蜈蚣醇提取物和水提取物部分藥理作用比較

1、蜈蚣醇提取物和水提取物局部藥理作用比擬【摘要】目的比擬鮮品少棘蜈蚣的醇提物及水提物在體外抑菌和抗驚厥兩方面的作用。方法采用平板空穴擴散法，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色念珠球菌、黑曲霉菌5種常見菌為供試菌，對蜈蚣醇提物及水提物的抑菌活性進展研究；采用硝酸士的寧致癇模型，觀察蜈蚣醇提物及水提物對小鼠抗驚率、死亡率及驚厥埋伏期的影響。結(jié)果蜈蚣醇提物水提物對各供試菌均有抑制作用，醇提物抑菌效果明顯強于水提物。蜈蚣水提物可以明顯進步抗驚率，降低死亡率，延長小鼠驚厥埋伏期，埋伏期到達(372146.9)s，與對照組比擬有顯著性差異(P0.01)。蜈蚣醇提物沒有明顯抗驚厥作用。結(jié)論

2、蜈蚣活性成分及作用效果與提取部位親密相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】少棘蜈蚣提取物抑菌活性抗驚厥作用蜈蚣是重要的中藥材，具有祛風鎮(zhèn)驚，解毒散結(jié)，通絡止痛的成效。在我國少棘蜈蚣入藥已有兩千多年歷史，被?中國藥典?所收載。藥理學研究說明蜈蚣在抗驚厥、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗衰老、抗心肌缺血、抗菌和促進消化、增強免疫功能等方面均有活性1，2。傳統(tǒng)中藥以蜈蚣全蟲入藥，研究說明不同提取物所含活性物質(zhì)不同，藥效有明顯差異。在體外抑菌方面，秦非3、冉泳祿等4對墨江蜈蚣和少棘蜈蚣的不同提取液體外抑制致病真菌的作用進展了比擬，發(fā)現(xiàn)兩種蜈蚣的酸性提取液對致病性真菌均有較強的抑制作用，而堿提液和水提液效果不佳。吳剛等5比擬不同提取液對

3、致病性真菌和細菌的作用，提出3%醋酸提取液能強烈抑制真菌生長，但各提取物對細菌均無作用。任文華等6用含有大腸桿菌、聚次黃苷-聚胞苷酸和昆蟲生理鹽水的注射液誘導后,蜈蚣水提取物表現(xiàn)出廣譜抗菌活性。在抗驚厥方面，宋建微7提出枯燥蜈蚣水煎液對小鼠具有明顯中樞抑制作用。陳紅琳8證明蜈蚣枯燥蟲體水提物對硝酸士的寧引起的驚厥有對抗作用。楊永華等9研究說明枯燥蜈蚣醇提物、水提物對士的寧所致驚厥均有不同程度的拮抗作用。姚宏偉等10對僵蠶蜈蚣醇提物在抗驚厥方面的藥效作了比擬，發(fā)現(xiàn)兩者均能抑制最大電休克驚厥以及戊四氮所致驚厥的發(fā)生。目前對鮮品蜈蚣提取物在抑菌及抗驚厥方面的作用鮮有報道，本實驗對鮮品蜈蚣醇提物、水提

4、物在這兩方面的作用進展了初步研究，為別離提取相應活性成分打下基矗1材料與方法1.1材料動物：IR小鼠,體重1822g,雄性，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)，答應證號：SXK京2022001。藥品與菌株：少棘蜈蚣購于安徽花山光明養(yǎng)殖場；硝酸士的寧，siga公司消費；安定片，每片1g，北京益民藥業(yè)消費，批號：國藥準字H11020891。細菌：大腸桿菌Esherihiali、金黃色葡萄球菌(Staphylusaureus)、枯草桿菌黑色變種芽孢Baillussubtilisvar.nigerspre；真菌：白色念珠球菌(andidaalbians)、黑曲霉菌Aspergillusniger。各菌株均由

5、北京化工大學生命科學與技術(shù)學院相關(guān)實驗室鑒定提供。培養(yǎng)基：細菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂1520g，水1000l，pH7.07.2；真菌采用含糖瓊脂培養(yǎng)基葡萄糖20g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂1520g，水1000l。1.2方法1.2.1藥液制備醇提物：取冷凍鮮品少棘蜈蚣參加一定量去離子水料液比110進展勻漿，離心，取上清液，冷凍枯燥得凍干粉。取該凍干粉假設(shè)干克參加40倍60%乙醇回流提取兩次，第1次1.5h，第2次1h，合并兩次提取液抽濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍枯燥得蜈蚣醇提物，置冰箱保存?zhèn)溆?。水提物：取新穎冷凍少棘蜈蚣參加一定量去離子

6、水料液比110進展勻漿，離心，取上清液水煎煮兩次，第1次2h，第2次1h，合并兩次煎液抽濾，真空減壓蒸餾至少量，冷凍枯燥得水提物，置冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2菌懸液制備挑取活化好的菌種接入液體培養(yǎng)基中，180r/in，細菌在37恒溫搖床培養(yǎng)68h，真菌在28恒溫搖床培養(yǎng)1820h，培養(yǎng)后作為原菌液，用滅菌的生理鹽水稀釋至106108個/l，備用。1.2.3體外抑菌實驗采用平板空穴擴散法測抑菌活性。于直徑9滅菌培養(yǎng)皿中參加菌液0.1l,每種菌參加一個平皿,然后注入已溶化冷卻至4550的培養(yǎng)基20l,立即輕晃混勻,待瓊脂凝固后,用自制打孔器在培養(yǎng)基上等間隔 打6個直徑5的孔。用微量加樣器汲取不同濃度

