HIV實驗室質(zhì)量管理

1、艾滋病實驗室質(zhì)量管理實驗室質(zhì)質(zhì)量管理理行政支持持行政部門門和領(lǐng)導導HIV實驗室建建設(shè)和發(fā)發(fā)展資資金人人員監(jiān)監(jiān)督督支持人員培訓訓每年市疾疾控中心心組織上上崗證環(huán)境條件件：實驗室室的設(shè)置置及其建建筑、設(shè)設(shè)施、設(shè)設(shè)備必須須符合全國艾滋滋病檢測測工作管管理辦法法的要求。HCV，HBV及梅毒等等血清學學檢測在在滿足實實驗室管管理要求求和保證證生物安安全的條條件下，可以與與HIV檢測共享享空間和和設(shè)備，應(yīng)避免免交叉污污染。實驗室質(zhì)質(zhì)量管理理樣品采集集、運送送和處理理送檢單收樣登記記表HIV抗體復檢檢檢測單單檢測方法法和試劑劑的選擇擇試劑的出出入庫及及使用記記錄供應(yīng)品、耗材（試劑）質(zhì)量驗驗收記錄錄表實驗室質(zhì)

2、質(zhì)量管理理設(shè)備維護護與校準準儀器設(shè)備備溫度記記錄表儀器設(shè)備備使用、檢定、維修、維護記記錄本強檢計量量器具周周期檢定定（自校校）計劃劃表文件和文文件管理理實驗原始始記錄表表結(jié)果報告告樣品登記記和保存存（唯一編碼碼）實驗室質(zhì)質(zhì)量管理理文件和文文件管理理標準操作作程序（SOP）（1）樣品的的接收、登記、處理、保存和和運輸；（2）檢測方方法和步步驟；（3）試劑使使用和保保存；（4）儀器的的使用維維護和校校準；（5）質(zhì)量控控制要求求及程序序；（6）結(jié)果解解釋與報報告；（7）保密程程序；（8）實驗室室數(shù)據(jù)、相關(guān)文文件記錄錄與保存存；（9）不確定定樣品追追蹤和處處理；（10）實驗室室安全防防護及實實驗室的的

3、清理和和消毒。文件存檔檔（保存存10年以上）ELISA實驗影響響因素酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素樣品溶血標本本及混有有紅細胞胞的血清清采用ELISA法檢測易易產(chǎn)生假假陽性可可能能是溶血血血清中中含有過過氧化酶酶物質(zhì)（紅細胞胞或血紅紅蛋白中中的亞鐵鐵血紅素素），在在洗滌過過程中往往往難以以完全洗洗脫，它它可使過過氧化氫氫釋放出出原生態(tài)態(tài)氧，從從而催化化底物四四甲基聯(lián)聯(lián)苯胺生生成可溶溶性的有有色物質(zhì)質(zhì)，即顯顯藍色，產(chǎn)生假假陽性。輕微溶溶血沒事事，嚴重重溶血的的標本易易產(chǎn)生假假陽性。受細菌污污染的標標本因菌菌體中可可能含有有內(nèi)源性性辣根過過氧化物物酶，因因此，被細菌污污染的標標本同

4、溶血標標本一樣樣，亦可可產(chǎn)生非非特異性性顯色而而干擾測測定結(jié)果果。酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素樣品塑料試管管能吸附抗抗原物質(zhì)質(zhì)，樣本本久置在在塑料管管內(nèi)會使使樣本內(nèi)內(nèi)抗原含含量下降降造成假假陰性，最好好使用真空采血血管或抗抗凝管。（抗凝凝劑會略略有影響響，但影影響不大大）標本凝固固不全在在工作中中，有時時為了爭爭取時間間快速檢檢測，常常在血液液還未開開始凝固固時即強強行離心心分離血血清，使使血清中中仍殘留留部分纖維蛋白白原，在ELISA測定過程程中可以以形成肉肉眼可見見的纖維維蛋白塊塊，易造造成假陽陽性結(jié)果果；因此此血液標標本采集集后必須須使其充充分凝固固后再分分離血清清。酶

