NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)分析

1、NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)分析軒青霞;戴發(fā)亮;陳攀;馮丹丹;金建軍;高強(qiáng)【摘要】目的探討NADPH氧化酶家族（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs）的主要成員 N0X1、N0X2 和雙氧化物酶（dual oxidase,DUOX）2 （人:NOX1、NOX2 和 DUOX2;小鼠:Nox1、Nox2 和 Duox2）在 人炎癥性腸病和小鼠腸炎模型結(jié)腸中的表達(dá).方法 人結(jié)腸標(biāo)本選自于通過結(jié)腸鏡活 檢或手術(shù)切除的炎癥性腸病組織及距離病變組織邊緣5 cm以上正常組織;同時(shí)選 用81

2、0周齡的C57BL/6雌性小鼠建立結(jié)腸炎模型，采用擲硬幣法將其隨機(jī)分為對 照組和慢性腸炎組，慢性腸炎組先自由飲用1.0%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）葡聚糖硫酸鈉7 d,然后 自由飲水14 d,循環(huán)3次;通過體質(zhì)量變化和HE染色方法評估腸道炎性反應(yīng)程度采 用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法分別檢測結(jié)腸組織中NOX1、NOX2及 DUOX2 mRNA和蛋白表達(dá)情況,并分析在人炎癥性腸病中三者表達(dá)情況與臨床特 征之間的關(guān)系結(jié)果NOX1、NOX2和DUOX2 mRNA在人炎癥性腸病結(jié)腸組織中 的表達(dá)量均顯著高于自身正常對照組織，分別增高2.8、2.0和3.3倍（P均0.01）；與 人不同,Nox1和Duox2 m

3、RNA在小鼠慢性腸炎結(jié)腸組織中的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義,Nox2 mRNA增加2.4倍（PvO.OI）.Noxl蛋白在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞刷狀緣 和胞質(zhì)中表達(dá)；Nox2蛋白主要表達(dá)于浸潤的吞噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞;Duox2蛋白在 正常結(jié)腸黏膜組織中低表達(dá);三者在人炎癥性腸病結(jié)腸組織中表達(dá)均上調(diào)（均 PvO.01）；在小鼠慢性腸炎模型中,Nox2和Duox2蛋白上調(diào)（均P0.01）,而Nox1 無變化除了 NOX2 mRNA在男性病人表達(dá)高于女性病人外,未發(fā)現(xiàn)這些氧化酶與 病人臨床特征之間有關(guān)聯(lián)結(jié)論NOX1、NOX2和DUOX2不但在維持機(jī)體正常生 理功能過程中發(fā)揮重要作用,而且在炎癥性腸病初期階段

4、的發(fā)病中也起一定的作 用.Objective To investigate the expression of N0X1,N0X2 and DUOX2,the members of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase family,in large intestine of patients with inflammatory bowel disease (IBD) and mouse colitis and analyze the relationship between these enzymes and

5、IBD.Methods The samples were collected from large intestine of patients with IBD.Mouse chronic colitis model was established by using eight to ten-week-old C57BL/6 mice treated with three cycles of drinking 1.0% dextran sulfate sodium (DSS) for 7 days plus drinking water for 14 days.Mouse body weigh

6、t change and hematoxylin- eosin (HE) staining of colon sections were used to evaluate the severity of inflammatory lesions.The expression of N0X1,N0X2 and DU0X2 gene and protein were detected by real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry,

7、respectively.Results The expression of N0X1,N0X2 and DU0X2 mRNA significantly increased in human inflamed tissues compared to paired normal tissues (all P0.01).N0X2 mRNA higher in male patients than female.Unlike human,only Nox2 mRNA increased by 2.4 times in chronic colitis mice,Nox1 and Duox2 mRNA

