-新人教版-選擇性必修3-重組DNA技術(shù)的基本工具-教案

1、第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具新課標(biāo)核心素養(yǎng)1.簡述重組DNA技術(shù)所需的三種基本工具及其作用。2.基因工程中作為載體需要具備的條件。3.認(rèn)同基因工程的誕生和發(fā)展離不開理論研究和技術(shù)創(chuàng)新。1.科學(xué)思維：模擬重組DNA分子的操作過程，說出合成新DNA分子的基本原理。2.社會責(zé)任：關(guān)注基因工程的社會議題，參與討論基礎(chǔ)理論和技術(shù)發(fā)展如何催生了基因工程。知識點(一)基因工程的概念及其誕生和發(fā)展1基因工程的概念別名重組DNA技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對象基因操作水平DNA分子水平結(jié)果創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品2基因工程的誕生和發(fā)展(1)1944年，艾弗里等人通過肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實驗，不僅證

2、明了遺傳物質(zhì)是DNA，還證明了DNA可以在同種生物的不同個體之間轉(zhuǎn)移。(2)1953年，沃森和克里克建立了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型并提出了遺傳物質(zhì)自我復(fù)制的假說。(3)1970年，科學(xué)家在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了第一個限制性內(nèi)切核酸酶(簡稱限制酶)。(4)20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)。這些發(fā)現(xiàn)為DNA的切割、連接以及功能基因的獲得創(chuàng)造了條件。(5)1972年，伯格首先在體外進行了DNA改造的研究，成功地構(gòu)建了第一個體外重組DNA分子。(6)1973年，科學(xué)家證明質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，構(gòu)建重組DNA，導(dǎo)入受體細(xì)胞，使外源基因在原核細(xì)胞中成功表達(dá)，并實現(xiàn)物種間的基因交流。

3、至此，基因工程正式問世。(7)1983年，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出世界上第一例轉(zhuǎn)基因煙草。此后，基因工程進入了迅速發(fā)展的階段。(1)基因工程是人工操作導(dǎo)致的染色體變異，變異是不定向的()(2)S型細(xì)菌的DNA進入R型細(xì)菌并使R型細(xì)菌轉(zhuǎn)化為S型細(xì)菌，發(fā)生了基因重組()(3)基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計和施工的，又叫作重組DNA技術(shù)()(4)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌擬核DNA之外的質(zhì)粒有自我復(fù)制能力，并可以在細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移()1(生命觀念)為什么幾乎所有生物的DNA分子都可以進行DNA拼接？提示：幾乎所有生物的DNA分子都具有相似的成分和結(jié)構(gòu)，即都是由4種脫氧核苷酸形成規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。2(

4、科學(xué)思維)為什么一種生物的基因在其他生物體內(nèi)也能正常表達(dá)？提示：(1)所有生物共用一套遺傳密碼，這為一種生物的基因在其他生物體內(nèi)正常表達(dá)提供了可能。(2)基因是控制生物體性狀的結(jié)構(gòu)和功能單位，具有相對獨立性，這為目的基因在受體細(xì)胞中的獨立表達(dá)提供了可能。1下列敘述符合基因工程概念的是()A在細(xì)胞內(nèi)將DNA進行重組，賦予生物新的遺傳特性B將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒上后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上解析：選B基因工程是在生物體外將DNA進行重組，賦予生物新的

5、遺傳特性，A項錯誤；B項符合基因工程的概念；C項屬于誘變育種；D項外源基因?qū)爰?xì)菌不是人為操作的，不屬于基因工程的范疇。2科學(xué)家把兔子血紅蛋白基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞中，在大腸桿菌細(xì)胞中合成了兔子的血紅蛋白。下列不是這一先進技術(shù)的理論依據(jù)的是()A所有生物共用一套遺傳密碼B基因能控制蛋白質(zhì)的合成C兔子血紅蛋白基因與大腸桿菌的DNA都是由四種脫氧核苷酸構(gòu)成，都遵循相同的堿基互補配對原則D兔子與大腸桿菌有共同的原始祖先解析：選D題干表述的是目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并得以表達(dá)的過程，目的基因在不同生物細(xì)胞中能夠表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)，說明控制其合成的mRNA上的密碼子是共用的，相同的密碼子決定相同的氨基酸，A項