5、聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素按說明書書要求，實驗前前應(yīng)取出出試劑穩(wěn)穩(wěn)定加樣加樣的量量要準確確移移液器要要經(jīng)常清清洗定定期校校準加樣位置置孔壁1/3以下不可濺出出不不可產(chǎn)生生氣泡必須使用用一次性性TIP頭，嚴格格控制，防止交交叉污染染先加稀釋釋液的，加樣時時可用移移液器孔孔內(nèi)吹打打混勻移液器的的校準可以送檢檢，可以以自校，自校要要有SOP有記錄酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素孵育時間嚴嚴格格按照試試劑盒說說明書操操作容容易控控制溫度嚴嚴格格按照試試劑盒說說明書操操作用用校準準的溫度度計監(jiān)測測溫度，特別是是冬天，避免因因溫度過過低導致致假陰性性。封板孵孵育育時不貼貼封

6、片或或加蓋，使標本本或稀釋釋液蒸發(fā)發(fā)，吸附附于孔壁壁,難以清洗洗徹底。恒溫孵育育設(shè)備的的使用與與維護校準的溫溫度計監(jiān)測ELISA反應(yīng)溫度度水浴的尤尤其要注注意水位酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素洗板洗液的量量試劑不同同，板孔孔的大小小差異會會導致洗洗液的量量的不同同，為保保證洗的的徹底，原則是是量足夠多多且不會會逸出。浸泡時間間嚴格按照照試劑盒盒說明書書操作，一般30-60秒，不設(shè)置置浸泡時時間或時時間太短短，洗脫脫不徹底底的話會會產(chǎn)生“花板”。保持針孔孔通暢不不阻塞血清中殘殘留的的的纖維蛋蛋白絲或或洗滌液液析出的的結(jié)晶易易使洗板板機的針針孔處于于阻塞狀狀態(tài)，造造成未結(jié)結(jié)合標記記

7、酶洗脫脫不徹底底，導致致“花板板”。應(yīng)應(yīng)做好洗洗板機的的維護工工作。拍板酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素洗板機的的檢定、使用及及維護檢定：注注液量和和殘留量量（每孔孔5微升）使用：設(shè)設(shè)置程序序（注液液量、洗洗板次數(shù)數(shù)、浸泡泡時間、洗板位位置）維護：消消毒液沖沖洗，蒸蒸餾水沖沖洗酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素顯色加底物時時，應(yīng)懸空加液，避避免觸及及板孔內(nèi)內(nèi)壁造成成交叉污污染。應(yīng)先加底物物緩沖液液A再加TMB(四甲基聯(lián)聯(lián)苯胺)底物B，加入順順序不能能顛倒。已顯淺淺藍色的的TMB底物堅決決不能用用。個別試劑劑要求A、B液先混合合后再加加。溫度與時時間的控控制。酶聯(lián)免疫疫

8、吸附實實驗（ELISA）的影響響因素終止及讀讀板讀板前應(yīng)應(yīng)保證板孔底部部干凈，無無異物，無水氣氣，無氣氣泡，特特別是在在冬天。酶標儀不不應(yīng)放置置在陽光光或強光光照射下下,操作時室室溫宜在在15-30,使用前先先預熱15-30min,測讀板結(jié)結(jié)果會更更穩(wěn)定。酶標儀必必須檢定定標準板廠家酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）的影響響因素Cutoff值計算及及結(jié)果判判定注意意事項嚴格按照照試劑說說明書要要求的數(shù)數(shù)量做陰陰、陽性性對照根據(jù)陰、陽性對對照的值值判定實實驗是否否成立嚴格按照照試劑說說明書要要求計算算Cutoff值注意空白白原始記錄錄標明空白對照照、陽性對照照、陰性對照照、外部對照照以及待檢樣品

