蟾酥對可移植性小鼠淋巴細胞白血病療效的研究

1、蟾酥對可移植性小鼠淋巴細胞白血病療效的研究朱大誠尹小明陳秀珍羅小泉【關鍵詞】蟾酥L615白血病模子保存時間細胞凋亡流式細胞術Keyrds:hansu；L615leukeiauld；Survivaltie；Apptsis；F以往的實行結果表白，蟾酥對淋巴細胞白血病E細胞具有較強的按捺作用，誘導E細胞調亡是其機制之一1。本研究舉行體內實行，使用蟾酥溶液作用于可移植性小鼠淋巴細胞白血病-L615白血病，不雅察其療效?，F報道如下。1質料和要領1.1藥品蟾酥購于山東臨沂愛康藥業(yè)，按文獻1配成濃度為10g/l的蟾酥溶液，濾過除菌，然后再配成0.05，0.1g/l和0.3g/l3種溶度備用。1.2細胞造就L

2、615白血病細胞株購于中國醫(yī)學科學院血液研究所天津。造就基為含體積分數10%的小牛血清杭州四序青的RPI-1640Gib公司產物，并參加雙抗青霉素100g/l和鏈霉素100g/l。在37，5%2，飽和濕度的造就箱ThernFra公司產物中造就，取對數生恒久細胞舉行造模。13模子的創(chuàng)立取對數生恒久L615白血病細胞L615細胞，離心1500r/in，8in，去上清液，用生理鹽水洗滌2次，調解細胞終濃度為1.4106/l。取615近交系小鼠購自中國醫(yī)學科學院血液學研究所16只，鼠齡810周，體重2427g，牝牡各半。無菌操縱，每只小鼠腹腔注射接種L615細胞7105個，造成L615白血病模子滿身白

3、血病2。小鼠在層流架內豢養(yǎng)，統統與鼠打仗的物品均按無菌要求處置懲罰。1.4分組及給藥要領將L615白血病模子小鼠隨機分為4組。每組牝牡各半，即L615模子組比擬組(模子組，每次給生理鹽水0.4l)；蟾酥組低劑量組，每次按0.6g/kg給藥，蟾酥組中劑量組，每次按1.8g/kg給藥，蟾酥組高劑量組，每次按5.4g/kg給藥。模子創(chuàng)立后，第2天開始按以上方案腹腔注射給藥，1次/d，一連10d。1.5不雅測指標體重變革；保存時間，用公式T-/100%盤算其生命延伸率T、別離為試驗組、比擬組均勻保存天數；外周血白細胞B計數及分類，血小板PLT計數；肝脾指數；肝、脾、骨髓涂片及骨髓白細胞分類。16流式細

4、胞術F闡發(fā)取瀕死期各組小鼠外周血，每個樣本0.5l入已加淋巴細胞分散液的試管內，離心1500r/in，20in，然后警覺吸出白色層白細胞層，舉行細胞計數每個樣本細胞數應大于1106，用PBS洗滌，然后按凱基AnnexinV-FIT細胞凋亡檢測試劑盒南京凱基生物科技生長產物要求舉行操縱。上機檢測流式儀為BETNDIKNSN,B、D公司產物，接納enQuest軟件獵取10000個細胞，dFitlt軟件闡發(fā)并得到結果。1.7統計學處置懲罰接納雙側t查驗，P0.05以為差異有明顯性。2結果2.1體重變革蟾酥，組給藥前，給藥后第5天及瀕死期小鼠體重無顯著改變，但比擬組瀕死期與給藥前比力，體重有所減輕，且

5、具有明顯性差異P0.05。結果見表1。表1各組小鼠體重的變革比力(略)2.2保存時間蟾酥，組與比擬組比力，保存時間均有差異程度的延伸，蟾酥，組比力差異具有明顯意義，各組小鼠保存時間及生命延伸率結果見表2。表2各組小鼠保存時間比力(略)2.3外周血象L615白血病鼠分組給藥后，同組間比力白細胞數均漸漸上升，至第5天蟾酥、組有統計學意義。瀕死小鼠白細胞均明顯增高P0.01。血小板是先升后落，至瀕死期，各組血小板數已非常低落P0.01。在給藥后第5天外周血未創(chuàng)造L615細胞，但進入瀕死期比擬組L615細胞已占50.25%，蟾酥，組L615細胞不及比擬組高，并具有明顯性差異P0.05,P0.01。結果

