蟬花中ＩＳＰ 類免疫活性組分含量測定的研究

1、蟬花中 類免疫活性組分含量測定的研究楊明靜王伯初余佳文毛先兵朱華李【摘要】目的創(chuàng)立快速、高效測定蟬花類免疫活性組分含量的要領(lǐng)。要領(lǐng)接納茚三酮比色法測定類次生代謝產(chǎn)物的含量，通過線性度和線性范疇、細密度、不變性及正確度等指標(biāo)評價該要領(lǐng)。效果該要領(lǐng)檢測線性范疇為，相干系數(shù)為，均勻接納率為，RSD為。結(jié)論茚三酮比色法輕便快捷、效果不變、敏捷度高，可作為測定蟬花類免疫活性組分的有用要領(lǐng)。【關(guān)鍵詞】蟬花比色法Abstrat：bjetivefrdeterinatinfiadaeethds，Resultslinear，RSDnlusin，.ItanbeusedfrtheftheiadaeKeyrds：rdy

2、epsiadae；蟬花是我國傳統(tǒng)的一種珍貴中藥，與冬蟲夏草一樣同屬蟲菌復(fù)合體，且含有相近的化學(xué)身分，醫(yī)家常將其用作冬蟲夏草的代用品。醫(yī)學(xué)研究表白，它具有明顯的免疫調(diào)治、抗疲憊和改進腎成效的作用。而有關(guān)蟬花藥理物質(zhì)底子的報道仍舊較少。等通過細胞模子從蟬花造就濾液中挑選得到的免疫活性身分，具有明顯的雙向免疫調(diào)治作用，免疫按捺力比環(huán)孢菌素更強且副作用小，。由于蟬花類次生代謝產(chǎn)物含量較低，難以檢測，如今尚未見定量測定其含量的報道。基于類物質(zhì)為長脂鏈氨基酸，與茚三酮共熱時天生藍紫色的酮茚胺，在必然范疇內(nèi)吸光度和氨基酸含量成正比，本研究接納茚三酮比色法定量測定蟬花類物質(zhì)的含量，創(chuàng)立起一種快捷有用測定類物質(zhì)

3、的要領(lǐng)。1東西與要領(lǐng)1.1儀器與試劑紫外可見光分光光度計日本；電子天平上海精天電子儀器廠；型起落恒溫水浴鍋鞏義市英峪予華儀器廠；非極性大孔吸附樹脂天津南開大學(xué)化工場；型酸度計上海洪紀儀器裝備；絲氨酸上?？颠_氨基酸廠；茚三酮上海三愛思試劑。別的試劑均為闡發(fā)純，水為去離子水。1.2要領(lǐng)2效果與討論2.1最大汲取波長簡直定分光光度法測定物質(zhì)含量時，起首須確定反響體系的最大汲取波長。別離細密汲取樣品溶液、絲氨酸比較溶液和水，按要領(lǐng)“項，以水為參比于波長下舉行全波長掃描，效果如圖所示?？梢姌悠啡芤悍错懏a(chǎn)物在處有最大吸光度，與比較品絲氨酸反響產(chǎn)物掃描效果雷同效果未給出，與文獻報道氨基酸反響產(chǎn)物掃描效果同等

4、；空缺液在以后根本無汲取。由此確定為測定波長。2.2反響溫度和反響時間簡直定細密汲取絲氨酸比較溶液，按要領(lǐng)“，別離于，水浴加熱差異時間，測定A，效果見圖。可見，隨著反響時間的增長，A值隨之增大，隨后趨于不變。在下反響，A值到達最大。再增長反響時間，值無顯著變革。而在，條件下，反響完全的時間均因溫度低而延伸。同時對樣品舉行了觀察，效果如圖所示?？梢姡瑯悠吩谙潞蠓错懸惨淹耆?。因此，確定反響溫度為，反響時間為。圖反響產(chǎn)物和空缺的掃描圖略圖反響時間和反響溫度與吸光度的干系略2.3尺度曲線的繪制細密汲取絲氨酸比較溶液，和，根據(jù)要領(lǐng)“項測定A。以絲氨酸含量為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)，繪制尺度曲線如圖。效果表白，

