藥物代謝動力學(xué)實驗講義

1、實驗一藥酶誘導(dǎo)劑及抑制劑對戊巴比妥鈉催眠作用的影響【目的】以戊巴比妥鈉催眠時間作為肝藥酶體內(nèi)活性指標(biāo)，觀察苯巴比妥及氯霉素對戊巴比妥鈉催眠作用的影響，從而了解它們對肝藥酶的誘導(dǎo)及抑制作用?！驹怼勘桨捅韧诪楦嗡幟刚T導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)肝藥酶活性，使戊巴比妥鈉在肝微粒體的氧化代謝加速，藥物濃度降低，表現(xiàn)為戊巴比妥鈉藥理作用減弱，即催眠潛伏期延長，睡眠持續(xù)時間縮短。而氯霉素則為肝藥酶抑制劑，能抑制肝藥酶活性，導(dǎo)致戊巴比妥鈉藥理作用增強(qiáng)，即催眠潛伏期縮短，睡眠持續(xù)時間延長?！緞游铩啃“资?只，1822g【藥品】生理鹽水、0.75%苯巴比妥鈉溶液、0.5%氯霉素溶液、0.5%戊巴比妥鈉溶液【器材】天平、鼠籠、

2、秒表、注射器1mlX4.5號針頭X4【方法與步驟】一、藥酶誘導(dǎo)劑對藥物作用的影響1、取小鼠4只，隨機(jī)分為甲、乙兩組。甲組小鼠腹腔注射0.75%苯巴比妥鈉溶液0.1ml/10g,乙組小鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g，每天1次，共2天。2、于第三天，給各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，觀察給藥后小鼠的反應(yīng)。記錄給藥時間、翻正反射消失和恢復(fù)的時間，計算戊巴比妥鈉催眠潛伏期及睡眠持續(xù)時間。二、藥酶抑制劑對藥物作用的影響1、取小鼠4只，隨機(jī)分為甲、乙兩組。甲組小鼠腹腔注射0.5%氯霉素溶液0.1ml/10g；乙組小鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g。2、30分鐘后，給各小鼠

3、腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，觀察給藥后小鼠的反應(yīng)。記錄給藥時間、翻正反射消失和恢復(fù)的時間，計算戊巴比妥鈉催眠潛伏期及睡眠持續(xù)時間?！窘y(tǒng)計與處理】以全班結(jié)果（睡眠持續(xù)時間，分）作分組t檢驗，檢驗用藥組與對照組有無顯著性差異。（參見“數(shù)理統(tǒng)計在藥理學(xué)實驗中的應(yīng)用”）【注意事項】1、催眠潛伏期為開始給藥到動物翻正反射消失的間隔時間，睡眠持續(xù)時間為翻正反射消失至恢復(fù)的間隔時間。2、本實驗過程中，室溫不宜低于20C，否則戊巴比妥鈉代謝減慢，使動物不易蘇醒。3、氯霉素溶液有結(jié)晶析出時可在水浴中加熱溶解。4、吸取氯霉素溶液的注射器應(yīng)預(yù)先干燥，否則易結(jié)晶堵塞針頭。【思考題】1、何謂肝藥酶

4、誘導(dǎo)劑與抑制劑？2、試從理論上解釋苯巴比妥及氯霉素對戊巴比妥鈉睡眠時間的影響。22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液實驗二家兔血漿中水楊酸鈉濃度測定和藥代動力學(xué)參數(shù)測定實驗?zāi)康摹恳运畻钏徕c為例了解血漿藥物濃度隨時間變化的時量關(guān)系。了解藥代動力學(xué)參數(shù)的臨床意義?！緦嶒灢牧稀?.動物：家兔1只，雌雄不限，體重（2.5+0.5）kg。10ml吸管、注射器（1ml、器材：試管10ml吸管、注射器（1ml、5ml、10ml）、手術(shù)器械、動脈插管、動脈夾、721分光光度計、離心機(jī)3.試劑和藥品：25%氨基甲酸乙酯、10%及0.02%水楊酸鈉溶液、10%三氯醋酸溶液、10