9、品的位置試劑盒廠廠家、測測定方法法、批號號、效期期操作人員員和復核核人員姓姓名（簽簽名）檢測日期期其他（環(huán)環(huán)境、設(shè)設(shè)備、實實驗依據(jù)據(jù)等）注意樣本的溯溯源性廢棄物處處理消毒液（含氯消消毒劑、75%乙醇、2%戊二醛）干烤消毒毒（140 2-3h）高壓蒸汽汽消毒（121 15-20min）高壓滅菌菌器檢定定：溫度度和壓力力高壓滅菌菌器使用用效果監(jiān)監(jiān)測：化化學指示示卡，生生物監(jiān)測測（嗜熱熱脂肪桿桿菌芽孢孢）ELISA實驗質(zhì)量量控制ELISA的質(zhì)量控控制試劑盒內(nèi)內(nèi)部對照照：試劑劑盒內(nèi)部部對照質(zhì)質(zhì)控品即即為試劑劑盒內(nèi)提提供的陽性和陰陰性對照照血清。試劑盒盒內(nèi)部對對照用于于判斷每每次實驗驗的有效效性，但但不

10、能作作為室內(nèi)內(nèi)質(zhì)控品品使用。每一次次檢測臨臨床樣品品時，必必須有試試劑盒內(nèi)內(nèi)部對照照，而且且只能在在同批號號的試劑劑盒中使使用。內(nèi)內(nèi)部對照照結(jié)果無無效，必必須重新新試驗。室內(nèi)質(zhì)控控品：為為非試劑劑盒組份份的外部部質(zhì)控品品，是為為了監(jiān)控控檢測的的重復性性而設(shè)置置的，包包括強陽陽性、弱弱陽性和和陰性質(zhì)質(zhì)控血清清。也可可以只設(shè)設(shè)置一個個弱陽性質(zhì)質(zhì)控，以該試劑盒臨臨界值（Cut-off）的23倍為宜。外外部質(zhì)控控品的作作用是，判斷該該批臨床床樣品檢檢測的有有效性，因此，每次實實驗必須須包含室室內(nèi)質(zhì)控控品，其其結(jié)果無無效，必必須重新新試驗。室內(nèi)質(zhì)控控品的來來源商品化的的室內(nèi)質(zhì)質(zhì)控品實驗室自自己制備備（比

11、較較經(jīng)濟）混合試劑劑盒內(nèi)部部對照血血清，通通過做實實驗確定定陰陽性對對照的混混合比例例，混合合，分裝裝保存。混合HIV抗體陽性性人血清清、HIV抗體陰性性人血清清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心心15分鐘，0.2m生物濾膜膜過濾除除菌，5630分鐘加熱熱滅活處處理。通通過做實實驗確定定陰陽性性血清的的混合比比例，混混合，分分裝保存存。高濃度商商品化室室內(nèi)質(zhì)控控品再稀稀釋室內(nèi)質(zhì)控控品的保保存一次購買買或制備備量應(yīng)該該足夠本本實驗室室至少一一年使用用等量分裝裝，可以以按單次次使用、單日使使用、最最長一周周使用的的量確定定每個分分裝的量量不同室內(nèi)內(nèi)質(zhì)控品品應(yīng)做好好標記，最好使使用不同同顏色的的標簽，以防止止混

12、用應(yīng)存放于于-70以下，如無條條件則存存放于非非自動除除霜的-20冰箱一旦融解解后應(yīng)存存放于2-8，一周周后必須須棄去，不能重重新凍存存使用樣品的采采集、處處理、保保存、運運送及接接收樣品的采采集和處處理建議用K2EDTAK3EDTA枸櫞酸鈉鈉的抗凝凝管采血血,不用肝素素抗凝管管采血血漿1500-3000r/min離心15min，吸上層層血漿血清室室溫自自然放置置1-2h，待血液液凝固、血塊收收縮后1500-3000r/min離心15min，吸上層層血清樣品的保保存建議用1.5ml-2.0ml的螺口凍凍存管或或離心管管保存.抗體及抗抗原檢測測的血清清或血漿漿樣品應(yīng)應(yīng)存放于于-20以下,一周內(nèi)檢

