《液態(tài)活檢技術及其臨床應用》課件

1、【Applicable to lecture training work report】液態(tài)活檢技術及其臨床應用液態(tài)活檢技術及其臨床應用液態(tài)活檢技術及其臨床應用液態(tài)活檢技術及其臨床應用傳統(tǒng)的腫瘤診斷技術傳統(tǒng)腫瘤診斷技術 病理檢驗診斷影像學檢測病理組織檢查 （HE，IHC）血清標志物檢測 （CEA,PSA)核磁共振成像（MRI）正電子成像術（PET-CT）X射線斷層掃描術（XRAY,CT）超聲波檢測（B超）內窺鏡（Endoscope）分子病理檢測 （FISH, RT-PCR, NGS）傳統(tǒng)的腫瘤診斷技術傳統(tǒng)腫瘤病理檢驗診斷影像學檢測病理組織檢查傳統(tǒng)的腫瘤診斷存在的問題早期篩查：標記物不統(tǒng)一, 方

2、法不夠靈敏或是特異性不足。臨床診斷: 影像學：較靈敏，特異性不足，對病灶大小有要求。病理學：金標準，但是需要組織樣本，取樣會帶來創(chuàng)傷和擴散風險，很多晚期患者無法取樣或取樣不足。治療/復發(fā)轉移監(jiān)測：影像學：結果普遍存在滯后性。血清標志物：較靈敏，但是特異性不足；有些類型癌癥沒有合適的血清標志物。傳統(tǒng)的腫瘤診斷存在的問題早期篩查：2015年十大突破技術-液態(tài)活檢技術MIT Technology Review雜志發(fā)布了2015年度十大突破技術(10 Breakthrough Technologies 2015)的榜單。液態(tài)活檢技術光榮上榜。液態(tài)活檢：快速、簡便、無痛苦、無創(chuàng)傷的癌癥血液檢測方法201

3、5年十大突破技術-液態(tài)活檢技術MIT Technol傳統(tǒng)而又嶄新的檢測技術-“液態(tài)活檢”“液態(tài)活檢”的定義： A liquid biopsy is a liquid biomarker that can be easily isolated from many body fluids blood, saliva, urine, ascites, pleural effusion, etc.) and, as well as a tissue biopsy, a representative of the tissue from which it is spread.液體活檢是一種液體生物標志物

4、，可以容易地從許多體液中分離血液，唾液，尿液，腹水，胸腔積液等），以及組織活組織檢查法，其是從其傳播的組織的代表。 - Christian Rolfo, Biochimica et Biophysica Acta, 2013.傳統(tǒng)而又嶄新的檢測技術-“液態(tài)活檢”“液態(tài)活檢”的定義：“液態(tài)活檢”的標記物CTCsctDNA(cfDNA)主要指來自于抗凝的外周血全血，完整的腫瘤細胞主要指來自于抗凝血外周血的血漿，片段化的DNA片段一般認為來源于腫瘤原發(fā)灶/轉移灶腫瘤瘤細胞凋亡/壞死釋放的DNA片段活細胞，一般不宜長期保存提取純化后的核酸，可以保存可以用于細胞學形態(tài)、結構分析；也可以分析細胞DNA、R

5、NA、蛋白質等各類標志物一般用于DNA突變監(jiān)測、甲基化等DNA修飾相關分析用于病情評價、預后判斷，腫瘤早期診斷潛力不明確用于個體化治療，腫瘤早期診斷潛力相對明確還有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌體），Secretomes（分泌物質組）等。“液態(tài)活檢”的標記物CTCsctDNA(cfDNA)主要指來 ctDNA（circulating tumor DNA），即循環(huán)腫瘤DNA，從字面意思來講，指的是由腫瘤細胞釋放到血液循環(huán)系統(tǒng)中的DNA。但是在了解ctDNA之前，我們要知道另一個與之相關的概念cfDNA。 cfDNA（cell-free DNA），或者叫血漿游離DNA，是

