生物堿類成分分析2課件

1、 生物堿類成分分析熟悉生物堿類成分結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)掌握生物堿類制劑定性鑒別常用方法掌握生物堿類制劑定量分析常用方法概述定義：生物堿是生物界除生物體必須的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族微生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對(duì)而大多具有堿性。 絕大多數(shù)具有顯著的生理活性中藥材中生物堿多以有機(jī)酸鹽的狀態(tài)存在結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)特征 ：大多含有C 、H、 O、 N理化性質(zhì) ： 物理性狀：結(jié)晶性固體；液體、小分子固體（揮 發(fā)性、升華性），多無(wú)色 溶解性：多樣化 沉淀反應(yīng)：生物堿沉淀試劑，定性（蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì)，避免假陽(yáng)性） 顯色反應(yīng)：用于純品，少用于制劑中生物堿分析

2、 堿性：多呈堿性，堿性強(qiáng)成鹽，弱游離，供試品制備及分析方法建立及條件 選擇的依據(jù) 紫外光譜：共軛體系，紫外吸收定性鑒別一般理化鑒別 沉淀反應(yīng)：酸性條件下或酸性稀醇下，生物堿能與一些試劑生成沉淀。（注意多肽，鞣質(zhì)，蛋白質(zhì)等假陽(yáng)性）色譜鑒別 TLC吸附劑：硅膠，氧化鋁（不能用酸性） 展開(kāi)劑：氯仿，苯等及一些相應(yīng)極性的調(diào)節(jié)劑 顯色劑：改良的碘化鉍鉀，碘蒸汽等 此外還可用某些生物堿的特殊顏色反應(yīng)，如麻黃 堿與印三酮 PC正相色譜，BAW系統(tǒng)展開(kāi)劑，固定相為濾紙中的水，不能用含硫酸的做顯色劑。在堿性系統(tǒng)或堿性環(huán)境下展開(kāi)注意 HPLC高效液相色譜法對(duì)結(jié)構(gòu)十分相似的生物堿有很 好的分離效果，在恒定的高效液相

3、色譜條件下，各生物堿有一定的保留時(shí)間，可作為定性鑒別的參數(shù)。 優(yōu)點(diǎn)：快速，靈敏，微量等總生物堿含量測(cè)定化學(xué)分析法：樣品供試品溶液中總生物堿成分純度較高，常用與處方藥味較少，內(nèi)含成分較簡(jiǎn)單的中藥制劑。分光光度法：多用單波長(zhǎng)光度法，要求干擾成分在測(cè)定波長(zhǎng)基本無(wú)吸收。樣品分離、凈化（化學(xué)法、柱色譜法、TLC、PC法等）按操作方法分類（1）（2）操作方法 將生物堿從中藥制劑中提取，用適宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接稱重。 加入某些試劑，使生物堿生成不溶性鹽沉淀，稱量沉淀，計(jì)算生物堿含量。優(yōu)點(diǎn) 計(jì)算簡(jiǎn)便，不用換算因數(shù)，也不必考慮生物堿的分子量。取樣量少，靈敏度高缺點(diǎn)揮發(fā)性生物堿蒸發(fā)提取溶劑或加熱、干燥

4、時(shí)能分解破壞以及加堿使生物堿游離時(shí)可發(fā)生水解的不宜使用取樣量大、操作時(shí)易乳化、費(fèi)時(shí)。 計(jì)算方法復(fù)雜，繁瑣，影響因素較多，干擾多（沉淀試劑、PH、T、以及與試劑生成沉淀的非生物堿成分）表一 兩種重量分析法異同比較表 分光光度法直接測(cè)定法： 不經(jīng)化學(xué)反應(yīng)，利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測(cè)定的方法。 適用：一般用于藥味較少，內(nèi)含成分簡(jiǎn)單，干擾不大的中藥制劑中總生物堿的含量測(cè)定。（戊己丸、駐車丸） 戊己丸和駐車丸 分光光度法離子對(duì)萃取比色法： 酸性染料比色法： B+H+ BH+HIn H+In- BH+ +In- BH+ In- 本法測(cè)定的關(guān)鍵在于： 介質(zhì)的pH值， 酸性染料的性質(zhì)， 有機(jī)溶劑

5、的性質(zhì)。 分光光度法離子對(duì)萃取比色法： 雷氏銨鹽比色法： BH+ +Cr(NH3)2(SCN)2Cr(NH3)2(SCN)2 將沉淀分離，溶于丙酮，于520526nm波長(zhǎng)處比色測(cè)定吸收度，換算生物堿的含量。 分光光度法離子對(duì)萃取比色法： 異羥污酸鐵比色法：含有酸酯鍵結(jié)構(gòu)的生物堿，在介質(zhì)中加熱，酯鍵水解，產(chǎn)生羧基與羥胺生成異羥污酸，與Fe3+ JDS 生成紫紅色配合物，在一定濃度下符合Beer定律，比色法進(jìn)行含量測(cè)定。 供試品溶液中必須不存在其他酯類成分 注意！HPLC色譜柱中的硅醇基酸性較大，使保留時(shí)間延長(zhǎng)，峰行變寬，拖尾。 改進(jìn)流動(dòng)相： 加入硅醇基抑制劑，競(jìng)爭(zhēng)或部分阻斷硅醇劑的影響，最常用硅醇基抑制劑是二乙胺、三乙胺（TEA)等。 合適的pH下，加入低濃度離子對(duì)試劑，通過(guò)與生物堿類成分生成離子對(duì)而掩蔽其堿性基團(tuán)。常用離子對(duì)試劑：辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉。注意：清洗柱子，避免過(guò)夜，保證色譜柱的壽命。 加入季銨鹽試劑，掩蔽固定相表面的硅醇基，如在水甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。 加入電解質(zhì)緩沖鹽，通過(guò)改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度，穩(wěn)定pH值及促進(jìn)離子對(duì)相互作用，起到改善峰形及分離效果的作用。改進(jìn)固定相： 封尾技術(shù)，即鍵合反應(yīng)結(jié)束后，用三甲基氯硅烷等