甘草水制廣地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、甘草水制廣地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究【摘要】目的建立甘草水制廣地龍飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法按2022年版?中國(guó)藥典?附錄H水分測(cè)定法中的第一法、附錄K灰分測(cè)定法和附錄A浸出物測(cè)定法測(cè)定;采用HPL法測(cè)定飲片中的次黃嘌呤和肌苷的含量。結(jié)果甘草水制廣地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為：水分含量5.0%，總灰分含量10.0%，酸不溶性灰分含量5.0%，水溶性浸出物濃度20.0%，乙醇浸提物濃度8.0%;次黃嘌呤含量0.006%，肌苷含量0.40%。結(jié)論建立了較完善的甘草水制廣地龍飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，改變了過去僅依靠經(jīng)歷和感官判斷的鑒定方法?！娟P(guān)鍵詞】甘草水制廣地龍;水分測(cè)定;灰分測(cè)定;浸出物測(cè)定;次黃嘌呤;肌苷Abstrat:b

2、jetiveTestablishaqualitystandardfrtheliquriepressedPheretiaaspegillu.ethdsSapleseredeterinedardingtthepreduresrerdedintheAppendixH,KandAfhinesePharapEia(2022),fristure,ashesandextratsdeterinatinrespetively,andthententfhypxanthineandinsineasdeterinedbyHPL.ResultsTepraryqualitystandardsereestablishedt

3、hattheistureinP.aspegillushuldbelessthan5.0%,iththettalashententbel10.0%,aidinslubleashententlerthan5.0%,thententfaterextrathigherthan20.0%,andtheethanlextratshuldbehigherthan8.0%,hypxanthinehigherthan0.006%,andinsinehigherthan0.40%.nlusinThisresearhhangedtraditinalethdsfjudgingqualitybasednexperien

4、esandsenses,andestablishedagdqualitystandardfrtheliquriepressedP.aspegillu.廣地龍是鉅蚓科動(dòng)物參環(huán)毛蚓Pheretiaaspegillu(E.Pettier)的枯燥體，主產(chǎn)于廣東和廣西，為廣東的道地藥材1。其性咸寒，有清熱、平肝、正喘、通絡(luò)之成效，主治高熱狂躁、驚風(fēng)抽搐、風(fēng)熱頭痛、目赤、中風(fēng)半身不遂、喘息等疾病2。歷代醫(yī)家所用的地龍炮制品眾多，在廣東及香港現(xiàn)廣泛應(yīng)用甘草水制廣地龍飲片，其目的是使其質(zhì)地松脆、增效減毒、矯臭矯味以便于煎制服用。近代研究發(fā)現(xiàn)次黃嘌呤是廣地龍平喘主要有效成分之一，有擴(kuò)張支氣管作用，并能對(duì)抗組胺及

5、毛果蕓香堿引起的支氣管收縮發(fā)揮平喘作用3。肌苷又稱為次黃嘌呤核苷，在酸性及高溫條件下容易分解為次黃嘌呤等有關(guān)物質(zhì)4。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)：廣地龍?jiān)酱謮?，其飲片中的肌苷含量越?。2022年版?中國(guó)藥典?中“地龍的炮制項(xiàng)下只收錄了生地龍一種，且地龍的常規(guī)檢查工程下沒有收載醇溶性浸出物檢查和有效成分的含量測(cè)定。目前尚未制定甘草水制廣地龍的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)有文獻(xiàn)多為對(duì)廣地龍飲片中的琥珀酸6和次黃嘌呤等成分79進(jìn)展含量測(cè)定,甘草水制廣地龍飲片的質(zhì)量控制仍停留在經(jīng)歷或古法的根底上。因此，為了保證甘草水制廣地龍這種地方慣用炮制品的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用常規(guī)檢查結(jié)合HPL法測(cè)定飲片中的次黃嘌呤和肌苷含量的方法，對(duì)甘草水制廣地龍

6、飲片進(jìn)展質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。1儀器與試藥2方法與結(jié)果2.1炮制品的制備將廣地龍飲片用10%的甘草水悶透，置炒制容器內(nèi)，用文火炒干，炒至廣地龍外表成棕色，取出，放涼。2.2性狀鑒別呈薄片狀，長(zhǎng)34，寬約1，邊緣略卷。具環(huán)節(jié)，背部棕褐色至紫灰色，腹部淺黃棕色;生殖帶較光亮。體輕，略呈革質(zhì)，質(zhì)韌不易折斷。氣腥，味微甘、咸。2.3顯微鑒別粉末棕黃色。表皮細(xì)胞為黃棕色，細(xì)胞界限不明顯，有暗棕色的色素顆粒散在。肌纖維多，為透明或淡棕色，直徑大約628，大多離散，細(xì)長(zhǎng)，多彎曲，有的部分膨大，明暗相間紋理不明顯。剛毛少見，常破碎散在，淡棕色或黃棕色，中部直徑大約2833，先端多鈍圓，有的外表可見縱裂紋，偶見皮樣紋理