6、血漿中游離存在的DNA，它們有的來自于正常細胞，有的來自于異常細胞（如腫瘤細胞），還有部分來自于我們外部（如病毒DNA）。 來源：1、來自于壞死的腫瘤細胞2、來自于凋亡的腫瘤細胞3、來自于腫瘤細胞分泌的外排物什么是ctDNA ? ctDNA（circulating tumo人們逐漸明白，cfDNA中 攜帶腫瘤特有突變的那一小部分DNA，確確實實是由腫瘤細胞釋放出來的，ctDNA的研究終于與腫瘤關聯起來。ctDNA的發(fā)現人們逐漸明白，cfDNA中 攜帶腫瘤特有突變的那一小部分DN在幾乎所有種類的癌癥中，都檢測到了ctDNA所帶有的標志性突變，并且腫瘤越晚期，病情越嚴重，腫瘤的惡性程度越高， ct

7、DNA特有突變的頻率就越高。一項針對15種癌癥進行的ctDNA測序研究顯示，分別有47%，55%，69%，82%的I-IV期癌癥病人中能檢測到高于一定頻率的ctDNA突變；而另一項使用更高靈敏度測序技術的研究則表示，對于II期以上的病人，均能100%檢測到突變。不同分期癌癥的ctDNA檢出情況不同癌癥種類的ctDNA檢出情況在幾乎所有種類的癌癥中，都檢測到了ctDNA所帶有的標志性突CtDNA臨床應用領域 CtDNA作為一種新的腫瘤標志物，將在腫瘤的診斷、治療及預后檢測等方面發(fā)揮重要的作用，尤其是對于一些不具有典型臨床癥狀、檢查無特異性和診斷困難的腫瘤可避免復雜的、具有創(chuàng)傷性的活檢。ctDNA

8、來自腫瘤細胞的體細胞突變，不同于遺傳突變的是，遺傳突變存在于體內每個細胞。因此，ctDNA是一種特征性的腫瘤生物標記物，并且還可以被定性、定量和追蹤。CtDNA臨床應用領域 CtDNA作為一種新的腫檢測9名接受特羅凱一線治療的NSCLC患者血漿中ctDNA的EGFR突變情況，一直到患者進展至PD。在接受治療后，所有患者血漿中的含有EGFR突變的ctDNA濃度出現下降，其中8人的EGFR突變完全消失。有6名患者的血漿中重新檢測到EGFR突變的時間要比進展至PD的時間早4個月以上！隨著治療，所有9名患者的血漿中均檢出一定量T790M突變。血漿中沒有檢測到EGFR的3名患者，進展至PD期時，其腫瘤僅

9、在胸腔內有緩慢進展。利用NSCLC癌患者血漿中的ctDNA檢測EGFR突變現有技術用石蠟組織切片樣本只能檢測60copies以上的突變含量，但是用液態(tài)活檢通過數字PCR平臺卻可以檢測0-60copies之間的突變含量，更早的發(fā)現病情及耐藥性，對于癌癥患者如果能提前4個月發(fā)現病情的變化，生存率會大大提高。- Clin Cancer Res, 2014, march檢測9名接受特羅凱一線治療的NSCLC患者血漿中ctDNA的著名的JohnsHopkins大學最近的一項研究揭示了ctDNA的真面目，它其實是一種具備廣泛應用前景、高敏感性、高特異性的腫瘤標志物，- Nature Medicine, 2

10、014, May著名的JohnsHopkins大學最近的一項研究揭示了ctD研究者還在不同級別的肺癌患者中對CAPP-Seq進行了驗證，發(fā)現II-IV期的NSCLC中檢測敏感性100%，I期的NSCLC中敏感性為50%，而且在各期的肺癌中的特異性均在96%。在II-IV期和所有分期的肺癌中，根據ROC曲線計算出的AUC分別為0.99和0.95，所以CAPP-Seq具有強大的檢測能力。臨床資料表明，ctDNA比例低至0.019%的時候也還能夠被CAPP-Seq檢測到。研究者還在不同級別的肺癌患者中對CAPP-Seq進行了驗證，研究者用CAPP-Seq測定的ctDNA的水平和腫瘤體積（腫瘤體積用C

