廣金錢草對膽色素結石的實驗研究

1、廣金錢草對膽色素結石的實驗研究【摘要】目的討論廣金錢草對膽色素結石的作用機制。方法用林可霉素對豚鼠造模1周，停藥1周后灌服廣金錢草高中低劑量和陽性對照藥4周，空白組和模型組正常喂養(yǎng)4周。結果廣金錢草顯著降低豚鼠膽囊結石率，對膽囊炎有治療效果，并且能影響血液生化學指標和膽汁成分。結論實驗通過大體解剖、病理以及血和膽汁生化檢查，進一步證明廣金錢草抗炎作用，尤其是對慢性炎癥。通過抗炎保護了膽囊上皮，防止水腫和分泌大量粘蛋白，維護正常組織構造;同時降低膽汁粘度、DBIL、a2+和-葡萄糖醛酸酶濃度，防止膽色素結石核心形成和結石的增大?？寡谆謴土四懩业膭恿W環(huán)境，有消除膽汁淤滯的作用，故有排石作用。另一

2、方面，保護肝細胞功能，促進肝細胞分泌膽汁酸，膽汁酸增加使游離膽紅素的溶解度增加及鈣離子沉積減少，阻止結石的產生。同時，肝臟分泌的增加有利膽作用。廣金錢草通過以上幾方面到達治療膽色素結石?！娟P鍵詞】廣金錢草;膽色素結石;膽囊炎廣金錢草作為四大南藥之一，在民間運用歷史悠久，被廣泛用來治療熱淋、砂淋、小便澀痛、黃疸尿赤、尿路結石等1。目前有關它對膽結石治療的研究較少，尤其是對膽色素結石的研究暫未見。已有研究說明廣金錢草通過促進K分泌，到達增加膽汁流量、收縮膽囊、擴張奧狄氏括約肌從而到達利膽排石作用的2。盧兗偉3認為廣金錢草總黃酮除具有防治腎結石的作用外，因其有顯著的利膽作用，故對膽結石的防治作用值得

3、進展深化研究。本研究在已有利膽研究根底上，全面討論其對膽色素結石的治療機制的研究，一方面為膽色素結石提供更多有效藥物，另一方面豐富廣金錢草藥理學研究內容，為藥材的單味藥制劑和配伍提供藥理學根據。1材料與方法廣金錢草制劑由中山大學新華學院藥學實驗室提供，采用水提醇浸法提取，含16.7g/l生藥。林可霉素(批號09112105。上海旭東海普藥業(yè)消費)。消溶肝膽結石片(四川旭華制藥廠消費)。豚鼠選用英國種安康短毛雌性豚鼠72只，體重(30050)g，南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。1.1動物分組和藥物用量采用隨機分組法將其分成6組，空白對照組(A)、模型組(B)、廣金錢草高劑量32.4g/(100gd

4、)組()、廣金錢草中劑量16.2g/(100gd)組(D)、廣金錢草低劑量8.1g/(100gd)組(E)、消溶肝膽結石片0.125g/(100gd)組(F)。每組12只，每5只一大籠，分籠喂養(yǎng)，飼養(yǎng)的環(huán)境溫度為1525。1.2動物膽色素結石模型制造采用Stt方法4，5，除空白對照組外，余5組分別給予豚鼠大腿根部(雙后肢交替應用，以防皮膚壞死)皮下注射林可霉素，每日上午進展實驗按6g/100g體重給藥，連續(xù)7天。1.3實驗步驟第1、2周正常飼養(yǎng)，以適應環(huán)境。第3周造模，空白組在造模時皮下注射等量生理鹽水，其余所有組動物注射林可霉素。第4周所有動物休息。第5周A、B組常規(guī)飼養(yǎng)，每天灌生理鹽水1l

5、，、B、E、F組灌胃給藥。在實驗期間，每周稱量動物體重1次，每天記錄實驗室溫度和濕度、動物精神狀況、皮毛光度、活動情況、進食量、大小便等一般情況。每籠動物除每日自由飲水，并喂適量青菜。每日早晚定時喂養(yǎng)，并清潔豚鼠籠、飼料盆及水壺等。1.4樣本取材第8周最后一天，灌藥300in后，把受試動物處死前由心臟取血,送生化檢查。同時，迅速用血管鉗阻斷膽囊管，取下膽囊，肉眼觀察膽囊外形、成石情況，并用注射器吸出全部膽汁，搜集所有動物膽石，取材后分別送驗。每組各取5只動物的肝和膽囊送病理檢查。1.5血清、膽汁生化和膽石分析采用L-7200全自動生化分析儀，測量膽汁中游離膽紅素(UB)、鈣(a2+)、膽汁酸、