8、 remained unchanged.These three proteins in IBD patients increased (all P0.01);in chronic colitis mice Nox2 and Duox2 proteins increased (both P0.01),but Nox1 did not.Conclusion N0X1,N0X2 and DU0X2 not only play an important role in maintaining the normal physiological function,but also were associa

9、ted with early onset IBD.期刊名稱】首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)年(卷),期】2017(038)002【總頁數(shù)】7頁(P220-226)【關(guān)鍵詞】NADPH氧化酶;NOX1;NOX2;DUOX2;炎癥性腸病【作 者】 軒青霞;戴發(fā)亮;陳攀;馮丹丹;金建軍;高強(qiáng)【作者單位】 河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 洛陽 471023;河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 洛陽 471023;河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 洛陽 471023;河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南

10、 洛陽 471023;河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 洛陽 471023;河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,河南 洛陽 471023;首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京康復(fù)醫(yī)院消化內(nèi)科, 北京 100144【正文語種】 中 文【中圖分類】 R574炎癥性腸病 (inflammatory bowel disease, IBD) 是一種慢性非特異性腸道炎性反 應(yīng)性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)和克羅恩病(Crohns disease, CD)。目前其發(fā)病機(jī)制及病因尚未明確，多認(rèn)為是免疫、腸道菌群、遺傳 和環(huán)境等多因素

11、相互作用的結(jié)果1。在炎癥性腸病發(fā)生發(fā)展過程中，多種因素可 導(dǎo)致易感個(gè)體腸道內(nèi)環(huán)境破壞，引起腸道黏膜免疫功能失調(diào)，從而造成黏膜屏障的 損傷2。氧化應(yīng)激 (oxidative stress) 被認(rèn)為是導(dǎo)致腸道損傷的關(guān)鍵因素3-4。 氧化應(yīng)激是指機(jī)體內(nèi)活性氧類 (reactive oxygen species, ROS) 和活性氮類 (reactive nitrogen species, RNS) 產(chǎn)生過多，超出機(jī)體對氧化產(chǎn)物的清除能力， 進(jìn)而導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷的病理生理過程。NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,

12、NOXs)是腸道黏膜 ROS 的重要來 源，正常生理情況下ROS在腸道抵御病原微生物中發(fā)揮重要作用5-6。作為 NADPH氧化酶家族的成員，NOX1、NOX2和雙氧化物酶(dual oxidase, DUOX)2(人：NOX1、NOX2 和 DUOX2 ;小鼠：Nox1、Nox2 和 Duox2)均能 產(chǎn)生ROS，其中DUOX2可產(chǎn)生H2O27。NOX1和DUOX2在消化道黏膜上皮 表達(dá)，而NOX2主要在巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中表達(dá)8。研究9顯示NADPH 氧化酶在IBD疾病發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮作用，但國內(nèi)外研究有限。本研究通過 檢測潰瘍性結(jié)腸炎病人結(jié)腸組織和與潰瘍性結(jié)腸炎相似的小鼠葡聚糖硫酸鈉

13、 (dextran sulfate sodium，DSS)慢性結(jié)腸炎模型結(jié)腸中 NOX1、NOX2 和 DUOX2的表達(dá)情況，探討NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在IBD發(fā) 生和發(fā)展中的作用，尤其是小鼠慢性結(jié)腸炎模型結(jié)腸中NADPH氧化酶的研究目 前國內(nèi)外尚未見報(bào)道。材料臨床資料 取自28例2013年11月至2015年11月在河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的復(fù) 發(fā)的活動(dòng)期潰瘍性結(jié)腸炎病人，其中，男性病人18例，女性病人10例，年齡 16-76歲，平均年齡(46.514.7)歲；病變部位位于結(jié)腸12例，直腸16例；活 檢伴不典型增生者21例，不伴不典型增生者7例。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康清潔