11、T和PET評估測定）之間存在顯著相關性（p=0.0002，R2=0.89），除了幾例I期肺癌患者的腫瘤體積明顯高于其ctDNA相對應的大小。隨訪研究發(fā)現ctDNA水平隨著疾病進展和相應的治療，也在不斷變化。對10例樣本（7例陽性和3例陰性）進行了腫瘤標本（侵入性的活檢）和血液標本（非侵入性的CAPP-Seq檢測）在篩查和基因型（EGFR和KRAS）檢測中的對比，結果發(fā)現CAPP-Seq并不比金標準腫瘤活檢的檢測效能差，能夠準確測定肺癌的基因型。研究者用CAPP-Seq測定的ctDNA的水平和腫瘤體積（腫ctDNA中PI3KCA的檢測可用于預測原發(fā)性乳腺癌患者的預后1. ctDNA有PI3KCA

12、檢出的乳腺癌患者，其預后要比沒有檢出的患者差。- Breast Cancer Res Treat， 2015， March2. ctDNA中PI3KCA拷貝數高的乳腺癌患者，其預后要比拷貝數低的患者差。ctDNA中PI3KCA的檢測可用于預測1. ctDNA有 循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。CTC形成、播散及轉移的模式圖原發(fā)腫瘤血管生成侵潤侵入血管內侵入血管外(CTC)血管內增殖(CTM)轉移轉移播散腫瘤細胞（DTC）微轉移休眠灶循環(huán)腫瘤細胞（CTC）循環(huán)腫瘤微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細胞擴增血管生成上皮間質轉化（EMT）間質上皮轉化（MET）轉移到骨髓

13、和其他器官 循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤 CTC的稀有性和異質性Cancers, 2013；Nature Review of Clinical Oncology, 2010 CTC的稀有性和異質性Cancers, 2013；NatCTC的臨床應用方向CTC檢測6、指導用藥3、術后監(jiān)控1、預后評估2、療效監(jiān)測5、早期篩查4、輔助診斷CTC的臨床應用方向CTC檢測6、指導3、術后1、預后2、療用兩種不同的方法檢測CTC以評估非小細胞肺癌患者的預后1. ISET法檢出率為 104/210(50%)，CellSearch法檢出率為82/210(39%)，兩種方法檢出CTC的

14、患者的DFS均明顯劣于無CTC檢出的患者。2. ISET法檢出 23/210（11%）的患者外周血中含有間質化的CTC細胞，這種細胞通常意味著更強的侵襲性。ISET法和CellSearch法可以作為CTC檢測的互補的方法，兩種方法單獨或者聯合使用都可以用于檢測CTC，以評估肺癌手術的預后。 - Int. J. Cancer，2011，Vol129用兩種不同的方法檢測CTC以評估非小細胞肺癌患者的預后1.放療前，65%患者檢出CTC， 平均檢出率9.1CTCs/ml ，明顯高于放療后的CTC平均數（0.6個）。有1名在放療后CTC明顯未降低的患者，出現遠端轉移。- Cancer J， 2015，

15、 121(1)通過檢測非小細胞肺癌患者的外周血中循環(huán)腫瘤細胞評價放療療效放療前，65%患者檢出CTC， 平均檢出率9.1CTCs/mCTC可作為慢性阻塞性肺炎（COPD）患者肺癌早期診斷的新的標志物Hofman P.， PLoS One， 2014， Vol9（10）分類COPD患者吸煙者健康人檢測結果CTC+CTC-CTC-CTC-人數51634235當時是否檢測出癌癥NoNoNoNo5年內檢測出癌癥Yes (5/5)NoNoNoCTC可作為慢性阻塞性肺炎（COPD）患者肺癌早期診斷的新CTC v.s. ctDNA互相排斥還是互為補充？1.可能來源于非腫瘤組織，特異性低；2. 血漿中含量較豐