6、正確；基因通過轉(zhuǎn)錄獲得mRNA，進而控制蛋白質(zhì)的合成，B項正確；基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，只要是雙鏈DNA都遵循堿基互補配對原則，其組成原料都是四種脫氧核苷酸，C項正確；生物之間是否有共同的原始祖先與轉(zhuǎn)基因技術(shù)之間沒有必然關(guān)系，D項錯誤。知識點(二)重組DNA技術(shù)的工具酶1限制性內(nèi)切核酸酶(又稱限制酶)(1)來源：主要來自原核生物。(2)功能：能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。(3)結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。(4)應(yīng)用：已知限制酶EcoR 和Sma 識別的堿基序列和酶切位點分別為Geq o(,sup6()AATTC和CCCeq o(,sup6

7、()GGG，在圖中寫出兩種限制酶切割DNA后產(chǎn)生的末端并寫出末端的種類。2DNA連接酶(1)作用：將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵。(2)種類：種類比較Ecoli DNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體特點只能連接黏性末端既可以連接黏性末端，又可以連接平末端(1)限制酶在原來的原核細(xì)胞內(nèi)對細(xì)胞自身有害()(2)DNA聚合酶也可以用作重組DNA技術(shù)的工具()(3)DNA連接酶可以連接目的基因與載體的氫鍵，形成重組DNA()(4)Ecoli DNA連接酶既能連接黏性末端，又能連接平末端()1(生命觀念)圖1和圖2分別表示的是EcoR 限制酶和Sma 限制酶的作

8、用示意圖。請據(jù)圖回答：請說出EcoR 限制酶和Sma 限制酶識別的堿基序列及切割的位點；EcoR 限制酶和Sma限制酶作用的結(jié)果分別是什么？提示：EcoR 限制酶識別的堿基序列是GAATTC，切割位點在G和A之間；Sma 限制酶識別的堿基序列是CCCGGG，切割位點在G和C之間。EcoR 限制酶將DNA切割成黏性末端，Sma 限制酶將DNA切割成平末端。2(科學(xué)思維)DNA連接酶的作用特點：(1)DNA連接酶和限制性內(nèi)切核酸酶的比較：DNA連接酶限制性內(nèi)切核酸酶作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵作用結(jié)果連接DNA片段形成黏性末端或平末端(2)DNA連接酶和DNA聚合酶均能形成磷酸二酯鍵，二者的作用對

9、象相同嗎？為什么？提示：不相同。DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來，而DNA聚合酶是將單個的脫氧核苷酸加到已有的DNA片段上。1下列關(guān)于DNA連接酶的敘述正確的是()催化相同黏性末端的DNA片段之間的連接催化不同黏性末端的DNA片段之間的連接催化兩個黏性末端互補堿基間氫鍵的形成催化DNA分子兩條鏈的脫氧核糖與磷酸之間的磷酸二酯鍵的形成ABCD解析：選D在DNA重組技術(shù)中，兩個DNA片段間必須有相同的黏性末端，這樣黏性末端的堿基才能通過氫鍵連接而互補配對，再由DNA連接酶連接雙鏈DNA分子間的磷酸二酯鍵。2EcoR 和Sma 限制酶識別的序列均由6個核苷酸組成，但切割后產(chǎn)生的結(jié)果不同，其識別