7、。2.4薄層鑒別同?中國(guó)藥典?2022年版“地龍藥材項(xiàng)下1方法。2.5常規(guī)檢查12.5.1水分測(cè)定甘草水制廣地龍飲片中揮發(fā)性成分較少，故采用?中國(guó)藥典?2022年版一部(附錄H第一法)測(cè)定。2.5.2總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定按?中國(guó)藥典?2022年版一部(附錄K)方法測(cè)定。2.5.3浸出物測(cè)定按?中國(guó)藥典?2022年版一部(附錄A)浸出物測(cè)定法測(cè)定。包括水溶性浸出物測(cè)定和醇溶性浸出物測(cè)定。供試品需粉碎，使能通過二號(hào)篩，并混合均勻，醇溶性浸出物測(cè)定采用冷浸法,乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%。以上常規(guī)檢查工程結(jié)果見表1。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，建議在制定甘草水制廣地龍飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，以含水量不超過5.0%，總灰分

8、不超過10.0%，酸不溶性灰分不超過5.0%，水溶性浸出物不得少于20.0%，醇溶性浸出物不得少于8.0%為宜。表1甘草水制廣地龍飲片常規(guī)檢查工程結(jié)果2.6含量測(cè)定2.6.2對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液的制備分別精細(xì)稱取次黃嘌呤對(duì)照品和肌苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相配制成1gL-1的次黃嘌呤對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液、100gL-1的肌苷對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.6.3供試品溶液的制備5精細(xì)稱取樣品2.0g，置具塞錐形瓶中，加水50L，密塞，浸泡1h，超聲30in，殘?jiān)偌铀?0L提取1次，合并提取液，離心10in(4000rin-1)。精細(xì)量取提取液1L，用流動(dòng)相定容至10L，濾過，即得。2.7方法學(xué)考察2

9、.7.1線性關(guān)系考察分別精細(xì)汲取次黃嘌呤對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液0.2、0.4、1.2、1.6、2L置10L量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻;分別精細(xì)汲取肌苷對(duì)照品儲(chǔ)藏溶液0.4、0.5、0.6、1.0、1.2、1.5L置10L量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻。分別取上述溶液各10L，進(jìn)樣，按“2.6.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)展分析。以質(zhì)量濃度()為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:次黃嘌呤A=310-6-0.0108，r=0.9992，進(jìn)樣量在0.02080.208gL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。肌苷A=510-5+0.2665，r=0.9994，進(jìn)樣量在4.00415.015gL-1范圍內(nèi)

10、線性關(guān)系良好。2.7.2精細(xì)度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,每次10L,根據(jù)峰面積計(jì)算含量，次黃嘌呤和肌苷的RSD分別為1.53%、1.80%,結(jié)果說明本方法精細(xì)度良好。2.7.3穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.6.3項(xiàng)下方法制得供試品溶液,按“2.6.1項(xiàng)下方法于0、2、4、6、8、12h分別進(jìn)樣10L,根據(jù)峰面積計(jì)算含量，次黃嘌呤和肌苷的RSD依次分別為1.70%、1.80%,說明溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7.4重復(fù)性試驗(yàn)按“2.6.3項(xiàng)下方法分別制得供試品溶液6份,按“2.6.1項(xiàng)下方法進(jìn)展測(cè)定,根據(jù)峰面積計(jì)算含量,次黃嘌呤和肌苷的RSD分別為1.5%和2.6%，說明本方法重復(fù)性良好。2.7

11、.5加樣回收率試驗(yàn)取含量的廣地龍粉末約1g,精細(xì)稱定,共9份，分別精細(xì)參加次黃嘌呤和肌苷對(duì)照品溶液(次黃嘌呤質(zhì)量濃度為0.1002gL-1，肌苷質(zhì)量濃度為2.003gL-1)適量,按“2.6.3項(xiàng)下方法制備,依法測(cè)定。計(jì)算得到次黃嘌呤的平均回收率為96.8%，RSD值為1.78%(n=9);肌苷的平均回收率為103.2%，RSD值為1.43%(n=9)。結(jié)果見表2。表2次黃嘌呤和肌苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果2.8樣品測(cè)定取甘草水制廣地龍飲片5批，按“2.6.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.6.1項(xiàng)下條件測(cè)定樣品中次黃嘌呤和肌苷的含量，結(jié)果見表3。5批樣品次黃嘌呤的平均含量為0.0069%，肌苷的平

12、均含量為0.4516%。結(jié)合不同批次藥材質(zhì)量存在差異進(jìn)展考慮，暫定按枯燥品計(jì)算，甘草水制廣地龍中次黃嘌呤含量不得少于0.006%，肌苷含量不得少于0.40%。表3甘草水制廣地龍飲片中次黃嘌呤和肌苷的含量3討論建議甘草水制廣地龍飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為：水分含量5.0%，總灰分含量10.0%，酸不溶性灰分含量5.0%，水溶性浸出物濃度20.0%，乙醇浸提物濃度8.0%,次黃嘌呤含量0.006%，肌苷含量0.40%?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2022年版一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2022:80-81;附錄H,K,A.2龍艷華.地龍的化學(xué)及藥理研究概況J.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2022,18(4):379-381.3王筠默.中藥研究與臨床應(yīng)用.上海:上海中醫(yī)藥大學(xué)出版社,2022:245.4黃假設(shè)干,賓祖煥,梁峰,等.HPL法測(cè)定肌苷口服溶液中的有關(guān)物質(zhì)J.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2022,9(5):369-372.5李鐘,黃艷玲,李文姍.炮制對(duì)廣地龍次黃嘌呤和肌苷含量的影響J.中藥材,2022,32(1):31-32.6何琳,龍曉英.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定廣地龍飲