6、-葡萄糖醛酸酶含量及血液中谷丙轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(AKP)、尿素氮(BUN)。膽石采用溴化鉀壓片法，測試儀器為雙光束紅外分光光度計。2結果與分析2.1動物的一般情況第1、2周動物生長發(fā)育正常，沒有死亡。第2周造模、第4周休息，空白組無死亡，其他各組共死亡10只。死前動物均出現(xiàn)精神萎靡不振、腹瀉、皮毛倒豎無光澤、體重下降等病癥，存活動物有精神欠佳、活動減少、皮毛無光澤、體重下降，最后逐漸到根本正常。在治療期死亡2只，原因是灌胃操作不當致死。動物不同時期存活情況見表1。表1實驗過程中豚鼠存活情況(只)對死亡的豚鼠進展尸體解剖發(fā)現(xiàn)肝臟大體標本有明顯充血水腫，膽囊內有棕褐色膿性分泌物和少量淡

7、黃色絮狀沉淀物，并且經化驗絮狀沉淀主要為膽色素及膽色素鹽。鏡下可見肝細胞大量壞死，膽囊上皮有多處潰瘍，膽囊各層有大量中性粒細胞浸潤。分析：從死亡動物的大體解剖和病理檢查可看出，林可霉素造模對實驗動物的肝臟、膽囊的形態(tài)及功能均影響較大，因此造成動物出現(xiàn)精神、食欲和大小便改變等情況。2.2體重變化第1、第2周各組動物體重沒有顯著差異。第4周，動物經過造模和休整期，各組動物體重發(fā)生明顯變化。所有動物造模后的體重與空白組比差異有顯著性(P0.01)。第8周，用藥組所動物體重都增加，但高劑量組和陽性藥與空白組比差異無顯著性(P0.05)，而低、中劑量組與空白組和陽性藥組比差異有顯著性(P0.050.01

8、)。而模型組的動物體重有增加，但與空白組和陽性藥組比差異有顯著性(P0.01)。詳見表2。表2動物體重的變化注：與空白對照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽性對照藥比，P0.05，P0.01小結：體重變化反映藥物對動物生長發(fā)育影響情況。林可霉素造模對動物生長發(fā)育影響較大。經藥物治療(治療藥和陽性對照藥)動物的生長發(fā)育根本到達正常狀態(tài)。說明藥物對抗林可霉素引起的影響因素有明顯的治療和改善作用。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3膽囊成石情況本次實驗動物所生成的膽石多為棕黃色和淡黃色，大局部呈泥沙樣，成形的體積大小不等，膽囊和膽管內均有發(fā)生。模型組和低劑量組膽囊

9、壁增厚、粗糙明顯，膽囊管壁增厚狹窄明顯，有石膽汁呈粘稠混濁、深綠色。陽性藥和高劑量組膽囊構造近似空白組，增厚不明顯，無石膽汁淡黃色比擬稀簿。中劑量組一局部呈現(xiàn)出高劑量組表現(xiàn)，一局部近似低劑量組，但膽汁粘度較輕。各實驗組膽石發(fā)生情況，詳見表3。表3動物膽石發(fā)生情況(只)注：與空白對照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽性對照藥比，P0.05，P0.01從表2可以看出各組成石率不同，模型組最高，成石率達89%，各給藥組成石率低于模型組，其中空白組、陽性藥組和高劑量組與模型組比差異有顯著性(P0.01)。模型組、中、低劑量與陽性藥組比差異有顯著性(P0.05

10、0.01)。模型組、高、中、低劑量組與空白組比差異有顯著性(P0.050.01)。陽性藥與空白組比差異無顯著性(P0.05)。分析：本方法制造豚鼠膽囊結石模型是成功的。藥物可明顯降低豚鼠膽囊結石形成率。(1)實驗中林可霉素致動物膽色素結石，模型組成石率達89%，與文獻報道根本符合6。陽性藥和高劑量組明顯降低膽色素結石形成，說明有明顯的治療作用，兩者療效相當。中、低劑量組結石數(shù)量有減少趨勢，說明藥物有一定改善效果。(2)膽汁的粘度和淤積對膽色素結石起到重要作用。從模型組和低劑量組膽汁與陽性藥和高劑量組膽汁比擬，以及膽囊壁和膽囊管情況，說明前者林可霉素影響了膽囊上皮分泌吸收和膽囊平滑肌的運動，出現(xiàn)

11、膽汁淤積現(xiàn)象，而后者膽汁排泄通暢。2.4血液和膽汁生化指標結果受試動物于處死前由心臟取血，別離血清，用全自動生化儀測定血清中ALT、AKP、BUN。膽汁中測總膽汁酸、-葡萄糖醛酸酶、鈣、游離膽紅素。詳見表4、表5。表4廣金錢草對豚鼠血液生化指標的影響注：與空白對照組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽性對照藥比，P0.05，P0.01表5廣金錢草對豚鼠膽汁成分的影響注：與空白對照組相比，*P0.05，*P0.01;與模型組比擬，P0.05，P0.01;與陽性對照藥比，P0.05，P0.01從表4可以看出ALT僅在模型組與空白組之間差異有顯著性(P0.05