10、序列和切割點(圖中箭頭處)分別如下圖所示，據(jù)圖分析下列敘述正確的是()A所有限制酶的識別位點均由6個核苷酸序列組成BSma 限制酶切割后產(chǎn)生的是黏性末端C用連接酶連接平末端和黏性末端的連接效率一樣D細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)限制酶可以切割外源DNA，防止外源DNA入侵解析：選D不是所有限制酶的識別序列均由6個核苷酸組成，也有少數(shù)限制酶的識別序列由4個、8個或其他數(shù)量的核苷酸組成；據(jù)圖可知，Sma 限制酶在它識別序列的中心軸線處將DNA片段切開，產(chǎn)生的是平末端；用DNA連接酶連接平末端的效率比較低；細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的限制酶可以切割外源DNA，防止外源DNA入侵，是一套完善的防御體系。歸納提升1限制酶的識別序列和切割末

11、端的判斷(1)識別序列的特點：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是奇數(shù)個堿基還是偶數(shù)個堿基，都可以找到一條中軸線，如圖，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。如eq avs4al(blc rc (avs4alco1(GC,CG)blc|rc (avs4alco1(GC,CG)以中心線為軸，兩側(cè)堿基互補對稱，eq avs4al(CCAGG,GGTCC)以eq avs4al(A,T)為軸，兩側(cè)堿基互補對稱。(2)黏性末端或平末端是否由同一種限制酶切割形成的判斷方法：將黏性末端或平末端之一旋轉(zhuǎn)180后，看它們是否是完全相同的結(jié)構(gòu)。是，則為相同限制酶切割形成的；否，則為不同限制酶切割形成的。2五種酶

12、的比較作用底物 作用部位產(chǎn)物限制酶DNA分子磷酸二酯鍵黏性末端或平末端DNA連接酶DNA片段磷酸二酯鍵重組DNA分子DNA聚合酶脫氧核苷酸和DNA片段磷酸二酯鍵子代DNA解旋酶DNA分子堿基對中的氫鍵脫氧核苷酸單鏈DNA (水解)酶DNA分子磷酸二酯鍵游離的脫氧核苷酸知識點(三)基因進入受體細(xì)胞的載體1種類(1)常用載體質(zhì)?；瘜W(xué)本質(zhì)：質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒作為載體所具備的條件及原因條件原因能在細(xì)胞中進行自我復(fù)制或整合到受體DNA上能使目的基因穩(wěn)定存在且數(shù)量可擴增有一個至多個限制酶切割位點供外源DNA

13、片段(基因)插入其中常有特殊的標(biāo)記基因便于重組DNA分子的篩選無毒害作用對受體細(xì)胞無毒害作用，避免受體細(xì)胞受到損傷(2)其他載體：噬菌體、動植物病毒等。2功能(1)相當(dāng)于運輸工具，將外源基因送入受體細(xì)胞。(2)攜帶外源基因在受體細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制。(1)重組DNA技術(shù)所需要的工具酶有限制酶、DNA聚合酶()(2)載體的種類有質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒等，其中動植物病毒必須是DNA病毒()(3)新冠病毒(RNA病毒)可以作為基因工程的載體()1(科學(xué)思維)質(zhì)粒作為目的基因的載體，其本質(zhì)是什么？所有質(zhì)粒都是載體嗎？為什么？提示：DNA。不是。作為載體必須具備一定的條件，條件不具備，則不能作為載體。2(科

14、學(xué)思維)載體在基因工程中的作用是什么？提示：作為運輸工具，將外源(目的)基因?qū)胧荏w細(xì)胞；攜帶外源(目的)基因在受體細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制。3(科學(xué)思維)分析質(zhì)粒載體結(jié)構(gòu)模式圖，回答下列問題：(1)質(zhì)粒上氨芐青霉素抗性基因的作用是什么？提示：作為標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選。(2)為使外源基因插入質(zhì)粒中，質(zhì)粒需具備的條件是什么？提示：有一個至多個限制性內(nèi)切核酸酶的切割位點。1質(zhì)粒是基因工程中最常用的目的基因運載工具。下列有關(guān)敘述正確的是()A質(zhì)粒是只存在于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能自主復(fù)制的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子B在所有的質(zhì)粒上都能找到一個或多個限制酶切割位點C攜帶目的基因的重組質(zhì)粒只有整合到宿主細(xì)胞的染色