5、%三氯化鐵溶液?！緦嶒灢襟E】實驗準(zhǔn)備：取離心管3支及試管取離心管3支及試管5支，編號備用，麻醉（烏拉坦4ml/Kg),1D3號離心管及4及4、5號試管中分別加入10%三氯醋酸7ml手術(shù)：頸動脈取血2ml,放入1號離心管給藥：耳緣靜脈注入10%水楊酸鈉，150mg/Kg，OOD5,35min分別取血2ml放入2、3號離心管，4、5試管分別加入蒸餾水及0.02%水楊酸鈉2ml）離心：2000r/分，5min，取上清液6ml，加入10%三氯化鐵（12滴），比色（5min后，波長510nm），計算結(jié)果?！咀⒁馐马棥孔⒁忸i總動脈插管術(shù)。凝固，每次取出血第lml棄去不用，再吸取凝固，每次取出血第lml棄去

6、不用，再吸取2ml置于離心管內(nèi)。給藥時間及給藥后取血時間要記清。ml數(shù)，ml數(shù)，5.計算Vd,CL時注意單位換算。【實驗結(jié)果】管號光密度（X）水楊酸鈉濃度（Y）g/100ml標(biāo)準(zhǔn)管（5號）X0.02給藥后5min(2號）X1C1給藥后35min(3號）X2C2計算：1、半衰期（t）:1/2K=y/xC=kx,C=kx(單位：g/100ml)11221/20.301(logCl1/20.301(logCllogC2)/（單位：min)注：k注：k為清除速率常數(shù)，y為0.02g/100ml,X標(biāo)準(zhǔn)管即5號管的光密度值C1,C2分別為給藥后5C1,C2分別為給藥后5、35分鐘取血時的血藥濃度;t為兩

7、次取血的時間差。22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液2、表觀分布容積（Vd）：C=CDlg-i(0.301Dt/t)(單位：g/100ml)0111/2Vd=D/C(單位：L/KgD00注：D為用藥初始劑量（0150mg/Kg注：D為用藥初始劑量（03、清除率（CL）：CL=0.693/tDVd(單位：ml/min.KgD1/2實驗三氨茶堿的血藥濃度測定及藥動學(xué)研究實驗?zāi)康摹空莆昭逯邪辈鑹A血藥濃度的紫外測定法，掌握血清中茶堿提取法，驗證氨茶堿的動力學(xué)模型，掌握二房室動力學(xué)模型的參數(shù)

8、計算方法。用有機(jī)溶劑將血清中的氨茶堿提出，用紫外測定法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測出氨茶堿濃度，用殘差法運(yùn)用計算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、曲線描繪及參數(shù)計算，從而驗證氨茶堿動力學(xué)模型，使大家茶堿的動力學(xué)模型，掌握二房室動力學(xué)模型的參數(shù)計算方法。用有機(jī)溶劑將血清中的氨茶堿提出，用紫外測定法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測出氨茶堿濃度，用殘差法運(yùn)用計算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、曲線描繪及參數(shù)計算，從而驗證氨茶堿動力學(xué)模型，使大家22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液對藥動學(xué)研究有一初步的了解。實驗原理】,可用,可用有機(jī)溶劑從血清中提取出茶堿

9、，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出。測皿2740D298處的吸光度(A274為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸光度，A298為本底的吸光度有機(jī)溶劑從血清中提取出茶堿，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出。測皿2740D298處的吸光度(A274為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸光度，A298為本底的吸光度)，口A=A274-A298。22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液荼堿22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后

10、用肝素封管，避免血液本底2.氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，I隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，2.氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，I隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，達(dá)到平衡后轉(zhuǎn)入消除相。22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液時量曲線呈二房室動力學(xué)模型3.房室模型是抽象的數(shù)學(xué)模型，它的劃分與解剖學(xué)部位或生理學(xué)功能無關(guān)。藥3.房室模型是抽象的數(shù)學(xué)模型，它的劃分與解剖學(xué)部位或生理學(xué)功能無關(guān)。藥29822取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用

