實(shí)驗(yàn)三莖尖培養(yǎng)技術(shù)

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)三莖尖培養(yǎng)技術(shù)第1頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三一、概念和意義1.概念莖尖培養(yǎng)（shoot tip culture）的含義比較廣，包括小到10100m的莖尖分生組織的培養(yǎng)，大到幾十毫米的莖尖或更大的芽的培養(yǎng)。一般培養(yǎng)材料體積?。ㄇo尖分生組織），成苗較難，成苗所需時(shí)間較長(zhǎng)；而培養(yǎng)材料體積大，成苗速度快，但污染率也較高。第2頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三種苗離體快速繁殖2. 意義莖尖培養(yǎng)在園藝植物的組織培養(yǎng)中應(yīng)用廣泛，主要用于種苗快速繁殖、脫毒苗的生產(chǎn)、品種改良和基礎(chǔ)理論研究。第3頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三莖

2、尖分生組織培養(yǎng)脫除病毒第4頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)并掌握植物莖尖離體培養(yǎng)的原理和方法；學(xué)習(xí)并掌握無(wú)菌操作技術(shù)。第5頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三三、實(shí)驗(yàn)原理： 以莖尖為外植體,經(jīng)過(guò)表面滅菌處理后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，促進(jìn)莖尖萌發(fā)成苗，獲得無(wú)菌系，并可在適當(dāng)濃度的植物激素和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的作用下進(jìn)一步增殖和生根，獲得完整植株。 莖尖培養(yǎng)包括起始培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)及馴化移栽等階段，不同培養(yǎng)階段要求不同的植物激素和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑條件。增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)馴化移栽起始培養(yǎng)第6頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三四

3、、實(shí)驗(yàn)材料：1. 植物材料：大蒜和不結(jié)球白菜；2. 培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 瓊脂6.5 g/L。3. 試劑：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸鈉、無(wú)菌水。4. 器材：酒精燈、培養(yǎng)皿、滅菌濾紙、鑷子、解剖刀等。第7頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三五、實(shí)驗(yàn)步驟：外植體的準(zhǔn)備：大蒜：剝?nèi)ニ獍甑耐馄?。不結(jié)球白菜：去除老化葉片，保留1-2片幼葉的葉柄；洗凈后在流水中沖洗10-20分鐘。2. 表面滅菌：在超凈工作臺(tái)上將外植體材料放到滅過(guò)菌的罐頭瓶?jī)?nèi)，加入75%的乙醇處理不超過(guò)30秒，然后倒出，加入1%的次氯酸鈉滅菌（小白菜10mi

4、n，大蒜處理20min），處理后用無(wú)菌水洗4-5次。第8頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三3. 莖尖分離及接種：用鑷子和解剖刀在滅菌濾紙上分離莖尖，用鑷子將分離的莖尖組織接種到培養(yǎng)基上，蓋好瓶蓋，貼好標(biāo)簽。第9頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三不結(jié)球白菜莖尖第10頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三 大蒜莖尖培養(yǎng) 不結(jié)球白菜莖尖培養(yǎng)4. 接種材料的培養(yǎng)：接種后的材料放到培養(yǎng)室，25，12h光照/12h黑暗條件下培養(yǎng)，3-4天可以觀察到莖尖開(kāi)始萌發(fā)生長(zhǎng)。第11頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)9分，星期三六、無(wú)菌操作注意事項(xiàng)：1.保持接種室整潔衛(wèi)生，穿上鞋套。2.超凈臺(tái)的準(zhǔn)備：超凈工作臺(tái)使用前用75%的乙醇擦拭。打開(kāi)紫外燈照射20-30分鐘，然后關(guān)閉紫外燈 ，打開(kāi)鼓風(fēng)機(jī)20分鐘左右排出臭氧等氣體。3. 接種前用75%乙醇擦拭手和手臂，以減少污染。待手上酒精干后，點(diǎn)燃酒精燈，再開(kāi)始操作。4.接種未滅菌用品用酒精棉擦拭，用品擺放合理。5.接種過(guò)程中工具應(yīng)充分灼燒，鑷子、解剖刀及瓶口要在酒精燈上灼燒。每切完一個(gè)外植體，每接種完一瓶外植體，鑷子、解剖刀都在酒精燈上燒一次。6.實(shí)驗(yàn)完成后，整理超凈臺(tái)，