15、體DNA上才會隨后者的復(fù)制而復(fù)制D質(zhì)粒上的抗性基因常作為標(biāo)記基因供重組DNA的鑒定和選擇解析：選D質(zhì)粒不只分布于原核生物中，在真核生物酵母菌細(xì)胞內(nèi)也有分布；并不是所有的質(zhì)粒都能找到限制酶的切割位點，從而成為合適的運載目的基因的工具；重組質(zhì)粒進入受體細(xì)胞后，可以在細(xì)胞內(nèi)自我復(fù)制，也可以整合后復(fù)制；質(zhì)粒上的抗性基因常作為標(biāo)記基因。2下面是四種不同質(zhì)粒的示意圖，其中ori為復(fù)制必需的序列，amp為氨芐青霉素抗性基因，tet為四環(huán)素抗性基因，箭頭表示同一種限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點。若要得到一個能在四環(huán)素培養(yǎng)基上生長而不能在氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長的含重組DNA的細(xì)胞，應(yīng)選用的質(zhì)粒是 ()解析：選CA質(zhì)

16、粒的ori被破壞，該質(zhì)粒將無法自我復(fù)制，而tet和amp均保持完整，說明該細(xì)胞能在四環(huán)素培養(yǎng)基和氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長，A錯誤；B質(zhì)粒的tet和amp均保持完整，說明該細(xì)胞能在四環(huán)素培養(yǎng)基和氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長，B錯誤；C質(zhì)粒的tet保持完整，而amp被破壞，說明該細(xì)胞能在四環(huán)素培養(yǎng)基上生長而不能在氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長，C正確；D質(zhì)粒的tet被破壞，而amp保持完整，說明該細(xì)胞能在氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長而不能在四環(huán)素培養(yǎng)基上生長，D錯誤。歸納提升1載體上標(biāo)記基因的標(biāo)記原理載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體

17、進入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如圖所示：2細(xì)胞膜上的載體與基因工程中的載體不同(1)化學(xué)本質(zhì)不同：細(xì)胞膜上的載體化學(xué)成分是蛋白質(zhì)；基因工程中的載體可能是物質(zhì)，如質(zhì)粒(DNA)，也可能是生物，如動植物病毒等。(2)功能不同：細(xì)胞膜上的載體功能是協(xié)助細(xì)胞膜控制物質(zhì)進出細(xì)胞；基因工程中的載體是一種“分子運輸車”，把目的基因送入受體細(xì)胞。知識點(四)DNA的粗提取與鑒定1實驗原理(1)提取原理DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選用適當(dāng)?shù)奈锢砘?/p>

18、化學(xué)方法對它們進行提取。DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。(2)鑒定原理：在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色，因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。2方法步驟(1)稱取約30 g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。(2)在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4 冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。也可以直接將研磨液倒入塑料離心管中，在1 500 r/min的轉(zhuǎn)速下離心5 min，再取上清液(3)在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒

19、精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，靜置23 min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；或者將溶液倒入塑料離心管中，在10 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心5_min，棄上清液，將管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。(4)取兩支20 mL的試管，各加入2_mol/L的NaCl溶液5 mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后，向兩支試管中各加入4 mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜? min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。(1)DNA與蛋白質(zhì)都溶于酒精()(2)DNA在不同濃度的NaCl溶

20、液中溶解度相同()(3)DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色()1(科學(xué)探究)鳥類和哺乳動物的紅細(xì)胞都適合用來提取DNA嗎？請說明理由。提示：哺乳動物的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，不適合作材料提取DNA。2(科學(xué)探究)實驗過程要充分地攪拌和研磨，如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？提示：研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物，用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色。3(科學(xué)探究)實驗過程中應(yīng)如何使用玻璃棒攪拌？為什么？提示：攪拌時玻璃棒不能直插燒杯底部，攪拌要輕緩，并向一個方向攪拌以便獲得較完整的DNA分子。1下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”實驗原理的敘述，正確的是()ADN

