醫(yī)藥專業(yè) 白術(shù)中藥藥性分析研究

1、摘 要目的：通過比較不同斷面顏色白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯的含量，從而確定不同顏色的白術(shù)的質(zhì)量，建立白術(shù)的質(zhì)量標準。方法：采用外標法，HPLC法測量其中一個含量。Dikma Kromasil C。(250 mm46 miD，5 pro)色譜柱，以乙腈(A)一水(B)為流動相梯度洗脫；體積流量為10 mLmin，柱溫為35，檢測波長為220 nm(白術(shù)內(nèi)酯I、III)、276 nm(白術(shù)內(nèi)酯I)，進樣量10uL。結(jié)果：白術(shù)內(nèi)酯I.II.III分別在114114、0776-776、321321 ugmL與峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)論：白術(shù)顏色白者與顏色棕者，其中白術(shù)內(nèi)酯I.II.III含量差異較大，尤其白術(shù)內(nèi)

2、酯I.III含量白者多于棕者，故而白術(shù)白者質(zhì)量優(yōu)于棕者。關(guān)鍵詞：白術(shù)，I白術(shù)內(nèi)酯I，斷面顏色，白術(shù)內(nèi)酯II，白術(shù)內(nèi)酯III，高效液相色譜，含量測定目錄 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc482372345 摘 要 PAGEREF _Toc482372345 h I HYPERLINK l _Toc482372346 1 引言 PAGEREF _Toc482372346 h 1 HYPERLINK l _Toc482372347 1.1白術(shù)簡介 PAGEREF _Toc482372347 h 1 HYPERLINK l _Toc482372348 1.2化學研究 P

3、AGEREF _Toc482372348 h 1 HYPERLINK l _Toc482372349 1.3.1、利尿作用 PAGEREF _Toc482372349 h 1 HYPERLINK l _Toc482372350 1.3.2調(diào)節(jié)免疫 PAGEREF _Toc482372350 h 1 HYPERLINK l _Toc482372351 1.3.3抗凝血作用 PAGEREF _Toc482372351 h 2 HYPERLINK l _Toc482372352 1.3.4抗腫瘤作用 PAGEREF _Toc482372352 h 2 HYPERLINK l _Toc48237235

4、3 1.3.5對胃腸運動的影響 PAGEREF _Toc482372353 h 2 HYPERLINK l _Toc482372354 1.3.6抗菌作用 PAGEREF _Toc482372354 h 2 HYPERLINK l _Toc482372355 1.4總結(jié) PAGEREF _Toc482372355 h 2 HYPERLINK l _Toc482372356 2實驗部分 PAGEREF _Toc482372356 h 3 HYPERLINK l _Toc482372357 2.1儀器與藥品 PAGEREF _Toc482372357 h 3 HYPERLINK l _Toc482

5、372358 2.2方法與結(jié)果 PAGEREF _Toc482372358 h 3 HYPERLINK l _Toc482372359 2.2.1色譜條件 PAGEREF _Toc482372359 h 3 HYPERLINK l _Toc482372360 2.2.2對照品溶液的制備 PAGEREF _Toc482372360 h 3 HYPERLINK l _Toc482372361 2.2.7穩(wěn)定性試驗 PAGEREF _Toc482372361 h 4 HYPERLINK l _Toc482372362 2.2.8加樣回收率試驗 PAGEREF _Toc482372362 h 4 HY

6、PERLINK l _Toc482372363 3分析與討論 PAGEREF _Toc482372363 h 5 HYPERLINK l _Toc482372364 3.1檢測器的選擇 PAGEREF _Toc482372364 h 5 HYPERLINK l _Toc482372365 3.2吸收波長的確定 PAGEREF _Toc482372365 h 5 HYPERLINK l _Toc482372366 3.3流動相的選擇 PAGEREF _Toc482372366 h 5 HYPERLINK l _Toc482372367 3.4提取方式的選擇 PAGEREF _Toc4823723

7、67 h 5 HYPERLINK l _Toc482372368 3.5 白術(shù)藥材的來源與選取 PAGEREF _Toc482372368 h 5 HYPERLINK l _Toc482372369 3.6 測量指標的選擇 PAGEREF _Toc482372369 h 5 HYPERLINK l _Toc482372370 4結(jié)論 PAGEREF _Toc482372370 h 7 HYPERLINK l _Toc482372371 參考文獻： PAGEREF _Toc482372371 h 81 引言1.1白術(shù)簡介白術(shù)為菊科植物白術(shù)Atractylodes macrocephalaKoid