5、絲氨酸濃度在范疇內(nèi)與吸光度呈精良的線性干系。圖絲氨酸尺度曲線略2.4細密度和不變性實行細密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項，一連測定A次，別離為，和。求得相對尺度缺點RSD為，說明本要領(lǐng)細密度精良。細密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項，反響后安排，測定A，別離為，。求得RSD為?？梢婏@色反響在內(nèi)無顯著褪色，說明本要領(lǐng)不變性精良。2.5重現(xiàn)性實行在舉行樣品檢測時，不但要求要領(lǐng)具有較高的敏捷度和細密度，并且還要有很高的重現(xiàn)性。細密汲取份樣品溶液各，根據(jù)要領(lǐng)“項，測定，別離為，和，求得RSD為，說明本要領(lǐng)重現(xiàn)性精良。2.6接納率實行為了確定該要領(lǐng)的正確度，舉行了加樣接納率實行。細密汲取樣品溶液按要領(lǐng)“項舉行比色測定

6、，測得值為本底量。然后別離參加絲氨酸比較溶液，測定A，得加樣后的總量，盤算均勻接納率和RSD，得加樣接納率實行效果，見表，可見本要領(lǐng)正確度精良。表1加樣接納率實行效果略2.7樣品測定闡發(fā)細密汲取樣品溶液，按要領(lǐng)“項測得其A為。對應(yīng)尺度曲線并盤算得發(fā)酵液濾液類物質(zhì)濃度為。同時，測定了菌絲體類物質(zhì)的濃度。細密稱量蟬花菌絲體，乙醇回流次，過濾得乙醇提取液水稀釋，按要領(lǐng)“項，得菌絲體乙二醇甲醚溶液，細密汲取上述溶液，按要領(lǐng)“項測得其為。而每升發(fā)酵液可得到菌絲體，對應(yīng)尺度曲線并盤算得菌絲體類物質(zhì)濃度為。合計每升發(fā)酵液類物質(zhì)濃度為?？梢姡s花中類次生代謝產(chǎn)物的含量較低，仍舊有待通過菌種選育和優(yōu)化發(fā)酵條件進

7、步其產(chǎn)量。2.8測定要領(lǐng)的評價蟬花中類次生代謝產(chǎn)物含量低，難以檢測。筆者接納茚三酮比色法對蟬花類物質(zhì)含量的測定舉行了研究。在創(chuàng)立測定要領(lǐng)時，為了去除其他類氨基酸對測定的滋擾，按要領(lǐng)“項舉行了薄層層析檢測，效果如圖所示。可見，絲氨酸比較品和樣品經(jīng)茚三酮顯色后，均天生紅紫色物質(zhì)，薄層睜開后具有雷同的值。發(fā)酵液中含有大量極性較大的物質(zhì)，在薄層上表現(xiàn)為靠近原點處的紫赤色帶。而經(jīng)太過散的樣品僅靠近前沿有赤色斑點，去除了樣品中有其他極性氨基酸物質(zhì)的滋擾。通過斷定樣品重要身分之一為效果另文報道，表白樣品中顯色的為類弱極性物質(zhì)，為茚三酮比色法測定類物質(zhì)提供了根據(jù)，從而確保該法測定樣品中類物質(zhì)的正確性。圖薄層層析色譜圖略筆者對本要領(lǐng)反響體系舉行了公正優(yōu)化，選用乙二醇甲醚對樣品甲醇溶液舉行稀釋，其作為茚三酮的溶劑，稀釋樣品甲醇溶液的同時可以保持溶液的澄清，且沸點較高，反響歷程中不會逸出粉碎反響體系。同時，觀察了定量闡發(fā)要領(lǐng)認證的參數(shù)，如線性度和范疇、細密度、正確度、不變性及重復(fù)性等。實行效果表白，茚三酮比色法簡樸快速，細密度高，正確度好，可作為蟬花中類免疫調(diào)治活性物質(zhì)含量測定的有用要領(lǐng)，對付進一步優(yōu)化的消費工藝和研究其藥理作用均具有緊張的意義?！緟⒖嘉墨I】1王琪，劉作易藥用真菌蟬花