21、A在NaCl溶液中的溶解度隨NaCl溶液濃度的升高而減小B利用DNA不溶于酒精的性質(zhì)，可除去細(xì)胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的DNACDNA是大分子有機物，易溶于水也溶于某些有機溶劑D在沸水浴中，DNA遇二苯胺會出現(xiàn)紫色反應(yīng)解析：選B隨NaCl溶液濃度的升高，DNA的溶解度先降低后增大，A錯誤；DNA不溶于酒精等有機溶劑，B正確；在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺后呈現(xiàn)藍(lán)色，D錯誤。2若從植物細(xì)胞中提取DNA，發(fā)現(xiàn)實驗效果不好，如看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定時顏色反應(yīng)不明顯等。其可能的原因是()植物細(xì)胞中不含DNA研磨不充分過濾不充分冷酒精的量過大ABCD解析：選D研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋

22、放不完全，提取的DNA量變少；過濾不充分也會導(dǎo)致提取的DNA量過少；若用于沉淀DNA的酒精量過少，也會導(dǎo)致DNA的沉淀量少，從而影響實驗效果。歸納提升DNA粗提取與鑒定實驗成功的關(guān)鍵(1)破碎細(xì)胞應(yīng)徹底充分。(2)對提取的含雜質(zhì)較多的DNA進行提純時，所用的酒精必須經(jīng)過充分預(yù)冷后才能使用。(3)實驗過程中，攪拌時玻璃棒不能直插燒杯底部，并且攪拌要輕緩，并向一個方向攪拌以便獲得較完整的DNA分子。(4)由于玻璃表面帶電荷，DNA易被吸附于玻璃表面，故實驗中應(yīng)盡量不使用或少使用玻璃器皿，這樣可以提取到較多的DNA。(5)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。學(xué)習(xí)小結(jié)1科學(xué)家們經(jīng)過多年的努力，

23、創(chuàng)立了一種新興生物技術(shù)基因工程。實施該工程的最終目的是()A定向提取生物體的DNA分子B定向地對DNA分子進行人工“剪切”C在生物體外對DNA分子進行改造D定向地改造生物的遺傳性狀解析：選D基因工程的內(nèi)容就是在生物體外，通過對DNA分子進行人工“剪切”和“拼接”，對生物的基因進行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出更符合人們需要的基因產(chǎn)物，也就是定向地改造了生物的遺傳性狀。2DNA的粗提取中，加入與濾液體積相等的、冷卻的A溶液，靜置23 min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物。上面提到的A溶液是指()A0.9%的NaCl溶液B0.14 mol/L的NaCl

24、溶液C質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的HCl溶液D體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液解析：選D細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精溶液，但DNA不溶于酒精溶液，故濾液與體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精溶液混合后，就會得到白色的絲狀物。3下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述，正確的是()A用限制性內(nèi)切核酸酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有2個B限制性內(nèi)切核酸酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大CCATG和GGATCC序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA連接酶連接D只有用相同的限制性內(nèi)切核酸酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒解析：選B用限制性內(nèi)切核酸酶切割一個DNA分子中部，獲得一

25、個目的基因時，需要切割目的基因的兩側(cè)，因此要斷裂4個磷酸二酯鍵，即被水解的磷酸二酯鍵有4個，A錯誤；限制性內(nèi)切核酸酶識別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；CATG和GGATCC序列被限制酶切出的黏性末端不同，分別為CATG和GATC，不能用DNA連接酶連接，C錯誤；用不同的限制性內(nèi)切核酸酶處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，若產(chǎn)生的黏性末端相同，也能形成重組質(zhì)粒，D錯誤。4下列關(guān)于DNA連接酶作用的敘述，正確的是()A將單個核苷酸加到某個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵B將斷開的2個DNA片段的骨架連接起來，重新形成磷酸二酯鍵C連接2條DNA鏈上堿基之間的氫鍵D只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端連接起來，而不能將兩者之間的平末端進行連接解析：選BDNA連接酶和DNA聚合酶都催化2個脫氧核苷酸分子之間形成磷酸二酯鍵。