8、z的干燥根，主產(chǎn)地為浙江，安徽、此外河北，湖北、湖南及西南地區(qū)等省。味甘，性溫，入脾胃經(jīng)。具有補氣健脾，燥濕利水，止汗的作用1。其主要活性物質(zhì)為揮發(fā)油個類酯類成分。其中的內(nèi)酯類成分具有抗炎、抗腫瘤的作用，還具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收的作用，尤其以白術(shù)內(nèi)酯I的作用明顯。白術(shù)有多種炮制品，有白術(shù)、清炒白術(shù)、麩炒白術(shù)、土炒白術(shù)。生白術(shù)臨床常被用以健脾祛濕、利水消腫，炒制可以制其燥性、增強其焦香之氣，增強健脾益氣之功能，麩炒可以增強其健脾消食的作用，土炒白術(shù)則多用于補脾陽，止瀉。為有效控制白術(shù)質(zhì)量，本實驗采用HPLC法測定了白術(shù)不同斷面顏色白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯I、II.II的含量I,建立白術(shù)外觀

9、與內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)系，使白術(shù)的內(nèi)在質(zhì)量更直觀，從而更好地指導用藥者的用藥，保證臨床用藥的效果。1.2化學研究白術(shù)主要含揮發(fā)油、內(nèi)酯類化合物和多糖類成分。其中揮發(fā)油在白術(shù)飲片中占比大約為1.4%,其主要成分有蒼術(shù)酮、蒼術(shù)醇等,其中蒼術(shù)酮在揮發(fā)油中含量占比為 31%-61%,揮發(fā)油中相對含量較高的還有 2-(2-乙氧基-3,4-二甲基-2-環(huán)己烯)-1-甲基-呋喃，其占揮發(fā)油的17%左右,-3,4-二甲基-苯丁酸異丙酯約占 16.46%左右。利用氣象色譜法提取白術(shù)的揮發(fā)油，其中相對含量最高的是蓬莪術(shù)烯(48%左右),其次含量較高的有吉馬烯(6.6%左右),1-亞甲基-4-甲基-7-1-甲基乙烯基-十氫

10、萘(6%左右),鄰苯二甲酸二丁酯(11%左右)等。對產(chǎn)于浙江的白術(shù),以水蒸氣蒸餾和超臨界萃取法提取其中的揮發(fā)油,含量最高者都是蒼術(shù)酮。 此外，從白術(shù)中還含有多種內(nèi)酯類成分。其中有白術(shù)內(nèi)酯I(atrcatylenolide )、白術(shù)內(nèi)酯(atractylcnolide)、白術(shù)內(nèi)酯(atractylcnolide )的含量較高，此外還含有白術(shù)內(nèi)酯(atractylenolide )、雙白術(shù)內(nèi)酯、8,9-環(huán)氧白術(shù)內(nèi)酯、4,15-環(huán)氧羥基白術(shù)內(nèi)酯等微量內(nèi)酯類成分。其中白術(shù)內(nèi)酯 I 的含量在 0.1%左右，白術(shù)內(nèi)酯的含量在 0.0150%0.2230%之間。除此以外,多糖類成分3如白術(shù)三醇及維生素 A

11、等也是白術(shù)中含有的活性物質(zhì)。 1.3藥理研究 1.3.1、利尿作用給予正常大鼠口服白術(shù)水煎液，可以使尿中電解質(zhì)排除量增加，從而增加了尿液的排泄量。其原理可能為其中桉葉醇抑制了鈉鉀ATP酶，從而增加了體內(nèi)電解質(zhì)，尤其是鈉的排除，繼而增加排尿。1.3.2調(diào)節(jié)免疫白術(shù)水提液中的成分對機體免疫功能有促進作用。白術(shù)能提高巨噬細胞活性，活化中性粒細胞，提高外周血液中白細胞的數(shù)量，增強小鼠NK細胞的細胞毒活性。促進T淋巴細胞的增殖和轉(zhuǎn)化，提高T細胞總數(shù)和輔助性T細胞的數(shù)量。增強B淋巴細胞免疫功能，促進抗體生成，提高受環(huán)磷酰桉抑制小鼠的血清凝結(jié)素，溶血素抗體的水平。從而具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強機體對抗能

12、力。1.3.3抗凝血作用白術(shù)對血小板聚集有明顯的抑制作用，白術(shù)煎劑0.5g/kg灌胃14周，能顯著延長大鼠凝血酶元的時間。其作用較雙香豆素弱，但較Butadio下降，34小時內(nèi)未見恢復。1.3.4抗腫瘤作用白術(shù)揮發(fā)油和內(nèi)酯成分不僅在體外對腫瘤細胞有抑制作用，可以抑制腫瘤細胞的增殖，還能提高機體對抗腫瘤細胞的能力，增強機體對腫瘤細胞的毒作用。所以有一定程度的抗腫瘤作用。1.3.5對胃腸運動的影響白術(shù)對回腸個小腸的運動具有雙向的特點。在小劑量下，白術(shù)水提液能抑制回腸平滑肌的收縮，而給予實驗動物濃度較高，劑量較大的白術(shù)量時，發(fā)現(xiàn)可以增強回腸平滑肌的收縮。白術(shù)對于小腸運動的影響與實驗動物的狀態(tài)有關(guān)，實