14、級8-10周齡(體質(zhì)量20 23 g)C57BL/6雌性小鼠購于北京維通 利華公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號：SYKK(豫)2016-0001，飼養(yǎng)于河南科技大學(xué)第一 附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，室內(nèi)溫度保持20 OC-22 C,濕度50%左右，明暗交替 周期12 h。各組小鼠均給予Co60輻照滅菌混合配方顆粒飼料(北京華阜康生物科 技股份有限公司）飼養(yǎng)。主要試劑DSS（相對分子質(zhì)量為36 000 50 000）購于美國MP Biomedicals公司。總RNA 提取試劑TRIzol Reagent產(chǎn)于美國Invitrogen公司，反轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR試 劑盒購于日本Takara公司，引物由生工生物工程（

15、上海）有限公司合成（表1）。免疫 組織化學(xué)檢測用NOX1和Nox1 抗分別購于武漢博士德生物公司和英國Abeam 公司；NOX2/Nox2 抗購于美國Santa Cruz公司；DUOX2和Duox2 一抗分 別購于北京博奧森和美國Gene Tex公司；SABC免疫組織化學(xué)檢測試劑盒購于武 漢博士德生物公司；濃縮型DAB顯色試劑盒購于北京索萊寶公司。F:forward; R:reverse.方法臨床取材 搜集結(jié)腸鏡活檢或手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的病變結(jié)腸組織標(biāo)本與距病變組織邊緣5 cm以上的正常組織，預(yù)冷的PBS清洗，一部分組織甲醛固定，石蠟包埋，4pm 厚度切片，備免疫組織化學(xué)使用，剩余的樣本在-

16、80 C儲(chǔ)存，行實(shí)時(shí)定量PCR測 定。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與取材 將小鼠以個(gè)體為單位采用擲硬幣的方法（正、反面分別代表實(shí)驗(yàn)組和對照組）隨機(jī)分 配到對照組和實(shí)驗(yàn)組（DSS組），每組8只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，對照組自由飲水； 慢性腸炎組先給予含1.0%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）DSS飲用水自由飲用7 d，然后給予飲用水 自由飲用14 d ，循環(huán)3次。于造模第9周末脫頸椎處死所有小鼠，剖腹取結(jié)腸，PBS漂洗，自遠(yuǎn)端結(jié)腸始取約0.5 cm，甲醛液固定，經(jīng)脫水后石蠟包埋,4pm厚 度切片，備免疫組織化學(xué)及HE染色使用。再取1.0 cm加入RNA later液，4 C 放置24 h后轉(zhuǎn)移至-80 C保存，行實(shí)時(shí)定量PCR。1.2.

17、3實(shí)時(shí)定量PCR檢測人和小鼠NOX1、N0X2和DU0X2 mRNA表達(dá)水平 取200 mg結(jié)腸組織，放到無RNase的1.5 mL離心管中，采用Trizol法提取總 RNA，用核酸定量儀測定RNA純度和濃度。取總RNA 2pg,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒 說明書反轉(zhuǎn)錄合成cDNA , -20 C保存?zhèn)溆?。冰上配制PCR反應(yīng)液，反應(yīng)體系 25pL:SYBR Premix EX Taq 口(2x) 12.5pL, DEPC 水 8.5pL,cDNA 2pL,上 下游引物各1pL,于BIO-RAD Real-time PCR儀中進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為： 95 C預(yù)變性30 s ,95 C 5 s、59

18、C 30 s、95 C 15 s,共40個(gè)循環(huán)。結(jié)果以閾 循環(huán)(Ct)值表示，p-actin作為內(nèi)參基因，每個(gè)樣本3個(gè)復(fù)孔，各樣本的待測基因 擴(kuò)增量與P-actin基因擴(kuò)增量采用Log10 (2-AACt)法分析mRNA相對表達(dá)量。 平均Ct值超過35，視為該目標(biāo)基因無表達(dá)。1.2.4免疫組織化學(xué)方法檢測人和小鼠NOX1、NOX2和DUOX2的蛋白表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色NOX1、NOX2和DUOX2 抗工作濃度分別為1:100、 1:200 和 1:300; Nox1、Nox2 和 Duox2 一抗工作濃度分別為 1:250、 1:200和1:300,陰性對照組均使用PBS溶液代替一抗。在光學(xué)