11、肝素封管，避免血液物轉(zhuǎn)運(yùn)速率相同或相近的部位可劃分為同一房室。房室模型可以分為一室模型、二室模型、多室模型。大多數(shù)藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)即藥物靜二室模型、多室模型。大多數(shù)藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)即藥物靜22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液脈注射入血后，首先快速進(jìn)入血流量大的組織，如心、肝、腎、肺、腦等，然后緩慢地向血流量小的組織，如脂肪組織、靜止的肌肉組織等轉(zhuǎn)移。實驗材料】1、動物家兔1只，雌雄不限，體重（2.5+0.5）kg2、藥品氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)液3、試劑0.1mol/LHCl0.1mol/LNaOH異

12、丙醇：氯仿抽提液（5:95）。4、儀器754型紫外分光光度計液體渦旋混和器數(shù)學(xué)坐標(biāo)紙一張半對數(shù)坐標(biāo)紙一張?！緦嶒灧椒ā縿游飳嶒灢糠?.1取健康家兔1只，稱重，將家兔置于兔臺。待血管擴(kuò)張后，以左手拇指與食12號針頭自耳靜脈取血1-1.5ml待血管擴(kuò)張后，以左手拇指與食12號針頭自耳靜脈取血1-1.5ml，5、10、20、30、60、120、指壓住靜脈耳根端，使靜脈充盈，給藥前用7號針頭平行刺入靜脈，抽動針管，見有回血即可推注。對其靜脈注射氨茶堿15mg/kg。1.3另一耳用銳利刀片切割取血。分別在給氨茶堿后180、300、420min取血。1.4分離血清，各管均取血清0.5ml于15ml1.4分

13、離血清，各管均取血清0.5ml于15ml試管中，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、抽提液5ml,振搖混合，2500r/min離心10min。血藥濃度測定（紫外分光光度法）血藥濃度測定（紫外分光光度法）2.1吸取下層氯仿液4ml置另一試管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，振搖混2.1吸取下層氯仿液4ml置另一試管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，振搖混勻，2500r/min離心10min。2.2吸取上層堿液，以0.1mol/LNaOH溶液4ml作參比，振搖混勻，2500r/min離心離心10min。測定其皿274和口298處的吸收度（A274測定其皿274和口298處的吸收度

14、（A274和A298),計算A。制作茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5制作茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5支試管，依次加入茶堿標(biāo)準(zhǔn)液各加入0.1mol/LNaOH溶液4ml,終濃度依次為20、40、60、80、100pl，0.5、1.0、1.5、2.0、2.5pg/ml，測定各管的測定各管的A274和A298,計算A。以茶堿濃度為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)描點22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程，即為茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線方程（圖示）4.將測得血清樣品的A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，求得相應(yīng)的C,CD10繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程，即為茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線方程（

15、圖示）4.將測得血清樣品的A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，求得相應(yīng)的C,CD10即為茶堿的血藥濃度。以時間為橫坐標(biāo)，濃度對數(shù)為縱坐標(biāo)，用CAPP軟件描點做圖，判斷氨茶堿在體內(nèi)代謝的房室模型。注意事項】紫外分光光度計使用前需預(yù)熱30min并激發(fā)氫燈。振搖混勻藥液時防止濺出并準(zhǔn)確加樣。樣品離心前需配平。測量時若更換波長，必須重新調(diào)節(jié)0和100?！居懻摗堪辈鑹A的時量曲線呈幾房室模型？為什么？為何要測兩個波長下茶堿的吸光度并取其差值？3.試述藥動學(xué)參數(shù)VI、Vd、t1/2a、tl/2口、K10、K12、K21、Cl、AUC的含義。3.試述藥動學(xué)參數(shù)22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管

16、，避免血液實驗四體液對水楊酸鈉排泄的影響實驗?zāi)康摹?2取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液1學(xué)習(xí)尿液中水楊酸的檢測方法，意義。掌握體液pH對藥物排泄的影響及其臨床22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液2熟悉大鼠代謝籠的使用，鞏固大鼠的各種給藥方法。實驗原理】22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取

17、血后用肝素封管，避免血液水楊酸鈉經(jīng)腎臟排泄物為水楊酸，尿液液呈酸性時僅排泄5%而尿液呈堿性時則排泄大約尿液中的水楊酸遇到三氯化鐵后可生成紫色絡(luò)合物，pH對水楊酸排泄影響非常大，當(dāng)尿85%。根據(jù)反應(yīng)后溶液紫色深22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液淺可以定性分析水楊酸鈉排泄量的多少。實驗材料】叩動物大白鼠，雌雄不限，200口300g。2器材大白鼠代謝籠兩個，天平一個，棉手套一只，大鼠灌胃器兩個，毫升注射器兩個，6號針頭兩個，30ml量筒1個,50ml注射器2個。毫升注射器兩個，6號針頭兩