13、檢測的樣樣品2-8樣品的保保存盡量多分分裝保存存樣品的運運送要求求樣本量1ml樣本的質(zhì)質(zhì)量無無嚴嚴重溶血血，無微微生物污污染，無無血脂過過多，無無嚴重黃黃疸等管子的質(zhì)質(zhì)量防防漏漏三層包裝裝單管包裝裝重新采樣樣樣品的運運送要求求樣品和送送檢單分分開專人送樣樣專專門運送送箱（實實驗室人人員號碼碼和聯(lián)系系方式）市疾控控確證實實驗室血清or血漿2-8度運送或或者凍存存狀態(tài)下下直接運運送送樣單要要求送樣單打打印檢測者/審核者手手簽，單單位或?qū)崒嶒炇疑w蓋章信息完整整(真實姓名名、送檢檢人群、身份證證號碼、聯(lián)系電電話、現(xiàn)現(xiàn)地址及及戶籍地地址等)詳細的樣樣本來源源(監(jiān)管場所所的具體體到哪個個監(jiān)管場場所)充分利

14、用用備注欄欄規(guī)范性(試劑、cutoff值等)樣品的接接收打開包裝裝，注意意生物安安全，個個人防護護核對樣品品與送檢檢單，檢檢查樣品品管有無無破損和和溢漏記錄一一般般記錄，另外記記錄有無無嚴重溶溶血，微微生物污污染、血血脂過多多及黃疸疸等情況況開蓋生生物安安全柜中中，個人人防護HIV抗體檢測測HIV抗體檢測測的目的的HIV抗體檢測測可用于于診斷、血液篩查查、監(jiān)測等。以診斷為為目的的的檢測是是為了確確定個體體HIV感染狀況況，包括括臨床檢檢測、自自愿咨詢詢檢測、根據(jù)特特殊需要要進行的的體檢等等。以血液篩篩查為目目的的檢檢測是為為了防止止輸血傳傳播HIV，包括獻獻血員篩篩查和原原料血漿漿篩查。以監(jiān)測

15、為為目的的的檢測是是為了解解不同人人群HIV感染率及及變化趨趨勢，包包括各類類高危人人群、重重點人群群和一般般人群。HIV抗體檢測測的要點點根據(jù)目的的選擇檢檢測方法法及檢測測策略。嚴格遵守守實驗室室標準操操作程序序（SOP）。篩查試驗驗陽性，須做確確證試驗驗。篩查試驗驗陰性，不應(yīng)做做確證試試驗。HIV抗體篩查查試驗流流程樣 品初篩試驗篩查試劑陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)復檢試驗原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑一陰一陽均陰性反應(yīng)均陽性反應(yīng)確證試驗報告陰性篩查試劑劑國家食品品藥品監(jiān)監(jiān)督管理理局注冊冊批準ELISA試劑批批批檢合格格，在有有效期內(nèi)內(nèi)推薦使用用經(jīng)臨床床質(zhì)量評評估