12、)，而用藥組與空白組之間差異無顯著性(P0.05)。模型組和低劑量組AKP與空白組比差異有顯著性(P0.050.01)，而高、中劑量組和陽性藥組與空白組比差異無顯著性(P0.05)。BUN在所有造模組與空白組之間差異無顯著性(P0.05)。分析：藥物影響豚鼠血液生化學指標。(1)ALT升高說明林可霉素在造模時對肝臟細胞的損傷，造成肝細胞壞死。模型組ALT升高說明林可霉素對模型組肝細胞的損傷作用仍然存在，所有用藥組ALT正常說明藥物可能對有一定的修復保護作用。結果說明給藥組動物用藥后精神狀態(tài)、活動、對刺激的反響及進食情況比模型組明顯好，并且體重增加比模型組明顯快，說明藥物對肝有保護作用。(2)A

13、KP降低說明經藥物治療后膽囊急、慢性炎引起的梗阻情況在陽性藥和高、中劑量組中有明顯改善，膽道通暢，同時在模型組和低劑量組中膽道狹窄和梗阻情況仍存在。在動物解剖的大體標本中也證實這一點。(3)BUN各組之間差異無顯著性，說明造模和用藥對動物腎功能沒有影響。從表5結果看出UB、a2+和-葡萄糖醛酸酶在模型組、低中劑量組與空白組和陽性藥組比差異有顯著性(P0.050.01)，膽汁酸在模型組、低劑量組與空白對照比差異無顯著性(P0.05)，與陽性藥組比差異有顯著性(P0.01)。而高劑量和陽性藥組與空白組比差異無顯著性(P0.05)，同時高劑量組與陽性藥組比差異無顯著性(P0.05)。中劑量組與空白組

14、和陽性藥比差異有顯著性(P0.05)。分析：藥物影響豚鼠膽汁成分。(1)在模型組和低劑量組中UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶的值與空白組比明顯增高，說明膽汁中致石性成分的增高，促進了膽石形成和加大。(2)在陽性藥和高劑量組中UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶的值與空白組比擬沒有增高，說明膽汁中抑石成分增高，抑制膽石形成和加大。(3)膽汁酸主要有由肝細胞分泌，它的濃度反映了肝細胞分泌功能。在陽性藥和高、中劑量組中濃度增高說明肝細胞分泌膽汁旺盛。膽汁增加，對膽道起著沖刷作用，故藥物通過加強肝細胞分泌功能，起著利膽排石作用。(4)中劑量組UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶和膽汁酸濃度有變化，不如高劑量，說明藥物與膽

15、石形成之間有量效關系。中劑量是參考人的用量設計的，說明單味藥對膽結石治療有一定效果，但是很有限。2.5病理結果A、D、E、F組膽囊無急、慢性炎癥改變，B和組有膽囊慢性炎癥改變，并伴明顯增生和狹窄。A、D、E、F組肝細胞無炎癥反響，不伴有纖維增生。B肝細胞有散發(fā)的變性改變，無增生改變。分析：藥物對慢性膽囊炎有明顯的治療作用。(1)膽囊病理證明：模型組和低劑量組膽囊上皮有潰瘍，局部上皮增生明顯，說明正常膽囊的吸收上皮壞死脫落，影響膽汁的水、鈉等無機鹽的吸收，同時增生的分泌上皮分泌大量的粘蛋白，使膽汁pH值下降，膽汁致石力增強，加上粘蛋白是結石形成的基質，即粘蛋白凝膠包裹膽固醇單晶體或膽色素顆粒形成

16、沉淀物。同時大量的炎性浸潤肌層致平滑肌收縮功能障礙，造成膽汁瘀積。炎癥刺激引起纖維組織增生，產生膽囊管狹窄，這些最終導致膽色素結石形成。(2)相反陽性藥和高劑量組膽囊上皮、肌層及纖維結締組織的變化不明顯，近似空白組，所以這些組動物根本沒有出現(xiàn)泥沙樣結石，或結石不明顯。通過以上實驗進一步證實了以往研究廣金錢草有利膽和對膽囊炎的治療作用外，還進一步證實了它對膽色素性結石的治療作用。3討論3.1膽色素性結石形成的機制(1)人類膽石按其主要組成成分可分為膽固醇性、膽色素性及混合性，以混合性為多。膽固醇性結石又稱為“代謝性結石，它的發(fā)病與高膽固醇血癥有親密關系。膽色素性結石又叫“感染性結石，它的發(fā)病與膽