19、顯微鏡下進(jìn)行 細(xì)胞計(jì)數(shù),每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)視野,每個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞。染色細(xì)胞比 率評分標(biāo)準(zhǔn):5%計(jì)0分，5% 25%計(jì)1分，26% 50%計(jì)2分,51%- 75%計(jì) 3分,76%-100%計(jì)4分；染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞無染色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1 分,棕色計(jì) 2 分,棕褐色計(jì) 3 分,根據(jù)兩項(xiàng)評分乘積進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色評分統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差)表示，獨(dú)立樣 本組間比較采用t檢驗(yàn)，配對數(shù)據(jù)比較采用配對t檢驗(yàn)，重復(fù)測量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測 量數(shù)據(jù)方差分析法。以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.1人結(jié)腸組織中NOX1、NOX2和DUOX2 m

20、RNA和蛋白的表達(dá)與正常組織相比，NOX1、NOX2與DUOX2 mRNA在炎性反應(yīng)組織的表達(dá)均顯 著升高。炎癥性腸病組N0X1、N0X2與DUOX2 mRNA的表達(dá)量分別是正常組 織中的2.8、2.0和3.3倍（P均0.01）（圖1）。NOX1蛋白在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞刷 狀緣和胞質(zhì)表達(dá)；NOX2蛋白主要表達(dá)于浸潤的吞噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞；DUOX2 蛋白在正常結(jié)腸黏膜組織中低表達(dá)；這3種蛋白在炎癥性腸病結(jié)腸組織中的表達(dá) 較正常對照組均顯著升高（P均 0.01），NOX2蛋白炎性反應(yīng)區(qū)域可見炎性反應(yīng)樣 細(xì)胞呈陽性染色；NOX1和DUOX2在上皮細(xì)胞刷狀緣和胞質(zhì)表達(dá)明顯增加（表2 和圖2）。2.2結(jié)

21、腸炎性反應(yīng)組織中NOX1、NOX2與DUOX2 mRNA和蛋白表達(dá)與臨床病 理特征的關(guān)系比較不同病人臨床病理特征與NOX1、NOX2及DUOX2 mRNA和蛋白表達(dá)量之 間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)除結(jié)腸炎組織中NOX2 mRNA表達(dá)水平的升高與性別相關(guān)，男性 病人NOX2 mRNA表達(dá)水平較女性高外（P0.05），而其他臨床特征如年齡、病 程、病變部位以及吸煙飲酒史等與這3個(gè)基因的表達(dá)無相關(guān)性；發(fā)現(xiàn)NOX1、 NOX2與DUOX2蛋白的表達(dá)與病人臨床病理特征之間沒有顯著的相關(guān)性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠一般情況和體質(zhì)量變化 對照組小鼠攝食飲水正常，反應(yīng)機(jī)警，生長發(fā)育良好，體質(zhì)量增加；慢性腸炎組于 第7 d開始飲用

22、1.0%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）DSS，飲用6 d出現(xiàn)懶動(dòng)，攝食飲水減少，體質(zhì) 量下降，稀便、肛周潮濕現(xiàn)象，部分小鼠出現(xiàn)肉眼血便，停止飲用1.0%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）DSS后的第4 d體質(zhì)量開始回升，在第1個(gè)循環(huán)周期中平均體質(zhì)量下降近10%， 在第2、3循環(huán)中，上述癥狀反復(fù)出現(xiàn)，慢性腸炎組小鼠體質(zhì)量自第2周起至造模 結(jié)束均低于對照組（P0.05）（圖3）。造模結(jié)束時(shí)，兩組小鼠均無死亡。組織病理學(xué)評分 對照組可見小鼠結(jié)腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)完整，無炎性反應(yīng)表現(xiàn)；慢性腸炎組小鼠結(jié)腸黏 膜呈慢性炎性反應(yīng)改變，腺體結(jié)構(gòu)不完整，隱窩結(jié)構(gòu)遭到破壞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列紊亂， 杯狀細(xì)胞減少或消失，局部伴有炎性反應(yīng)細(xì)胞浸潤，并可見隱窩不規(guī)則增生