7、采用2倍稀釋法用無菌水分別稀釋成濃度為500，250，125g/l的蜈蚣醇提物或水提物50l參加各孔內(nèi)。平板中央打一孔，參加無菌水做空白對照。以上操作均在無菌條件下進展。細菌置37培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)24h，真菌置28培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)48h。量取抑菌圈直徑(抑菌圈直徑以計),實驗重復2次,以2次平均值為抑菌圈直徑。1.2.4抗驚厥實驗取安康IR小鼠40只，1822g，雄性，隨機分為4組：空白對照組、安定組、醇提物組、水提物組。對照組給予去離子水，醇提物組和水提物組劑量均為8g/kg，安定組為1.5g/kg，均灌胃給藥，灌胃容量0.1l/10g，1次/d，連續(xù)7d。于末次灌胃給藥60in后，腹腔注射硝酸

8、士的寧1.5g/kg，以小鼠發(fā)生強直性驚厥為指標記錄各組小鼠驚厥數(shù)和死亡數(shù)以及驚厥埋伏期600s內(nèi)不驚厥按600s計。所得數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計軟件處理，采用t檢驗，結(jié)果以s表示。2結(jié)果與分析2.1體外抑菌實驗結(jié)果蜈蚣醇提物的抑菌作用如表1所示，結(jié)果說明蜈蚣醇提物對各供試菌均有不同的抑制作用。蜈蚣醇提物對細菌的抑制作用較強如對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌黑色變種芽孢均表現(xiàn)出較好的抑菌作用。當濃度為125g/l時，枯草桿菌黑色變種芽孢抑菌圈直徑已到達11。隨著濃度增高抑菌圈直徑增大，濃度為500g/l時大腸桿菌最大抑菌圈直徑到達16。醇提物對真菌作用較弱，如白色念珠球菌在125g/l時沒有抑菌

9、圈；黑曲霉效果更弱，當濃度250g/l時仍沒有抑菌圈且隨著培養(yǎng)時間延長還有促菌生長的現(xiàn)象。表1蜈蚣醇提物抑菌作用蜈蚣水提物的抑菌作用如表2所示，結(jié)果顯示蜈蚣水提物對各供試菌的抑制作用普遍低于醇提物。與醇提物類似蜈蚣水提物對細菌的作用強于真菌。對金黃色葡萄球菌當藥液濃度為125g/l時，抑菌圈直徑仍能到達12。表2蜈蚣水提物抑菌作用由于蜈蚣體內(nèi)含有大量的蛋白質(zhì)、氨基酸以及脂類、微量元素等11，提取方法不同，提取物中所含活性成分也不一樣，所以產(chǎn)生不同的抑菌效果。2.2抗驚厥作用提取物對小鼠抗驚率、死亡率及驚厥埋伏期的影響如表34所示。結(jié)果說明蜈蚣水提物對硝酸士的寧所致驚厥有明顯的對抗作用，抗驚率到

10、達50%，死亡率為30%遠低于對照組80%。水提物組能明顯延長致癇小鼠強直性驚厥的埋伏期，與對照組相比有顯著統(tǒng)計學意義P0.01。以抗驚率和死亡率為指標醇提物對硝酸士的寧所致驚厥根本沒有效果，抗驚率為0，死亡率為100%。醇提物組強直性驚厥埋伏期與對照組比擬沒有統(tǒng)計學意義，且在喂養(yǎng)期間有一只死亡表現(xiàn)出一些毒性反響。其原因可能是鮮品蜈蚣存在一些毒性成分如溶血性蛋白質(zhì)和組織胺12，影響了實驗結(jié)果。表3提取物對小鼠抗驚率及死亡率的影響表4提取物對小鼠驚厥埋伏期的影響3結(jié)論蜈蚣醇提物與水提物體外抑菌實驗結(jié)果說明，各提取物對供試細菌、真菌均有作用，醇提物在抑菌效果上普遍優(yōu)于水提物，尤其對大腸桿菌、金黃色

11、葡萄球菌、枯草桿菌黑色變種芽孢的抑制作用明顯。鮮品蜈蚣水提物對硝酸士的寧所致驚厥有明顯的對抗作用，而醇提物根本沒有效果，這為傳統(tǒng)煎服蜈蚣提供了理論根據(jù)。蜈蚣不同的提取物在藥理作用上各有針對性，醇提物對真菌和細菌有較好的抑制作用，而水提物的抗驚厥效果顯著，這對于更好的利用蜈蚣，充分發(fā)揮藥材的作用有一定的指導意義。【參考文獻】1梁潔.藥用蜈蚣的化學成分及藥理活性研究近況J.廣西中醫(yī)藥,2022,28(4)：6.2韓雙紅.蜈蚣的研究進展J.天津藥學,2002,14(5)：13.3秦非,遲萍,遲程,等.墨江蜈蚣和少棘蜈蚣體外抑菌的比照研究J.中國民族醫(yī)藥雜志,1995,15:13.4冉泳祿，吳剛，王金煥,等.墨江蜈蚣與少棘蜈蚣的比擬研究J.動物學研究,1996,17(1)：79.5吳剛,王金煥,冉永祿,等.墨江蜈蚣與少棘巨蜈蚣對致病真菌和細菌體外生長的影響J.皮膚病與性病,1992,14(2):12.6任文華,張雙全,宋大祥,等.少棘蜈蚣水提物的抗菌活性J.中藥材,2022,30(1):10.7宋建微，孟祥琴，王永利.蜈蚣提取物中樞抑制作用及急性毒性J.河北醫(yī)學院學報,1995,16(2):91.8陳紅琳,李小莉,甘明.墨江蜈蚣的藥理作用J.湖北中醫(yī)雜志,2022,5(1):50.9楊永華，張水寒，徐琳本