微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證

1、關(guān)于微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證第1頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三重點(diǎn)議題一、法規(guī)要求二、驗(yàn)證目的三、檢驗(yàn)概述四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證五、控制菌檢查方法驗(yàn)證六、無菌檢查方法驗(yàn)證第2頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三一、法規(guī)要求第二百二十六條 試劑、試液、培養(yǎng)基和檢定菌的管理應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：（一） 試劑和培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)從可靠的供應(yīng)商處采購，必要時(shí)應(yīng)當(dāng)對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行評(píng)估；（二） 應(yīng)當(dāng)有接收試劑、試液、培養(yǎng)基的記錄，必要時(shí)，應(yīng)當(dāng)在試劑、試液、 培養(yǎng)基的容器上標(biāo)注接收日期；（三）應(yīng)當(dāng)按照相關(guān)規(guī)定或使用說明配制、貯存和使用試劑、試液和培養(yǎng)基。 特殊情況下，在接收或使

2、用前，還應(yīng)當(dāng)對(duì)試劑進(jìn)行鑒別或其他檢驗(yàn)；（四）試液和已配制的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)標(biāo)注配制批號(hào)、配制日期和配制人員姓名，并有配制（包括滅菌）記錄。不穩(wěn)定的試劑、試液和培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)標(biāo)注有效期及特殊貯存條件。標(biāo)準(zhǔn)液、滴定液還應(yīng)當(dāng)標(biāo)注最后一次標(biāo)化的日期和校正因子，并有標(biāo)化記錄；第3頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三一、法規(guī)要求第二百二十六條 （續(xù)）（五）配制的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)進(jìn)行適用性檢查，并有相關(guān)記錄。應(yīng)當(dāng)有培養(yǎng)基使用記錄；（六）應(yīng)當(dāng)有檢驗(yàn)所需的各種檢定菌，并建立檢定菌保存、傳代、使用、銷毀的操作規(guī)程和相應(yīng)記錄；（七） 檢定菌應(yīng)當(dāng)有適當(dāng)?shù)臉?biāo)識(shí)，內(nèi)容至少包括菌種名稱、編號(hào)、代次、傳代 日期、傳代操作

3、人；（八）檢定菌應(yīng)當(dāng)按照規(guī)定的條件貯存，貯存的方式和時(shí)間不應(yīng)當(dāng)對(duì)檢定菌的 生長特性有不利影響。第4頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三二、驗(yàn)證目的為了使微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，需要對(duì)每個(gè)品種的具體檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證。第5頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三三、驗(yàn)證概述微生物學(xué)檢驗(yàn)方法包括：1.微生物限度檢查2.無菌檢查3.防腐劑抑菌效力測(cè)定總菌落數(shù)檢查（回收率）控制菌檢查（專屬性）第6頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三三、驗(yàn)證概述微生物學(xué)檢驗(yàn)的影響因素：1.藥品本身的抑菌性2.藥品中防腐劑的抑菌性3.培養(yǎng)基的促菌生長能力4.培

4、養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）5.過濾系統(tǒng)的材質(zhì)第7頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三三、驗(yàn)證概述消除抑菌性的方法:一、化學(xué)中和法 用化學(xué)中和劑中和抑菌劑，消除抑菌作用。二、稀釋法 降低抑菌劑的濃度以消除抑菌性。三、薄膜過濾法 抑菌性產(chǎn)品通過濾膜時(shí)，微生物被截留在膜上，檢品被過濾掉。 微生物檢查法準(zhǔn)確與否的核心是對(duì)抑菌性的有效消除第8頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證環(huán)境條件：C級(jí)下的局部A級(jí)的單向流空氣區(qū)域培養(yǎng)基種類：細(xì)菌計(jì)數(shù) 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基霉菌和酵母菌計(jì)數(shù) 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基酵母菌計(jì)數(shù) 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基第9頁

5、，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證培養(yǎng)基適用性檢查 被檢培養(yǎng)基 培養(yǎng)結(jié)果 試驗(yàn)菌 試驗(yàn)菌 被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不得小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70% 菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致50100cfu50100cfu適宜培養(yǎng)條件. . . . . . . . . .第10頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證對(duì)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，分別計(jì)算各組回收率。（1）試驗(yàn)組 平皿法計(jì)數(shù) 薄膜過濾法計(jì)數(shù) 最低稀釋級(jí)供試液1ml + 2個(gè)瓊脂培養(yǎng)基平皿 試驗(yàn)菌50100

6、cfu取規(guī)定量的最低稀釋級(jí)供試液，過濾，沖洗，在最后一次沖洗液中加試驗(yàn)菌50100cfu，過濾。第11頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證（2）菌液組 直接接種試驗(yàn)菌（3）供試品對(duì)照組 取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。（4）稀釋劑對(duì)照組 用相應(yīng)的稀釋劑代替供試品，加入試驗(yàn)菌。（若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時(shí)，需增加稀釋劑對(duì)照組。）第12頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三四、總菌落數(shù)檢查方法驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)：在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌數(shù)回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液

7、組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%。試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率均不低于70%第13頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三五、控制菌檢查方法驗(yàn)證環(huán)境條件：C級(jí)下的局部A級(jí)的單向流空氣區(qū)域培養(yǎng)基和培養(yǎng)基試驗(yàn)：無菌性促生長能力在最短時(shí)間內(nèi)觀察到明顯生長抑制能力在培養(yǎng)的最長時(shí)間內(nèi)不能觀察到微生物的生長指示能力在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)必須和以前檢驗(yàn)過并已接受的培養(yǎng)基在外觀和指示反應(yīng)都具備可比性。第14頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三五、控制菌檢查方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證：按照各品種項(xiàng)下規(guī)定檢查的控制菌選擇驗(yàn)證菌株。規(guī)定量供試液+10100cfu試驗(yàn)菌+增菌培養(yǎng)基合格標(biāo)準(zhǔn)：檢出試驗(yàn)菌第15頁，共17頁，2022年，5月20日，15點(diǎn)1分，星期三六、無菌檢查方法驗(yàn)證環(huán)境條件：B級(jí)