薄荷藥材的提取與含量測(cè)定

1、薄荷藥材的提取與含量測(cè)定The extraction and content determination on Mentha hsplocalyx BriqHU Chun-lan1,2 GENG Rong-hui1,2 YANG Dong-li2,3 WANG Chun-min2,3 ZHANG Dong-ge2 ZHANG Huan2PEI You-zhi21.Institute of Traditional Chinese Medicine,Chengde Medical University,Chengde 067000,China;2Jingfukang Pharmaceutical

2、Group,Chengde City in Hebei Province,Chengde 067000,China;3.The New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province,Chengde 067000,China Objective To explore the methods for extraction and content determination on Mentha haplocalyx Briq. Methods Menthol was a

3、s the index components.DM-FFAP chromatographic column was applied,with initialtemperature set at 120C ,the n heated up to 140C at thespeed of 2 C /min,then heated up to 220 C at the speed of 15C /min,then maintained the temperature at 220C for 5minutes.The optimal extraction method was selected base

4、d on comparison of Soxhlet extraction,heat reflux extraction and ultrasonic extraction. Results The study identifiedthe optimal extraction process: adding 10 times amount of anhydrous ethanol solution then heat reflux extraction under 85 C water bath for 1 hour.Menthol had good linear relation at th

5、e concentrationof 34.034-343.04 卩 g/ml,withaverage recovery rate of99.00%，RSD=1.87% (n=6).Conclusion The extraction and content determination methods developed in the study are quick,simply,conveninent and reliable,providing scientific basis for qualitycontrol of Mentha haplocalyxBriq.薄荷為唇形科植物薄荷( Me

6、ntha haplocalyx Briq )的干燥 地上部分 1 ，其藥用歷史悠久，廣泛應(yīng)用于食品、香料、化妝 品、煙草工業(yè)等。研究報(bào)道，薄荷中含有薄荷腦、薄荷酮、檸檬 烯等揮發(fā)性成分， 還有黃酮類(lèi)、 有機(jī)酸、氨基酸等其他成分 2-6 。 薄荷腦應(yīng)用于皮膚或黏膜表面時(shí)主要有清涼作用，促滲透作用， 抗刺激作用，止癢作用；薄荷醇可作用于口腔和鼻腔黏膜、呼吸 系統(tǒng)、胃腸道、膀胱或中樞神經(jīng)系統(tǒng) 7-8 。中國(guó)藥典 2005 年版一部中，僅收載了以揮發(fā)油總量為指標(biāo)對(duì)其含量進(jìn)行控制， 缺乏代表性成分薄荷腦的含量測(cè)定項(xiàng)。 很多文獻(xiàn)通過(guò)提取薄荷藥 材中揮發(fā)油， 再檢測(cè)揮發(fā)油中的薄荷腦 9-15 ，本研究采用加

7、熱 回流法直接提取薄荷藥材中的薄荷腦， 并采用氣相色譜法對(duì)薄荷 腦的含量進(jìn)行測(cè)定，以期為薄荷藥材的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。儀器與材料Agilent7890A 氣相色譜儀。薄荷腦對(duì)照品（批號(hào)： 110728-200506，供含量測(cè)定用，中國(guó)生物制品檢定所），薄荷 藥材由頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán) XX公司提供（批號(hào)：Y444-110901-1 ）, 其他試劑均為分析純。方法與結(jié)果色譜條件色譜柱：DM-FFAP單性石英毛細(xì)管柱（30 mK 0.250.25卩n） ; FID檢測(cè)器；載氣：N2;流速：1 ml/min ;進(jìn)樣口和檢 測(cè)器溫度：250C ；柱溫：初始溫度 120C，然后以2C/min持 續(xù)升溫至1

8、40C,再以15C/min持續(xù)升溫至 220C,保持5 min; 進(jìn)樣量：1卩l(xiāng) ;分流比：10 : 1。對(duì)照品溶液的制備取薄荷腦對(duì)照品約35 mg精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇定容至10ml，搖勻，制成濃度為3.371 mg/ml的對(duì)照品溶液，備用。提取條件的建立提取方法的考察2.3.1.1索式提取法取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 8 g，精 密稱(chēng)定，置于索氏提取器中，于圓底燒瓶中精密加入 100 ml 正 己烷，稱(chēng)重，85C回流提取2 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量， 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。2.3.1.2 加熱回流提取法取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）4 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 ml正

9、己烷，85C回流提取 2 h ，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾 液進(jìn)樣。超聲提取法取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 4 g，精 密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷50 ml，稱(chēng)重，冰水浴超聲（280 kW, 50 kHz），提取30 min，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足 減失的重量，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。種方法比較， 結(jié)果見(jiàn)表 1，表明加熱回流提取效率最高。表 1 不同提取方法薄荷腦的含量（ n=3）提取溶劑的考察 取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 4 g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入三氯甲烷、正己烷、無(wú)水乙醇50 ml，稱(chēng)重，85C回流2 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜

10、過(guò)濾，取 續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表 2，表明無(wú)水乙醇提取效率最高。表 2 不同提取溶劑薄荷腦的含量（ n=3）提取時(shí)間的考察取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 4 g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形 瓶中，共3份，分別精密加入無(wú)水乙醇 50 ml，稱(chēng)重，于85C水 浴鍋中，提取時(shí)間分別為1、2、3 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重 量，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表 3，表明 1 h 已基 本提取完全。表 3 不同提取時(shí)間薄荷腦的含量（ n=3）提取溫度的考察取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 4 g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形 瓶中，精密加入無(wú)水乙醇 50 ml，共3份，稱(chēng)重，分別于85、90、 95C水浴鍋中，回流提取1

11、 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微 孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表 4,表明85C的水浴溫度 足以提取充分。表 4 不同提取溫度薄荷腦的含量（ n=3）提取溶劑用量的考察取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）4 g，精密稱(chēng)定，共3份，分 別精密加入 40、 50、 60 ml 的無(wú)水乙醇，稱(chēng)重，回流提取 1 h， 冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié) 果見(jiàn)表 5，表明不同提取劑量對(duì)薄荷藥材中薄荷腦的提取效率影 響不大。表5 不同提取溶劑用量薄荷腦的含量（ n=3） 綜上所述，通過(guò)單因素循環(huán)法對(duì)提取方法、提取溶劑、提取 時(shí)間、提取溫度及提取溶劑用量的考察， 確定最佳提取工藝為加 10

12、倍的無(wú)水乙醇溶液85C加熱回流提取1 h。2.4 含量測(cè)定方法的建立2.4.1 供試品溶液的制備取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 4 g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形 瓶中，精密加入40 ml無(wú)水乙醇溶劑，稱(chēng)重，85C加熱回流提取1 h ，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn) 樣。線性范圍分別精密量取上述薄荷腦對(duì)照品溶液0.1 、0.15 、0.2 、0.5 、0.75 、1 ml ，于 5 ml 容量瓶中，無(wú)水乙醇定容，配置成6個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，按本文色譜條件測(cè)定。以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程： Y=1.0393X+0.0082 ，r

13、=0.9999 （n=6）。精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄薄荷腦的峰面積，RSD為 0.97%。穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別于 0、2、4、 6、24 h 測(cè)定，記錄薄荷 腦的峰面積，RSD=0.77%結(jié)果表明供試品溶液在 24 h內(nèi)穩(wěn)定性 良好?；厥章试囼?yàn)采用加樣回收法。取薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩） 2 g ，精密 稱(chēng)定，分別精密加入對(duì)照品溶液 2.6 ml ，共 6 份。精密加入無(wú) 水乙醇40 ml，稱(chēng)重85C加熱回流提取1 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足 減失重量， 微孔濾膜過(guò)濾， 取續(xù)濾液進(jìn)樣。 按上述色譜條件測(cè)定， 平均回收率為 99.00%，RSD=1.83%結(jié)果見(jiàn)表6。表

14、 6 薄荷腦含量測(cè)定的回收率結(jié)果（ n=6）藥材的測(cè)定 取承德市不同藥房的薄荷藥材粉末（過(guò)二號(hào)篩）4 g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入 40 ml 無(wú)水乙醇溶液，稱(chēng)重， 85C加熱回流提取1 h，冷卻，稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜 過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表 7、圖 1。表7 不同藥房藥材中薄荷腦的含量（ n=6）提取方法的比較 用上述最佳提取方法和水蒸氣蒸餾法（ 2010 年版中國(guó)藥 典一部）提取揮發(fā)油，比較兩者中薄荷腦含量大小。結(jié)果見(jiàn)表 8，表明加熱回流法能提取出比傳統(tǒng)方法更多的薄荷腦。表 8 不同提取方法薄荷腦的含量（ n=2）3 討論 本試驗(yàn)用三氯甲烷、正己烷、無(wú)水乙醇溶劑提取，無(wú)水乙醇 提取效率最高，而且無(wú)水乙醇價(jià)格便宜，無(wú)毒，三氯甲烷、正己 烷有一定毒性， 但是無(wú)水乙醇提取出大量的葉綠素， 可能會(huì)污染 柱子，葉綠素的去除方法有待研究。通過(guò)對(duì)承德市 6 個(gè)不同藥房的薄荷藥材中薄荷腦含量測(cè)定， 結(jié)果表明， 不同藥材中薄荷腦的含量差別很大， 其中三家藥房的 藥材中沒(méi)有薄荷腦， 可能藥材質(zhì)量不同， 也可能是藥材存放不當(dāng) 導(dǎo)致含量損失。中國(guó)藥典 2010 版一部中只對(duì)薄荷中揮發(fā)油 含量進(jìn)行了限定， 所以建立薄荷藥