23、；兩組 相比炎性反應(yīng)程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）（表3）。2.3.3小鼠結(jié)腸組織中Nox1、Nox2和Duox2 mRNA的表達(dá)Nox1和Duox2 mRNA在對照組和慢性腸炎組結(jié)腸組織中沒有差別，而Nox2 mRNA在慢性腸炎組結(jié)腸組織的表達(dá)較對照組升高2.4倍（P0.01）（圖4）。2.3.4小鼠結(jié)腸組織中Nox1、Nox2和Duox2蛋白的表達(dá)Nox1蛋白在正常結(jié)腸組織中表達(dá)，且主要表達(dá)在上皮細(xì)胞刷狀緣和胞質(zhì)；Nox2 蛋白主要表達(dá)在吞噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中；Duox2蛋白在正常的上皮細(xì)胞刷 狀緣少量表達(dá)。Nox1蛋白在對照組和慢性腸炎組結(jié)腸組織中無差別，而Nox2和 Duox2

24、在慢性腸炎組結(jié)腸組織的表達(dá)較對照組均顯著升高（P均0.01）（表3和圖 5）。IBD是西方國家的常見病，由于環(huán)境和飲食習(xí)慣的變化，我國IBD的總報(bào)道病例 數(shù)量在近十余年內(nèi)增加了 2.5倍，尤其是CD增加了 15.7倍10-11。NOX1、 NOX2和DUOX2作為ROS的重要來源，正常情況下，NOX家族氧化酶產(chǎn)生的 ROS參與維持細(xì)胞的正常生理活動(dòng)，但當(dāng)機(jī)體受到各種因素刺激時(shí)，引發(fā)NOX 家族氧化酶過表達(dá)產(chǎn)生大量ROS，過多的ROS可激活核因子介導(dǎo)產(chǎn)生大量的細(xì)胞 促炎因子，促進(jìn)炎性反應(yīng)12。但有關(guān)NOX1、NOX2和DUOX2在IBD疾病發(fā) 生和發(fā)展過程中的研究仍有限。本研究結(jié)果顯示，NOX1

25、蛋白和mRNA在正常的結(jié)腸黏膜組織上皮細(xì)胞中表達(dá)， 在炎性反應(yīng)結(jié)腸組織中，NOX1表達(dá)明顯上調(diào)，提示NOX1除維持正常生理功能 過程外，還在IBD病理過程中發(fā)揮重要作用，可能參與早期階段的炎癥性腸病的 發(fā)生。生理狀態(tài)下N0X1源性ROS參與調(diào)節(jié)結(jié)腸上皮細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)化，并維持杯 狀細(xì)胞和吸收細(xì)胞功能的穩(wěn)態(tài)13。當(dāng)NOX1過度表達(dá)，增高的NOX1產(chǎn)生大量 的 ROS 可以激活多種轉(zhuǎn)錄因子，活化的轉(zhuǎn)錄因子又能促進(jìn)細(xì)胞因子類基因的轉(zhuǎn)錄， 而細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄又會(huì)進(jìn)一步加劇炎性反應(yīng)14-15。研究16-18表明Nox1參與 細(xì)胞的增生、遷移和凋亡，并調(diào)控結(jié)腸上皮細(xì)胞的修復(fù)和宿主免疫防御功能，且與 早期發(fā)生的

