葛根總黃酮提取工藝的比較

1、葛根總黃酮提取工藝的比擬【摘要】目的優(yōu)選葛根總黃酮的提取工藝。方法采用水浴回流、微波和超聲波輔助3種方法提取葛根總黃酮，正丁醇萃取純化。結(jié)果微波輔助提取所得總黃酮提取率最高，提取率為91.68%，純化后，總黃酮純度為87.56%;超聲波輔助提取次之，提取率為87.88%;水浴回流提取最低，提取率為85.35%。結(jié)論微波輔助提取法節(jié)能、高效，且污染小，具有應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】葛根;總黃酮;水浴回流法;微波法;超聲波法Abstrat：bjetiveTptiizetheextratinpressfttalflavnidsfrradixpuerariae.ethdsaterirufluene,irav

2、e-assisted,ultrasniave-assistedandn-Butanlereeplyedintheextratinandpurifiatinpressesfttalflavnids.ResultsTheextratinratefttalflavnidsbtainedbyirave-assistedashigherthanthethers,theyieldas91.86%,andthepurityasupt87.56%afterpurifiatin.Theextratinratesfultrasniave-assistedandateriruflueneere87.88%,85.3

3、3%,respetively.nlusinirave-assistedethdisenergy-saving,effiientandhaslittlepllutin,hihanbeusedtextratttalflavnids.Keyrds：RadixPuerariae;Ttalflavne;aterirufluene;irave;Ultrasniave葛根屬豆科植物野葛Puerarialbata(illd.)hi的塊根1，2，其所含有效成分總黃酮能降低心肌耗氧量，增加冠脈、腦血管血流量，明顯緩解心絞痛、抗心律失常等3，對防治心肌堵塞、心律失常等也有重要療效4，5。葛根總黃酮的提取通常采用水提

4、法和有機(jī)溶劑提取法6。本實(shí)驗(yàn)以乙醇為溶劑，用紫外分光光度法分析葛根總黃酮的含量，比擬了水浴回流提娶微波輔助提取和超聲波輔助提取3種提取方法，為確定葛根總黃酮的提取工藝提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料與儀器1.1原料和試劑葛根購自湖北三九大藥房，粉碎過20目篩備用;葛根素對照品購自中國藥品生物制品檢定所;所用試劑均為分析純，水為去離子水。1.2儀器XTB數(shù)顯恒溫水浴鍋，武漢市琴臺醫(yī)療器械廠產(chǎn)品;XH-100A微波催化合成/萃取儀，北京祥鵠科技開展產(chǎn)品;KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器產(chǎn)品;UV-2450紫外分光光度計(jì)，日本島津公司產(chǎn)品;Agilent1100系列高效液相色譜儀，美國Agil

5、ent公司產(chǎn)品。2方法2.1分析方法2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精細(xì)稱取葛根素對照品5.5g，用95%乙醇溶解并定容于50l容量瓶中，得0.11g/l的葛根素標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確汲取該標(biāo)準(zhǔn)溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0l于10l容量瓶中，蒸餾水稀釋定容，得系列對照品溶液。以1.0l95%乙醇加水至10l作空白對照，于250n處7測定各對照品溶液吸光度，得到吸光度A與總黃酮質(zhì)量濃度(g/l)的線性回歸方程：=0.01502A-0.000041，r=0.99992。2.1.2葛根中總黃酮含量的測定稱取枯燥葛根10.0g，參加200l80%乙醇，在80水浴下回流提取2h，抽濾。同條件下

6、反復(fù)提取6次，得葛根總黃酮提取液，測定提取液中總黃酮濃度并計(jì)算葛根中總黃酮含量為8.4%。2.1.3葛根提取液中總黃酮含量的測定準(zhǔn)確汲取葛根總黃酮提取液1l于50l容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，按上述“2.1.1項(xiàng)的方法操作，測定吸光度，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算各提取液中總黃酮濃度。葛根總黃酮提取率：X=50250101000100%其中：X總黃酮提取率(%);由線性回歸方程計(jì)算出的提取液中總黃酮濃度(g/l);50稀釋倍數(shù);250提取液體積(l);10葛根質(zhì)量(g);1000葛根中總黃酮含量(g/g)。2.1.4色譜條件InertsilDS-318色譜柱(2504.6，5);流動相為甲醇水(257

7、5);柱溫30;流速1.0l/in;檢測波長250n;進(jìn)樣量10l。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1水浴回流提取法準(zhǔn)確稱取枯燥葛根10.0g，放入三口圓底燒瓶中，參加乙醇，水浴下回流提取后抽濾，濾液冷卻至室溫，用同濃度的乙醇定容至250l，得葛根總黃酮提取液，測定該提取液中總黃酮濃度。2.2.2微波輔助提取法準(zhǔn)確稱取枯燥葛根10.0g，放入三口圓底燒瓶中，參加體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇，微波萃取后抽濾(微波萃取示意圖見圖1)，濾液冷卻至室溫，80%乙醇定容至250l，得葛根總黃酮提取液，測定該提取液中總黃酮濃度。2.2.3超聲波輔助提取法準(zhǔn)確稱取枯燥葛根10.0g，放入三口圓底燒瓶中，參加80%乙醇，超聲