13、驗動物小腸運動低下時，其可以增強收縮，實驗動物亢奮時，其可以抑制收縮。此作用的機制較為復雜，可能與白術(shù)中成分對平滑肌乙酰膽堿受體的作用有關(guān)。1.3.6抗菌作用研究發(fā)現(xiàn)，白術(shù)水提液能在體外多種細菌生長，而不能殺死細菌。1.4總結(jié)白術(shù)為我國常用中藥材，為名副其實的大宗藥材。其最常被用于各類消化系統(tǒng)疾病。正因為其用量大，所以不僅要從內(nèi)在制定其質(zhì)量標準，也須建立其外觀與內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)系，以指導患者用藥。然而平常市面白術(shù)質(zhì)量參差不齊，顏色也不相同。藥典中記白術(shù)為黃白至淡棕色，此兩種顏色相差懸殊，以往古籍中也有記載越白越好10。因為白術(shù)最常被用于消化系統(tǒng)疾病，而其中內(nèi)酯類成分為作用基礎(chǔ)，也因為其內(nèi)酯類成分為

14、其獨有的，與蒼術(shù)相區(qū)別的物質(zhì)，故而本實驗選取其中白術(shù)內(nèi)酯I,II,III為指標，探討其不同顏色的質(zhì)量的優(yōu)劣，也也驗證古籍所載正確與否。2實驗部分2.1儀器與藥品美國Agillent 1100高效液相色譜儀，二級陣列檢測器，1100色譜工作站。白術(shù)內(nèi)酯I、II、III對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為1396060123、1397060123、1398060123；乙腈和甲醇皆為色譜純，水為純化水。白術(shù)藥材購于西安雨潤中藥材專業(yè)市場，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學鑒定教研室鑒定為菊科植物白術(shù)Amacrocephala Koidz的干燥根。2.2方法與結(jié)果2.2.1色譜條件色譜柱為C18(250 mm

15、46 mm，5 tim)；流動相為乙腈(A)一水(B)，梯度洗脫：016 min，6076A，1618min76100A；1830 min，100A；流動相的體積流量為1.0 mLmin；柱溫為35；檢測波長為220nm(白術(shù)內(nèi)酯I、III)、276 nm(白術(shù)內(nèi)酯II)；進樣量為10 uL。理論塔板數(shù)以白術(shù)內(nèi)酯I計算應(yīng)該高于3 000。色譜圖見圖l2.2.2對照品溶液的制備稱取白術(shù)內(nèi)酯I、II.III對照品1.44mg.0.78mg.3.21mg精密稱定，置于10 mL的容量瓶中，以甲醇溶解并添加至刻度，搖勻。2.2.3供試品溶液的制備：稱取兩種白術(shù)飲片約1 g，置于50 mL規(guī)格的錐形瓶中

16、，加入甲醇50 mL，超聲提取30 min，過濾，濃縮，轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶，再加入甲醇定容至100 mL，搖勻，即得。規(guī)定以顏色白者制得的供試品為供試品1，以顏色淡棕色者制得的為供試品2。2.2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取白術(shù)內(nèi)酯I、II.III混合對照品儲備液01、03、05、10、20、50.70.9 ，1.0.1.25ml置于10ml的容量瓶中，加入甲醇定容，搖勻。在以上色譜條件下進行分析，分別以峰面積(y)為縱坐標，以質(zhì)量濃度(x)為橫坐標，進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程如下:白術(shù)內(nèi)酯I、II、III分別在115115、0775775、320320ugmL與峰面積呈良好的

17、線性關(guān)系，回歸方程分別為Y=4 350X+7715、Y=2 878X+5228、y=8 038X+1494，r分別為0999 9.0.9998.0.9999。2.2.5精密度試驗精密吸取兩種白術(shù)供試品溶液，在以上色譜條件下連續(xù)進樣6次，分別測定白術(shù)內(nèi)酯I、II、III的峰面積，結(jié)果如下：相對標準偏差分別為0.46、037、052。2.2.6重現(xiàn)性試驗取生白術(shù)飲片6份各約2.0 g，精密稱定，以甲醇聲提取，制備供試品溶液，在以上色譜條件下測定其峰面積，計算其中白術(shù)內(nèi)酯I、II、III的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果如下：其相對標準偏差分別為I.23、255、225。2.2.7穩(wěn)定性試驗取白術(shù)供試品溶液，分別于0