26、炎癥性腸病有關(guān)。本研究中NOX1在人類炎癥性腸病的腸炎上皮細(xì)胞 中表達(dá)，這與Szanto等19啲研究結(jié)果一致；而慢性腸炎動(dòng)物模型結(jié)果顯示， Nox1 mRNA和蛋白在慢性腸炎和對照組結(jié)腸組織中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 可能是由于Nox1主要在腸黏膜上皮表達(dá)，慢性炎性反應(yīng)時(shí)腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)破壞 嚴(yán)重，上皮細(xì)胞大量丟失所致。本研究結(jié)果顯示NOX2 mRNA和蛋白在人和小鼠結(jié)腸黏膜炎性反應(yīng)組織中的表達(dá) 量較對照組明顯增高，這與炎性反應(yīng)組織中炎性細(xì)胞增多有關(guān)，提示在IBD疾病 的發(fā)生發(fā)展中，NOX2可能在宿主免疫中發(fā)揮重要作用。靜息狀態(tài)時(shí)，NOX2定 位在細(xì)胞內(nèi)，不產(chǎn)生ROS，當(dāng)受到外界刺激，如：病原微

27、生物和細(xì)胞因子等， NOX2可易位到細(xì)胞表面并被迅速激活，產(chǎn)生大量ROS ;過量的ROS可與細(xì)胞大 分子發(fā)生反應(yīng)，使DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)受到嚴(yán)重的氧化損傷，從而使腸上皮細(xì)胞 結(jié)構(gòu)與功能受損最終可導(dǎo)致細(xì)胞壞死，甚至死亡；此外，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的ROS還可 以通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活NOX22O。NOX2不僅在抵御細(xì)菌入侵中起重要作用， 而且還參與炎性反應(yīng)的許多信號通路，如炎性反應(yīng)因子反應(yīng)、中性粒細(xì)胞的聚集和 轉(zhuǎn)錄21。研究22-23顯示NOX2功能受損與小于6歲的IBD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 DUOX2是腸道黏膜H2O2的主要產(chǎn)生者，在整個(gè)消化系均有表達(dá)24-25，生理 情況下，H2O2可抵御細(xì)菌侵入和調(diào)控腸道

28、菌群，參與腸道黏膜固有免疫應(yīng)答26。 但H2O2產(chǎn)生過量時(shí)可導(dǎo)致氧化應(yīng)激，引起組織損傷3，27-28。對GPX1/2雙 敲小鼠的研究22，29顯示Duox2可能是結(jié)腸炎的候選易感基因，在小鼠和人炎性反應(yīng)性腸病中均發(fā)現(xiàn)DU0X2和IBD有密切的聯(lián)系，并參與初期炎性反應(yīng)性腸 病的發(fā)生。本臨床研究結(jié)果顯示DUOX2 mRNA和蛋白在正常結(jié)腸組織中有一定 量的表達(dá)，在炎性反應(yīng)性結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá)量明顯升高；慢性腸炎動(dòng)物模型結(jié) 果顯示，慢性腸炎時(shí)Duox2蛋白表達(dá)水平均上調(diào)，mRNA 上調(diào)不明顯，提示 DUOX2除維持結(jié)腸組織正常生理功能外，可能在炎性反應(yīng)過程中也發(fā)揮作用?？傊狙芯拷Y(jié)果顯示IBD病

29、人病變組織中NOX1、NOX2和DUOX2基因或/和 表達(dá)明顯高于對照組；并首次在慢性結(jié)腸炎動(dòng)物模型中得到相似的結(jié)論，提示這些 NADPH氧化酶不但在維持機(jī)體正常生理功能過程中發(fā)揮重要作用，而且在炎癥性 腸病初期階段的發(fā)病中也起一定的作用，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究?！鞠嚓P(guān)文獻(xiàn)】Kaser A, Zeissig S, Blumberg R S. Inflammatory bowel diseaseJ. Ann Rev Immunol,2010,28: 573-621.Maloy K J, Powrie F. Intestinal homeostasis and its breakdown in

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