8、波輔助提取后抽濾，濾液冷卻至室溫，80%乙醇定容至250l，得葛根總黃酮提取液，測定該提取液中總黃酮濃度。2.2.4正丁醇萃取法8分別稱取各優(yōu)化工藝下的提取物2g，40l蒸餾水溶解，用200l水飽和的正丁醇萃取，將正丁醇相減壓濃縮、真空枯燥，得黃酮粉末，稱重，測定總黃酮的濃度，計(jì)算產(chǎn)品純度及產(chǎn)率。圖1微波萃取儀示意圖3結(jié)果3.1水浴回流提取法優(yōu)化工藝確實(shí)定采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取提取時(shí)間(A)、乙醇濃度(B)、提取溫度()、液固比(D)為考察因素，以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用L9(34)表。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1L9(34)水浴回流提取法的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)從表1結(jié)果可以看出，各因素對提取效果的影響

9、作用大小依次為(提取溫度)A(提取時(shí)間)B(乙醇濃度)D(液固比)，其中提取溫度對葛根總黃酮的提取效果影響最大，而液固比和乙醇濃度對提取無顯著影響。極差分析結(jié)果說明，水浴提取葛根總黃酮的優(yōu)化工藝為A3B23D3，即：提取時(shí)間120in，乙醇濃度80%，提取溫度80，液固比201。按水浴回流提取法的優(yōu)化工藝進(jìn)展驗(yàn)證，即按因素組合A3B23D3平行提取3次，提取率分別為84.92%，85.16%，85.98%，RSD為0.65%，該工藝穩(wěn)定可行，葛根總黃酮的平均提取率為85.35%。3.2微波輔助提取法優(yōu)化工藝確實(shí)定根據(jù)水浴回流提取法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以80%乙醇為溶劑時(shí)總黃酮提取率最高，故微波輔助提取

10、以80%乙醇為溶劑，選取提取時(shí)間(A)、微波功率(B)、提取溫度()、液固比(D)為考察因素，以葛根總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用L9(34)表，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2L9(34)微波輔助提取法的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表2結(jié)果可知，各因素對提取效果的影響作用大小依次為A(提取時(shí)間)(提取溫度)B(微波功率)D(液固比)，其中提取時(shí)間對葛根總黃酮的提取效果影響最大，而液固比對提取無顯著影響。極差分析結(jié)果顯示，微波輔助提取法的優(yōu)化工藝為A3B23D3，即：提取時(shí)間60in，乙醇濃度80%，提取溫度80，液固比201，微波功率800。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.按因素組合A3B23D3平行提取3次進(jìn)展驗(yàn)證，提取率

11、分別為92.15%，90.26%，92.63%，RSD為1.37%，可見該工藝穩(wěn)定可行，葛根總黃酮的平均提取率為91.68%。3.3超聲波輔助提取法優(yōu)化工藝確實(shí)定采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取提取時(shí)間(A)、提取溫度(B)、超聲波功率()為考察因素，以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用L9(33)表。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3L9(33)超聲波輔助提取法的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果由正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，各因素對提取效果的影響作用大小依次為A(提取時(shí)間)B(提取溫度)(超聲波功率)，其中提取時(shí)間對葛根總黃酮的提取效果影響最大，而超聲波功率對提取無顯著影響。極差分析結(jié)果顯示，超聲波輔助提取葛根總黃酮的優(yōu)化工藝為：A3B32，即：

12、提取時(shí)間60in，乙醇濃度80%，提取溫度80，液固比201，超聲波功率50%。按因素組合A3B32平行提取3次進(jìn)展驗(yàn)證，提取率分別為88.12%，87.56%，87.95%，RSD為0.33%，可見該工藝穩(wěn)定可行，葛根總黃酮的平均提取率為87.88%。3.4總黃酮純度的比擬三種優(yōu)化工藝所得提取物萃取前后的HPL色譜圖見圖2，提取物總黃酮純度見表4。a對照品b水浴回流提取物(萃取前)微波提取物(萃取前)d超聲波提取物(萃取前)e水浴回流提取物(萃取后)f微波提取物(萃取后)g超聲波提取物(萃取后)圖2HPL圖表43種優(yōu)化工藝所得提取物的總黃酮純度%方法萃取前純度萃取后純度產(chǎn)率水浴回流提取50.