16、富，檢測方法簡便；3. 來自多個細胞的更全面的遺傳信息，但一般來自于凋亡的腫瘤細胞；4. ctDNA用于實時監(jiān)測乳腺癌等疾病的進展和療效時，靈敏度更高； 5. 因為不含特異性突變，ctDNA不適用于某些癌癥的檢測，比如腎癌。V.S.1. 細胞形態(tài)結合分子標記，特異性高；2. 血液中數量稀少，檢測難度大；3. 只能代表腫瘤細胞的部分亞群，但是是最有侵襲性的一部分細胞；4. 反向選擇的CTCs檢測適用于大多數癌癥種類，但有些癌癥檢出率太低。5. 完整的有活性的腫瘤細胞個體，能檢測對藥物的反應；可以提供新的腫瘤治療靶點，可以幫助理解腫瘤轉移的機制。CTCsCtDNACTCs與ctDNA檢測的有機結合

17、才是未來的方向！CTC v.s. ctDNA互相排斥還是互為補充？1.可ctDNA及CTC檢測與NSCLC的靶向治療療效的相關性檢測EGFR突變時，ctDNA比CTCs更為靈敏，而且與原位腫瘤的一致性更高。- Clin Cancer Res ，2012，April2. CTC數量的減少更適宜用于作為快速評價療效反應的標記物。ctDNA及CTC檢測與NSCLC的靶向治療療效的相關性檢測文章主要通過數字PCR比較CtDNA、腫瘤標記物及循環(huán)腫瘤細胞三個方法的比較，其中CtDNA靈敏度為97%，循環(huán)腫瘤細胞87%，腫瘤標記物靈敏度為78%， 。- NEJM，2013，March文章主要通過數字PCR

18、比較CtDNA、腫瘤標記物及循環(huán)腫瘤細與腫瘤標志物檢測相比，CTC及ctDNA檢測更能反映病情的進展。 通過ctDNA及CTC檢測監(jiān)測轉移性乳腺癌病情進展某些病例里，ctDNA檢測與病情更一致；某些病例里，CTC檢測與病情進展更一致；與腫瘤標志物檢測相比，CTC及ctDNA檢測更能反映病情的進“液態(tài)活檢” 的檢測技術越來越豐富，“液態(tài)活檢”研究將會給臨床診斷帶來革命性的突破；“液態(tài)活檢”是現有病理檢測技術的必要和有效的補充；“液態(tài)活檢”的準確性有待更多的臨床數據進一步確認； 病理科室理應成為“液態(tài)活檢”的領軍科室。總結與展望“液態(tài)活檢” 的檢測技術越來越豐富，“液態(tài)活檢”研究將會給臨THANK

19、 YOU課程結束課程結束SWOT分析模板SWOT分析模板SWOT分析是市場營銷管理中經常使用的功能強大的分析工具，最早是由美國舊金山大學的管理學教授在80年代初提出來的：S代表strength(優(yōu)勢)，W代表weakness(弱勢)，O代表opportunity (機會)，T代表threat(威脅)。市場分析人員經常使用這一工具來掃描、分析整個行業(yè)和市場，獲取相關的市場資訊，為高層提供決策依據，其中，S、W是內部因素，O、T是外部因素。它在制定公司發(fā)展戰(zhàn)略和進行競爭對手分析中也經常被使用。 SWOT的分析技巧類似于波士頓咨詢（BCG）公司的增長/份額矩陣（The Growth/Share Ma

20、trix）， 什么是SWOT分析SWOT分析是市場營銷管理中經常使用的功能強大的分析工具，最內部環(huán)境優(yōu)勢Strengths劣勢Weakness機會Opportunities威脅ThreatsSWOT分析傳統(tǒng)矩陣示意圖外部環(huán)境內部環(huán)境優(yōu)勢劣勢機會威脅SWOT分析傳統(tǒng)矩陣示意圖外部環(huán)境SWOT行業(yè)分析適用范圍業(yè)務單元及產品線分析競爭對手分析SWOT企業(yè)自身SBU SWOT分析SWOTSWOT企業(yè)自身SBU SWOT分析主要競爭對手SBU SWOT分析企業(yè)的內外部環(huán)境與行業(yè)平均水平進行比較當選擇行業(yè)領域中只有少數競爭對手時，可以考慮做SWOT組圖進行比較SWOT行業(yè)分析適用范圍業(yè)務單元及產品線分析競