18、、l、3、5、10、15、24、32、48 h在上述色譜條件下進樣分析，分別計算白術(shù)內(nèi)酯I、II、III的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果如下:其相對標準偏差分別為163、099、058，結(jié)果表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。圖I 白術(shù)內(nèi)酯I.III(A.220nm)和白術(shù)內(nèi)酯II(B.276nm)和樣品(C.D)HPLC圖譜2.2.8加樣回收率試驗精密稱取白術(shù)供試品粉末約1.0g，安供試品制備方法提取，分別精密加入1.0，2.0，3.0混合對照品溶液，制備供試品溶液，在各水平下平行操作3份，在供試品高效液相色譜條件下進樣分析，計算回收率。結(jié)果如下：白術(shù)內(nèi)酯I、II、III的平均回收率分別為96.33、101.5

19、9、99.78，相對標準偏差分別為1.56、1.39、2.06。2.2.9樣品測定取各兩種白術(shù)制備供試品溶液，進行測定，進樣10UL，計算白術(shù)內(nèi)酯I、II、III的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見表1。 表1不同斷面顏色白術(shù)中自術(shù)內(nèi)酯I、I、的測定結(jié)果供試品白術(shù)內(nèi)酯I(mg/g)白術(shù)內(nèi)酯II(mg/g)白術(shù)內(nèi)酯III(mg/g)內(nèi)酯總量(mg/g)10.60980.31900.79611.724920.47530.26900.45211.19643分析與討論3.1檢測器的選擇光電二極管陣列檢測器可同時檢測190-800nm全部紫外光和可見波長范圍內(nèi)的信號，進行一次檢測，可以同時獲得多個吸收。由于本實驗需要檢測

20、白術(shù)內(nèi)酯I.II.III三個成分，故而選擇PDAD檢測器可以方便地采集到每個成分的吸收數(shù)據(jù)，可以得到每一個峰的在線紫外吸收圖，所以選擇。方法學的考察所用樣品測定提取方法的方法學考察均符合要求，簡化了白術(shù)測定的繁瑣步驟，為探索制訂完善的白術(shù)原藥材的質(zhì)量標準提供了依據(jù)。3.2吸收波長的確定利用二極管陣列裝置同時獲得樣品的色譜圖及每個色譜組分的光譜圖，即三維時間色譜光譜圖，在通過計算不同波長的相對吸收對比，對每個色譜峰的指定位置實時記錄吸收光譜圖，并計算最大吸收波長。最后確定白術(shù)內(nèi)酯I.III在220nm處有最大吸收，白術(shù)內(nèi)酯II在276nm處有最大吸收。 3.3流動相的選擇本實驗曾嘗試以乙腈一水、

21、甲醇一水等不同的流動相梯度洗脫供試品，發(fā)現(xiàn)以甲醇一水為流動相獲得的峰形最為合適；由于本實驗須同時測定3個內(nèi)酯成分，所以本實驗嘗試了不同的流動相比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇水為流動相梯度洗脫，三種成分的分離較好，3個成分的分離度皆大于15，拖尾因子也在095105之間。3.4提取方式的選擇分別考察了用不同溶劑，以水煎法，超聲法、回流法等不同方式提取，并且在不同的提取時間下，提取不同的次數(shù)的考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以甲醇為容劑，采用超聲提取法，提取30 min，提取一次，為完全提取白術(shù)的最適合的提取條件。3.5 白術(shù)藥材的來源與選取本實驗?zāi)康脑谟谘芯坎煌瑪嗝骖伾陌仔g(shù)，其內(nèi)在質(zhì)量的差異，所以須確保其他條件的一致。所以在購買原料的時候，特地保證了兩種白術(shù)的產(chǎn)地.質(zhì)地.大小等條件的一致性，從而讓白術(shù)斷面的顏色成為本實驗的唯一影響白術(shù)內(nèi)酯類成分含量的因素。3.6 測量指標的選擇白術(shù)藥材中含有多揮發(fā)油，內(nèi)酯類，多糖類等多種成分。其中揮發(fā)油類以蒼術(shù)酮的含量最高，而蒼術(shù)酮為白術(shù)與蒼術(shù)的共有成分，而且蒼術(shù)中的含量遠高于在白術(shù)中的含量，故而未選擇蒼術(shù)酮為本實驗的測量指標。類酯類成分中以白術(shù)內(nèi)酯I,II ,III的含量最高，并且此三種成分具有很高的生理活性，對消化系統(tǒng)疾病有顯著的作用，而且現(xiàn)實中白術(shù)也常被用于消化系統(tǒng)疾病11，故而本實驗選取白術(shù)內(nèi)酯I.II.III為指標，判斷白術(shù)的質(zhì)量。4結(jié)論