈，與應(yīng)激有關(guān)的血栓性心血管疾病漸漸增多，因此治療和防范血栓性疾病是一項(xiàng)困難而緊張的使命。本文通過給大鼠皮下一連屢次注射外源性小劑量腎上腺素,使動(dòng)物機(jī)體恒久處于疼痛告急刺激狀態(tài)，模擬由于恒久疼痛告急應(yīng)激反響所致機(jī)體內(nèi)血栓形成。本實(shí)行效果表白，與生理鹽水比擬組比擬力，病理模子組SD大鼠凝血體系中PT和APTT都明顯收縮，全血低切黏度和血漿Fg含量明顯增高。這說明白實(shí)行動(dòng)物恒久處于疼痛告急應(yīng)激條件下，終極導(dǎo)致止血機(jī)制中的凝血因子過分激活，血液流變性非常的一種病理性了局。應(yīng)激反響會(huì)刺激交感神經(jīng)，導(dǎo)致兒茶酚胺類物質(zhì)的大量開釋，血小板輕易產(chǎn)生粘贊同聚攏，有生長(zhǎng)為血栓的大概。別的，交感神經(jīng)恒久快樂

10、，以致較高的血壓會(huì)一連地抑制血管，引起血管壁機(jī)器性損傷，膠原表露。當(dāng)血管呈一連抑制狀態(tài)時(shí)，血管的內(nèi)側(cè)壁會(huì)產(chǎn)生血小板活性因子，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，激活凝血體系。這都為機(jī)體血栓形成提供了有利條件。表3走馬胎提取液對(duì)大鼠血液生理指標(biāo)的影響略與正常組比力，1)P0.05，2)P0.01；與模子組比力，3)P0.05，4)P0.01；與PNS組比力，5)P0.05，6)P0.01；n=64.2走馬胎提取液對(duì)動(dòng)物凝血體系的作用在機(jī)體凝血機(jī)制的檢測(cè)中，APTT和TT用于檢測(cè)機(jī)體內(nèi)源性凝血體系的成果，其與凝血因子，等濃度有關(guān)；而PT那么是測(cè)定外源性凝血體系成果最常用的要領(lǐng)，與凝血因子，的濃度及抗凝物質(zhì)的存在有關(guān)

11、7。以是臨床上別離測(cè)定APTT，TT和PT來反響機(jī)體內(nèi)、外源性凝血途徑的狀態(tài)，并通過APTT，TT和PT開端斷定抗血栓藥物的療效。本實(shí)行效果表白，與病理模子組比擬，高劑量組SD大鼠體內(nèi)PT，TT和APTT都明顯延伸，并出現(xiàn)劑量-效應(yīng)依靠干系(表1)。說明該物質(zhì)對(duì)內(nèi)源性和外源性凝血體系均有作用，其作用環(huán)節(jié)大概是按捺凝血酶原轉(zhuǎn)釀成凝血酶，進(jìn)而按捺纖維卵白原轉(zhuǎn)釀成纖維卵白，影響凝血體系而發(fā)揮抗凝血作用。走馬胎提取液高劑量組SD大鼠血漿中Fg的含量極明顯低落，提示走馬胎提取液大概有直接或/和間接落解血栓的作用。然而，走馬胎提取液畢竟作用于凝血體系的哪一個(gè)環(huán)節(jié)，作用于哪些凝血因子，通過何種方法落解血栓，

12、其抗凝血藥理作用機(jī)制怎樣，如今仍不明晰，尚需作進(jìn)一步研究。4.3走馬胎提取液對(duì)動(dòng)物血液流變學(xué)的作用全血黏滯性重要是由紅細(xì)胞聚攏性和變形性等因素所決定。紅細(xì)胞聚攏性越大，全血低切黏度越大；紅細(xì)胞變形本領(lǐng)越差，全血高切黏度越大。本實(shí)行效果表白，與病理模子組比擬，走馬胎提取液高、中、低劑量組全血低切率(6r/in和12r/in)黏度極明顯低落(見表2)，全血中高切率黏度和血液生理指標(biāo)都有所改進(jìn)，但差異不明顯(見表23)。說明走馬胎提取液有低落全血低、中、高切率黏度的作用，且對(duì)低切率黏度的低落顯著強(qiáng)于高切率黏度，這大概與走馬胎提取液重要是通過低落紅細(xì)胞的聚攏性和加強(qiáng)紅細(xì)胞的變形本領(lǐng)以低落全血黏度，而不

13、是通過改變血液生理指標(biāo)來改進(jìn)血液流變性有關(guān)。Fg是由肝臟合成的一種可溶性血漿糖卵白，是血漿和血液黏稠度的重要決定因素，也是機(jī)體緊張的凝血因子之一。一方面，F(xiàn)g在凝血酶的作用下轉(zhuǎn)化成不成溶的纖維卵白沉積于血管壁，同時(shí)還能特異性的與血小板微粒中血小板膜糖卵白(glyprtEin，Gp)b/a復(fù)合體相結(jié)合，從而激活Gpb/a復(fù)合體；活化的Gpb-a復(fù)合體可通過膜受體(Gpb-a)-毗連卵白(Fg)-調(diào)治卵白(血小板反響素大概是Fg和血管性假性血友病因子)-膜受體(Gpb-a)橋聯(lián)方法使血小板產(chǎn)生黏附聚攏，并結(jié)合可溶性和不溶性Fg，從而產(chǎn)生猛烈的促凝血作用8。大分子Fg及纖維卵白的橋聯(lián)作用進(jìn)步血液黏性

14、，進(jìn)一步增長(zhǎng)了血栓形成的傷害性9。另一方面，增多的Fg還可以或許掩飾紅細(xì)胞外貌電荷，使紅細(xì)胞膜外貌電荷削弱，靜電排擠力低落，促使紅細(xì)胞互相之間產(chǎn)生凝集，從而增長(zhǎng)了全血黏滯性；Fg黏附特性也大概促進(jìn)紅細(xì)胞變形性的落落10。本實(shí)行效果表白，與病理模子組比擬力，走馬胎提取液高劑量組SD大鼠血漿Fg含量明顯低落。說明走馬胎提取液可通過落解Fg，淘汰血小板產(chǎn)生黏附聚攏，使血液黏稠度低落。綜上所述，走馬胎提取液具有活血化淤，改進(jìn)血液流變學(xué)特性，按捺血栓形成的作用，這為臨床防范及治療血栓性心血管疾病提供了藥理學(xué)理論基矗因此，走馬胎抗血栓作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】1盧文杰，王雪芬，陳家源，等.大葉紫

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