21、爭對手分析SWSWOT分析步驟分析環(huán)境因素構造SWOT矩陣制定行動計劃運用各種調查研究方法，分析出公司所處的各種環(huán)境因素，即外部環(huán)境因素和內部能力因素。 將調查得出的各種因素根據輕重緩急或影響程度等排序方式，構造SWOT矩陣。 在完成環(huán)境因素分析和SWOT矩陣的構造后，便可以制定出相應的行動計劃。 SWOT分析步驟分析環(huán)境因素構造SWOT矩陣制定行動計劃運用SW優(yōu)勢與劣勢分析（內部環(huán)境分析）提高公司盈利性產品線的寬度產品的質量產品價格產品的可靠性產品的適用性服務的及時性服務態(tài)度競爭優(yōu)勢可以指消費者眼中一個企業(yè)或它的產品有別于其競爭對手的任何優(yōu)越的東西。需要注意的是一定要從消費者的角度出發(fā)，尋找

22、與競爭者或行業(yè)平均水平比較，公司的產品與服務有什么優(yōu)勢/劣勢；而不是從公司的角度出發(fā)，衡量企業(yè)的競爭優(yōu)勢。SW優(yōu)勢與劣勢分析（內部環(huán)境分析）提高公司盈利性產品線的寬度通過一定努力，建立自身競爭優(yōu)勢引起競爭者注意，開始作出反應直接進攻企業(yè)優(yōu)勢所在，或采取更為有力的策略競爭優(yōu)勢受到削弱，尋找新的策略增強自身競爭優(yōu)勢根據SW分析，公司建立并維持自身的競爭優(yōu)勢企業(yè)在維持競爭優(yōu)勢過程中，必須深刻認識自身的資源和能力，采取適當的措施。因為一個企業(yè)一旦在某一方面具有了競爭優(yōu)勢，勢必會吸引到競爭對手的注意。而影響企業(yè)競爭優(yōu)勢的持續(xù)時間，主要的是三個關鍵因素：（1）建立這種優(yōu)勢要多長時間? （2）能夠獲得的優(yōu)勢

23、有多大？（3）競爭對手作出有力反應需要多長時間？如果企業(yè)分析清楚了這三個因素，就會明確自己在建立和維持競爭優(yōu)勢中的地位了。通過一定努力，建立自身競爭優(yōu)勢引起競爭者注意，開始作出反應直O(jiān)T機會與威脅分析（外部環(huán)境分析）環(huán)境發(fā)展趨勢分為兩大類：環(huán)境威脅環(huán)境機會環(huán)境威脅指的是環(huán)境中一種不利的發(fā)展趨勢所形成的挑戰(zhàn)，如果不采取果斷的戰(zhàn)略行為，這種不利趨勢將導致公司的競爭地位受到削弱。環(huán)境機會就是對公司行為富有吸引力的領域，在這一領域中，該公司將擁有競爭優(yōu)勢。OT機會與威脅分析（外部環(huán)境分析）環(huán)境發(fā)展趨勢分為兩大類：環(huán)OT機會與威脅分析方法一：PEST法PEST法政治法律:經濟社會文化技術壟斷法律環(huán)境保護

24、法稅法對外貿易規(guī)定勞動法政府穩(wěn)定性經濟周期GNP趨勢利率貨幣供給通貨膨脹失業(yè)率可支配收入能源供給成本人口統(tǒng)比收入分配社會穩(wěn)定生活方式的變化教育水平消費政府對研究的投入政府和行業(yè)對技術的重視新技術的發(fā)明和進展技術傳播的速度折舊和報廢速度OT機會與威脅分析方法一：PEST法PEST法政治法律:經OT機會與威脅分析方法一：波特五力模型競爭者供應商客戶替代者新進入者進入本行業(yè)有哪些壁壘？它們阻礙新進入者的作用有多大？本企業(yè)怎樣確定自己的地位（自己進入或者阻止對手進入）？購買者轉而購買替代品的轉移成本；公司可以采取什么措施來降低成本或增加附加值來降低消費者購買替代品的風險？供貨商的品牌或價格特色；供貨商的戰(zhàn)略中本企業(yè)的地位；供貨商之間的關系；從供貨商之間轉移的成本本企業(yè)的部