稀堿法提取課件

1、關(guān)于稀堿法提取第一張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗?zāi)康?. 學(xué)習(xí)稀堿法提取RNA的原理和操作方法2. 掌握RNA組分的鑒定方法第二張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月原 理 酵母中含有豐富的RNA(可達(dá)酵母干重的2.67%10%），是工業(yè)上大規(guī)模制備核酸和核苷酸的原料。稀堿法是工業(yè)上常用的RNA提取方法之一，其原理是用稀堿溶液裂解細(xì)胞，使RNA釋放到堿液中，然后用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液用乙醇沉淀RNA或調(diào)pH至2.5利用等電點沉淀RNA.第三張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月 RNA用H2SO4水解時，可以生成磷酸戊糖和堿基，以下列反應(yīng)鑒定各種成分。磷酸：用強

2、酸使RNA中的有機磷消化生成無機磷，后者與定磷試劑中的鉬酸銨結(jié)合成磷鉬酸銨（黃色沉淀），當(dāng)有還原劑存在時磷鉬酸銨立即轉(zhuǎn)變成藍(lán)色的還原產(chǎn)物鉬藍(lán)；核糖：RNA與濃鹽酸共熱時，發(fā)生降解，形成的核糖繼而轉(zhuǎn)變成糠醛，在 或 催化下后者與苔黑酚反應(yīng)，生成鮮綠色復(fù)合物；嘌呤堿：嘌呤堿與AgNO3能產(chǎn)生白色的嘌呤銀化物沉淀。第四張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月器材和試劑1.器材：沸水浴，量筒，刻度移液管，吸管及滴管，布氏漏斗和抽濾裝置，試管，試管架和試管夾，離心機，濾紙，pH試紙，燒杯，天平，酵母粉。第五張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月2.試劑0.2%（m/V）NaOH溶液95%（V/V）乙醇

3、冰乙酸無水乙醚1.5mol/L H2SO4 溶液濃氨水5%（m/V）AgNO3 溶液苔黑酚乙醇溶液稱取苔黑酚6g，溶解于95%乙醇100mL(冰箱中可保存一個月） 的濃鹽酸溶液取10%（m/V） 溶液2mL，與濃鹽酸400mL混合。 第六張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月定磷試劑1）17%（m/V）H2SO4 溶液2）2.5%（m/V）鉬酸銨溶液3）10%（m/V）抗壞血酸溶液（貯藏于棕色瓶中，溶液在冰箱放置可用1個月。溶液呈淡黃色時可用，如呈深黃色或棕色則已失效。）臨用時將上述3種溶液與水按如下比例混合（限當(dāng)天使用）17% H2SO4：2.5%鉬酸銨：水：10%抗壞血酸=1:1:2:1

4、(V/V)第七張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗步驟1.RNA的粗提取取酵母粉1g，放入一大試管中，加入0.2%NaOH溶液10mL，搖勻成懸浮液。將懸浮液在沸水浴中加熱20分鐘，冷卻至室溫，傾入離心管中，3000r/min離心10分鐘。將上清液緩緩傾入含3mL95%乙醇的試管中，注意要一邊攪拌一邊傾入，用冰乙酸調(diào)pH至2.5。靜置，待RNA完全沉淀后，3000r/min離心5分鐘。第八張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月棄去上清液，向離心管中加入95%乙醇5mL，振蕩搖勻以洗滌沉淀，3000r/min離心3分鐘，再棄去上清液，管底部的沉淀即為RNA粗制品。2.水解RNA 向上述含有RNA沉淀的離心管中加入 1.5mol/LH2SO4 溶液10mL，振蕩搖勻后轉(zhuǎn)入到一大試管中，沸水浴中加熱10min，使RNA水解，過濾水解液，濾液用于RNA組分的定性鑒別。3.RNA組分鑒定嘌呤堿 取一支試管，加入水解液1mL，濃氨水2mL，混勻后沿管壁慢慢加入5%的AgNO3 溶液1mL，勿振蕩，靜置5min，觀察是否產(chǎn)生白色絮狀嘌呤銀化物沉淀。第九張，PPT共十一頁，創(chuàng)作于2022年6月核糖 取試管一支，加入水解液1mL，再加入 的濃鹽酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液5滴，在通風(fēng)櫥中沸水浴加熱5分鐘，觀察試管中顏色變化。磷酸 取試管一支，加入水解液1mL