16、敏感感性和特特異性高高的試劑劑初篩試劑劑高高敏感性性復檢試劑劑高高特異性性篩查樣品品血清血漿全血DBS/DPS唾液尿液篩查方法法酶聯(lián)免疫疫吸附實實驗（ELISA）第三代試試劑雙雙抗原原夾心法法 單純純檢測HIV抗體第四代試試劑抗抗原抗抗體聯(lián)合合診斷試試劑同同時檢檢測P24抗原和抗抗HIV-1/2抗體縮縮短窗窗口期注意復檢檢試劑的的選擇化學發(fā)光光或免疫疫熒光試試驗快速檢測測（RT）篩查試驗驗的結(jié)果果報告HIV抗體篩查查試驗陰陰性反應(yīng)應(yīng)報告為為“HIV抗體陰性性”HIV抗體篩查查試驗陽陽性反應(yīng)應(yīng)報告為為“HIV抗體待復復檢”HIV抗體復檢檢試驗兩兩次檢測測均陰性性報告為為“HIV抗體陰性性”HIV

17、抗體復檢檢試驗兩兩次檢測測均陽性性或一陰陰一陽報報告為“HIV抗體待確確證”HIV感染產(chǎn)婦婦所生嬰嬰幼兒嬰兒會由由于被動動攜帶母母親的抗抗體而連連續(xù)幾個個月至十十幾個月月出現(xiàn)抗抗體陽性性。嬰兒滿12個月進行行第一次次HIV抗體檢測測。使用用兩種不不同原理理或不同同廠家篩篩查試劑劑進行抗抗體檢測測，兩種種篩查試試劑檢測測結(jié)果均均為陰性性反應(yīng)，報告HIV抗體陰性性，可排排除感染染。檢測測結(jié)果出出現(xiàn)陽性性反應(yīng)（一種為為陰性反反應(yīng)一種種為陽性性反應(yīng)或或兩種均均陽性反反應(yīng)），不能排排除感染染，應(yīng)繼繼續(xù)追蹤蹤隨訪，至兒童童滿18個月時再再次進行行HIV抗體檢測測。HIV感染產(chǎn)婦婦所生嬰嬰幼兒嬰兒滿18個月

18、時應(yīng)應(yīng)再次進進行HIV抗體檢測測。使用用兩種不不同原理理或不同同廠家篩篩查試劑劑進行抗抗體檢測測。兩種種篩查試試劑的檢檢測結(jié)果果均為陰陰性反應(yīng)應(yīng)，報告告HIV抗體陰性性，可排排除感染染。檢測測出現(xiàn)陽陽性反應(yīng)應(yīng)（一種種為陰性性反應(yīng)一一種為陽陽性反應(yīng)應(yīng)或兩種種均呈陽陽性反應(yīng)應(yīng)），進進一步進進行確證證試驗，根據(jù)確確證試驗驗的結(jié)果果判斷是是否感染染HIV。做好檢測測后咨詢詢。HIV抗體檢測測結(jié)果解解釋HIV抗體陰性性未發(fā)生感感染（排排除“窗窗口期”）HIV抗體不確確定非特異性性的反應(yīng)應(yīng)感染早期期感染晚期期HIV抗體陽性性發(fā)生感染染（排除除疫苗使使用）HIV抗體快速速檢測HIV抗抗體快速速檢測快速檢測測

19、，是艾艾滋病實實驗室多多了一種種檢測方方法快速檢測測，是為為了更多多更快的的發(fā)現(xiàn)感感染者快速檢測測，不是是為了取取代實驗驗室，但但不能因因為有了了實驗室室而放棄棄使用快快速檢測測快速檢測測手段能能否成為為新型檢檢測-咨詢模式式，或基基于醫(yī)療療機構(gòu)的的有效的的檢測方方法-取決于檢檢測的質(zhì)質(zhì)量HIV抗體快速速檢測方方法PA明膠顆粒粒凝集試試驗（PA）：將HIV抗原致敏敏明膠顆顆粒作為為載體，與待檢檢樣品作作用。當當待檢樣樣品含有有HIV抗體時，明膠顆顆粒與抗抗體發(fā)生生凝集反反應(yīng)，根根據(jù)凝集集情況判判讀結(jié)果果。PA試劑有兩兩種:同時檢測測HIV-1和HIV-2抗體以及及分別檢檢測HIV-1和HIV-