13、5287.7932.36微波輔助提取49.8287.5656.74超聲波輔助提取42.8686.5244.32比擬圖2中b、d可知，3種提取方法中，水浴回流提取法所得提取物的雜質(zhì)相對較少，微波提取物雜質(zhì)相對較多。比擬圖2中e、f、g可知，各提取物經(jīng)正丁醇萃取后，所含雜質(zhì)明顯減少，且根本一樣。因此，雖然微波提取物雜質(zhì)較水浴多，但是經(jīng)正丁醇萃取后，微波提取物的雜質(zhì)明顯減少，與萃取后的水浴提取物雜質(zhì)根本一樣，所以采用微波輔助提取葛根總黃酮不會影響后續(xù)別離工作。由表4可以看出，萃取前，水浴回流提取物純度較高，萃取后的各提取物純度相近，差異不大，與HPL色譜圖顯示的結(jié)果一致。各產(chǎn)品產(chǎn)率以微波提取物最高，

14、超聲波提取物次之，水浴回流提取物最低，所以綜合考慮產(chǎn)品純度及產(chǎn)率，以微波輔助提取法最優(yōu)。3.5葛根總黃酮3種提取方法的比擬3種提取方法在優(yōu)化工藝條件下的平均提取率見表5。表53種提取方法優(yōu)化工藝條件下提取率的比擬在葛根總黃酮的提取中，水浴回流提取法以加20倍乙醇，80下提取120in的工藝效果為佳，平均提取率85.35%，而微波輔助提取法和超聲波輔助提取法那么以加20倍乙醇，80下提取60in的工藝效果為佳，經(jīng)優(yōu)化工藝驗(yàn)證其平均提取率分別為91.68%，87.88%。顯然，這兩種提取方法優(yōu)于水浴回流提取法，不僅提取率相對較高，還大大縮短了提取時(shí)間?？梢姡诔Ｒ?guī)提取過程中，施加微波輻射和超聲場均

15、能有效加速總黃酮的溶出。微波輔助提取法與超聲波輔助提取法的提取時(shí)間一樣，提取率相近，但從環(huán)境保護(hù)來說，微波輔助提取法優(yōu)于超聲波輔助提取法，因?yàn)槌暡ㄝo助提取過程中會產(chǎn)生噪音，污染環(huán)境，不合適大批量消費(fèi)。比擬3種方法優(yōu)化工藝下所得提取物萃取前后的HPL色譜圖、總黃酮純度及產(chǎn)率可知，雖然水浴回流提取物雜質(zhì)相對較少，但是經(jīng)過正丁醇萃取后，各提取物所含雜質(zhì)及總黃酮純度均相近，產(chǎn)率以微波提取物最高，所以微波法優(yōu)于其他兩種方法。比擬上述3種提取方法，從消費(fèi)本錢和環(huán)境保護(hù)出發(fā)，微波輔助提取法優(yōu)于其他兩種方法;從產(chǎn)品純度來看，微波提取物的總黃酮純度較高，與水浴回流提取物的總黃酮純度相近，差異可忽略不計(jì)。綜合考

16、慮消費(fèi)本錢、環(huán)境因素及產(chǎn)品純度和產(chǎn)率，微波輔助提取法具有高效性、污染孝節(jié)能、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，更合適用于葛根總黃酮的提齲4結(jié)論本實(shí)驗(yàn)比擬了葛根總黃酮的水浴回流提娶微波輔助提取和超聲波輔助提取3種方法，結(jié)果說明，微波輔助法優(yōu)于其他兩種方法，其優(yōu)化工藝為：提取時(shí)間60in，乙醇濃度80%，提取溫度80，液固比201，微波功率800，提取率為91.68%。提取物經(jīng)正丁醇萃取后，所得產(chǎn)品的總黃酮純度為87.56%。將微波輔助提取法與水浴回流提取法、超聲波輔助提取法作了比擬。相比水浴回流法，微波輔助法有提取速度快，提取率高的優(yōu)點(diǎn);相對于超聲波輔助法來說，微波輔助法有節(jié)能、環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)。說明微波輔助提取法在保證相對較高提取率的同時(shí)還有節(jié)能、環(huán)保的優(yōu)勢，對于葛根總黃酮提取的工業(yè)消費(fèi)有更高應(yīng)用價(jià)值，在天然產(chǎn)物有效成分的提取方面有更廣闊的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1竇德明,代緯正,陳振峰，等.秦嶺不同產(chǎn)地葛根中葛根異總黃酮含量的研究J.中草藥,2002,33(7):663.2黃琨,黃少偉,池汝安.微波輔助提取葛根多糖工藝研究J.中國民族民間醫(yī)藥,2022,2(17):1.3安偉建,夏光成.不同產(chǎn)地葛根總黃酮含量的比擬J.中國中藥雜志,1999,24(6):338.4YngPilHang,hulYunghP,Yunghulhungetal.PrtetiveEffetsfPuerarinnarbn