17、道感染、炎癥有關。目前有關膽色素性結石的形成原因尚不非常清楚。現(xiàn)有aki學說和膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調學說7，都認為UB、a2+、-葡萄糖醛酸酶和膽汁酸對膽色素性結石發(fā)生起重要作用。-葡萄糖醛酸酶在感染時可水解成為非結合膽紅素和葡萄糖醛酸。UB與鈣離子結合而析出膽紅素鈣沉淀。另外，感染的膽汁中的硫酸糖蛋白，把分散的膽紅素鈣沉淀微粒積集在一起，固化成結石。同時感染、膽道梗阻可使酶活性增強。膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調學說認為：膽紅素鈣在膽汁中的沉淀和溶解處于動態(tài)平衡中，受多種因素影響。(1)膽汁酸鹽，它能與鈣結合形成膽汁酸鈣而使膽汁中的鈣降低，同時膽汁酸鹽對未結合膽紅素有助溶作用，所以能防止或減

18、少膽紅素鈣沉淀的生成。(2)糖蛋白，它是膽石形成的基質。另外，膽固醇、磷脂、葡萄糖醛酸對膽紅素鈣沉淀-溶解平衡有影響。影響膽色素結石形成的因素還有致石核心：50%70%膽色素結石都有核心，主要是蟲殘體、細菌、脫落的上皮細胞等。3.2林可霉素致動物膽色素結石的主要機制林可霉素致動物膽色素結石的主要機制是早期誘發(fā)肝細胞和膽囊上皮壞死，造成肝細胞分泌“致石性病理膽汁，之后，合并感染和異物刺激等因素，引起膽囊上皮炎造成膽囊吸收分泌異常，加重了“致石性病理膽汁的成石性，同時膽囊運動功能失調，膽汁排泄不暢和瘀積，造成“致石性病理膽汁在膽囊中儲藏，加上壞死脫落的膽囊上皮、細菌和寄生蟲殘體形成膽色素結石的核心

19、，進一步開展成為膽色素結石7。3.3膽囊炎與膽石癥膽囊炎和膽石癥二者可互為因果，互相影響。膽囊的炎癥尤其是慢性膽囊炎必然影響膽囊壁的功能。膽囊炎時膽汁成分、代謝都受到影響，這些改變均成為形成膽石的基矗有人報道膽囊炎合并膽石者高達85%90%，膽囊炎為結石形成創(chuàng)造了條件6。aki學說和膽紅素鈣溶解-沉淀平衡失調學說8，強調感染是膽色素結石形成重要因素。膽色素結石的發(fā)病與膽道感染及膽汁淤積有明顯關系。感染是生石的“首要因素，淤積是生石的“必要條件。沒有淤積，即使有感染也不易形成結石6。3.4廣金錢草對膽色素結石的作用機制918已有廣金錢草藥理研究都證實：(1)抗菌和抗炎;(2)利膽;(3)尿石的溶

20、防作用;(4)利尿;(5)對心血管系統(tǒng)的影響;(6)鎮(zhèn)痛;(7)其他。常壓小鼠耐缺氧，廣金錢草尚有益智作用等。本實驗通過大體解剖、病理以及血和膽汁生化檢查，也進一步證明廣金錢草抗炎作用，尤其是對慢性炎癥。通過抗炎保護了膽囊上皮，防止水腫和分泌大量粘蛋白，維護正常組織構造;同時降低膽汁粘度、DBIL、a2+和-葡萄糖醛酸酶濃度降低，防止膽色素結石核心形成和結石的增大?？寡谆謴土四懩业膭恿W環(huán)境，有消除膽汁淤滯的作用，故有一定的排石作用。另一方面，保護肝細胞功能，促進肝細胞分泌膽汁酸，膽汁酸增加使游離膽紅素的溶解度增加及鈣離子沉積減少，阻止結石的產生。同時，肝臟分泌的增加有利膽作用。故廣金錢草通過

21、以上幾方面到達治療膽色素結石。綜上所述，本實驗研究進一步證實了以往對廣金錢草的利膽和膽囊炎的治療作用外，還進一步證實了它對膽色素性結石的治療作用?！緟⒖嘉墨I】1金淑琴.金錢草、廣金錢草、連錢草的考證及臨床應用.首都醫(yī)藥，2001，8(8)：54.2劉敬軍，鄭長青.廣金錢草、木香對膽囊運動及血漿K含量影響的實驗研究.四川中醫(yī)，2022，4(26)：31-32.3盧兗偉.廣金錢草及土大黃有效成分研究與應用.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院根底醫(yī)學，2022.4NlisellK.Bileaidplsizeandgallbladdedstragea-paityingallstnedisease.SandJLipidRes,1993,34(4):680-687.5YasukaaK.Studiesnthenstituentsintheaterextratsr