20、2抗體。有效試驗驗必須有有陰性和和陽性質(zhì)質(zhì)控。HIV抗體快速速檢測方方法免疫滲濾濾試驗免疫滲濾濾試驗：斑點ELISA和斑點免免疫膠體體金（或或膠體硒硒）快速速試驗。以硝酸纖纖維膜為為載體，HIV抗原點狀狀固定在在膜上，加待檢檢樣品。陽性結(jié)結(jié)果在膜膜上抗原原部位顯顯示出有有色斑點點。反應(yīng)應(yīng)時間在在10分鐘以內(nèi)內(nèi)。有效試驗驗的質(zhì)控控點必須須顯色。HIV抗體快速速檢測方方法免疫層析析試驗免疫層析析試驗：以硝酸酸纖維膜膜為載體體，HIV抗原線狀狀固定在在膜上，待檢樣樣品（血血液或唾唾液）沿沿著固相相載體遷遷移，陽陽性結(jié)果果在膜上上抗原部部位顯示示出有色色條帶。有效試驗驗的質(zhì)控控帶必須須顯色。結(jié)果判讀讀

21、嚴格格參照試試劑說明明書反應(yīng)區(qū)和和質(zhì)控區(qū)區(qū)均出現(xiàn)現(xiàn)紅色條條帶為陽陽性。質(zhì)控區(qū)有有條帶，反應(yīng)區(qū)區(qū)無條帶帶為陰性性。質(zhì)控區(qū)無無條帶則則實驗無無效。HIV抗抗體快速速檢測的的外部質(zhì)質(zhì)控外部對照照質(zhì)控品品，可采采用商用質(zhì)控控品或自自制質(zhì)控控品。質(zhì)控品品應(yīng)包含含抗體陽陽性樣品品和陰性性樣品。自制質(zhì)質(zhì)控品可可使用本本室保留留的陽性性樣品。不能使使用酶聯(lián)聯(lián)試驗的的外部質(zhì)質(zhì)控品。下列情況況需做質(zhì)質(zhì)量控制制：更換換試劑批批號；更更換檢測測人員；更換包包裝；每每個檢測測日；更更換試劑劑廠家。建議：每每個檢測測日檢測測一次陽陽性和陰陰性質(zhì)控控品；如如果日檢檢測量大大于50份樣品，至少應(yīng)應(yīng)作2次質(zhì)控?？焖贆z測測的注意

22、意事項不提倡個個人在家家中檢測測。應(yīng)由由經(jīng)培訓訓的專業(yè)業(yè)人員操操作，注注意生物物安全操操作，避避免職業(yè)業(yè)暴露發(fā)發(fā)生。在質(zhì)控窗窗口內(nèi)應(yīng)應(yīng)出現(xiàn)質(zhì)質(zhì)控帶，如實驗驗完成后后未呈現(xiàn)現(xiàn)質(zhì)控帶帶，說明明試劑盒盒內(nèi)質(zhì)控控無效，該試驗驗結(jié)果無無效，樣樣品須重重檢。出現(xiàn)以下下問題，提示存存在質(zhì)量量隱患，應(yīng)引起起重視：運輸包包裝、內(nèi)內(nèi)盒或試試劑盒的的物理損損傷；在在單包裝裝內(nèi)存在在混雜物物質(zhì)；標標簽出現(xiàn)現(xiàn)錯誤、缺失或或字跡模模糊（特別是是產(chǎn)品名名稱或出出產(chǎn)廠家家名稱，批號和和貨號，失效期期或/和生產(chǎn)日日期）；缺失目目錄；泄泄漏或污污染；不不適宜的的存放條條件；保保護包裝裝紙破損損或污染染。快速檢測測的注意意事項環(huán)境溫度度,尤其是在在冬天血清/血漿全全血稀稀釋釋緩沖液液樣本的量量反應(yīng)的時時間生物安全全廢廢棄物