18、個，30ml量筒1個,50ml注射器2個。3藥品5%碳酸氫鈉溶液，15%氯化氨溶液，（單盲法配制并編號為A、B），2%水楊酸鈉溶液，1%三氯化鐵溶液，5%葡萄糖生理鹽水，蒸餾水，苦味酸，1%速尿?！緦嶒灧椒ā?取大白鼠兩只稱重并編號。2口給其中一只按0.5ml/100g灌胃A藥液，給另一只以同樣劑量灌胃B藥液。330分鐘后給兩只大鼠灌胃5%葡萄糖生理鹽水2ml/100g。430分鐘后，分別給兩只大鼠腹腔注射2%水楊酸鈉溶液lml/100g及1%速尿0.2ml/100g。5收集各鼠30分鐘尿液，將收集的尿液分別用蒸餾水稀釋到30ml，加1%三氯化鐵5ml，比較紫色深淺。實驗結(jié)果】表21體液pH值

19、對水楊酸鈉排泄的影響鼠號體重（g）藥物尿液反應(yīng)后顏色結(jié)果分析1A2B注意事項】1實驗步驟進(jìn)行到4后，再將集尿籠插入代謝籠中，以免收集尿液前將集尿籠污染。2叮驗用燒杯、量筒、注射器、集尿籠應(yīng)清洗干凈，否則影響反應(yīng)pH,導(dǎo)致實驗結(jié)果不準(zhǔn)確?！舅伎碱}】藥物的排泄途徑有哪些？影響藥物排泄的因素有哪些？體液pH還對藥物的哪些體內(nèi)過程有影響？有何臨床意義？實驗中給予碳酸氫鈉、氯化氨、葡萄糖生理鹽水、速尿等藥物的目的各是什么？根據(jù)反應(yīng)后溶液紫色深淺為什么可以定性分析水楊酸鈉排泄量的多少？寫出水楊酸與三氯化鐵的反應(yīng)式。22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液實驗五酚磺酞藥代動

20、力學(xué)參數(shù)的測定【實驗?zāi)康摹繙y定PSP在家兔體內(nèi)藥代動力學(xué)參數(shù)。【實驗原理】酚磺酞（PhenolsulfonphthaleinPSPQ,又名酚紅。靜脈注射后，不在體內(nèi)代謝，主要經(jīng)腎近曲小管分泌排泄，屬于一室模型一級動力學(xué)消除。PSP在堿性環(huán)境中變?yōu)榧t色，可用可見分光光度計于波長560nm處進(jìn)行定量測定?！緦嶒灢牧稀?、動物22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時，要先用0.1%肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液家兔1只，2.5家兔1只，2.5口3.0kg,雌雄不限2、藥品0.6%PSP溶液、PSP標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.5、釋液（0.9%NaCl2

21、9ml+1mol/LNaOH3、器材兔臺、手術(shù)剪刀D2、止血鉗D2、眼科鑷子D1）、抗凝試管D5、試管架、離心機(jī)、分光光度計、比色杯（器（1mlD1,250口叩1）、燒杯、酒精棉球、干棉球、繩口置于備好的抗凝試管內(nèi),離心（2000轉(zhuǎn)/分）3、PSP標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸收系數(shù)K的測定：取PSP標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1、2Dmol/L及蒸餾水各0.05ml,于波長560nm處比色，測得吸收度（值?！緦嶒灢襟E】1、家兔稱重,用3戊巴比妥（1板上,切開頸部皮膚,暴露頸淺靜脈,從其下緣穿一線,備取血時用。2、用1ml干燥注射器從頸淺靜脈取血約PSP溶液，按0.4ml/kg給藥，注射后分別在1、2Dmol/L）、3%戊巴比妥溶液、稀1ml）2、注射器（5mlD1、2mlD0.5mlD5）、加液4、線ml/kg）耳緣靜脈麻醉，仰臥，固定于兔TOC o