6、見表3。表3各組小鼠外周血B，PLT計數及L615細胞百分比比力(略)2.4肝脾指數各組殞命小鼠的肝臟指數無差異，脾臟指數蟾酥組較比擬組低，組間比力有統計學意義P0.05。結果見表4。表4各組肝脾指數比力(略)2.5肝、脾、骨髓涂片及骨髓白細胞分類比擬組及蟾酥各組小鼠殞命后，取其肝、脾、骨髓舉行涂片剖解時見胸腹部皮下有出血點且比擬組出血點更普及而麋集，乃至出現淤斑，瑞氏染色。油鏡下可見，各組肝、脾、骨髓內絕大部門為L615細胞，且生長茂盛，尤其是肝臟內L615細胞比在體外造就時體積大，外形不規(guī)矩?？傮w印象：胞漿少，嗜堿性，核漿比例嚴峻失調，胞核體積遠宏大于胞漿；核染色質粗，核仁1數個圖1。骨髓

7、白細胞分類見表5。蟾酥組L615細胞百分比比比擬組明顯淘汰P0.05。表5各組骨髓B及L615細胞百分比比力(略)2.6流式細胞儀測定白細胞凋亡率按照F檢測結果可知圖2，蟾酥誘導L615白血病小鼠白細胞凋亡，隨藥物濃度的增長凋亡率也增長圖2中右上象限為晚期凋亡百分率，右下象限為早期凋亡百分率，兩者之和為凋亡細胞百分率。結果見表6。表6各組白細胞凋亡率比力略3討論本實行結果表現：蟾酥作用于L615白血病小鼠后，能明顯延伸小鼠生命，且隨藥物濃度增長，而生命延伸率也增長，實行前后，蟾酥組小鼠體重變革不大。而L615模子組體重顯著減輕。外周血象瀕死期比力白細胞數，蟾酥組遠低于比擬組；各組在病程早、中期

8、血小板數目漸漸升高，進入白血病晚期隨之落落，比擬組落落更為明顯，這與剖解所見比擬組皮下出血點更顯著一樣等。這大概是蟾酥對骨髓的非常造血成效具有按捺作用，而對凝血成效影響較校L615細胞在外周血白細胞中所占比例比擬組遠高于蟾酥各組。這些變革皆說明比擬組小鼠的病情比蟾酥組更嚴峻，從脾臟指數的變革表現比擬組脾臟受到了L615細胞的嚴峻浸潤，同時說明蟾酥對L615細胞侵占免疫體系具有必然的按捺作用。流式細胞術證明，蟾酥能誘導小鼠體內白血病細胞的凋亡。以上實行數據表白，蟾酥對L615白血病具有必然的療效，其機制之一是誘導白細胞凋亡，再那么對機體免疫體系成效的庇護有必然的作用。如今白血病治療重要接納藥物、

9、化療和骨髓移植等3個方面。藥物治療白血病結果不甚抱負，副作用多，乃至出現骨髓按捺征象，化療雖有殺滅白血病細胞排除白血病細胞的浸潤作用，但同時對正常細胞也有損傷，骨髓移植樂成率不高，且用度貴。按照白血病的臨床特點，在中醫(yī)學中屬于“急勞“熱勞“虛勞“血癥的領域3。白血病屬頑疾，古代醫(yī)家以為對頑病痼疾當“以毒攻毒，蟾酥為有毒中藥，以蟾酥治療白血病切合“以毒攻毒原那么。蟾蜍治愈淋巴細胞白血病就是個例子4。從蟾酥抗實體腫瘤表現，它在抗腫瘤的同時還具有規(guī)復細胞免疫成效及提拔白細胞作用5。這與我們的實行結果一樣等，為蟾酥走向臨床，應用于白血病的治療提供了必然的理論根據。當前抗白血病藥物存在骨髓按捺征象，與之比擬蟾酥具有其良好性?！緟⒖嘉墨I】1朱大誠，尹小明，黃學明，等.蟾酥對白血病E細胞的按捺作用及誘導其凋亡的研究J.時珍國醫(yī)國藥，2022，1810：2398.2儲建新，李肇玫615近交系小鼠及其在實行腫瘤研究