羅氏試劑盒說(shuō)明書 AFP04481801001V6

1、044818010001V6甲胎蛋白（1-fetoprotein，AFP） 2008-04, V 6 中文 5/5 Elecsys 和 cobas e 分析儀11776258 122 100測(cè)試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601注意：AFP的檢測(cè)結(jié)果與檢測(cè)方法密切相關(guān)。因此實(shí)驗(yàn)室結(jié)果報(bào)告應(yīng)注明檢測(cè)方法。不同檢測(cè)方法間的結(jié)果不能直接比較，以免引起臨床解釋的錯(cuò)誤。在療效觀察過(guò)程中，如果檢測(cè)方法變動(dòng)，必須使用原檢測(cè)方法同時(shí)平行測(cè)定。主要用途用于體外定量檢測(cè)人體血清或血漿中的AFP

2、。臨床可應(yīng)用于. 非精原胚胎細(xì)胞腫瘤的輔助診療。. 評(píng)價(jià)唐氏綜合癥危險(xiǎn)性的指標(biāo)之一。Elecsys和cobas e 免疫分析儀的工作原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA”。概述：1-甲胎蛋白是來(lái)源于卵黃囊、未分化肝細(xì)胞和胎兒胃腸道的一種分子量為70000d的糖基化白蛋白1，2。7095%的原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)的AFP水平會(huì)升高3。非精原胚胎細(xì)胞腫瘤晚期的患者AFP水平會(huì)明顯增高。人絨毛膜促性腺激素（hCG）和AFP是評(píng)估非精原胚胎細(xì)胞腫瘤患者生存率的重要指標(biāo)。4，5，6沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道AFP水平與腫瘤的大小，惡性程度和分期有相關(guān)。高水平的AFP升高主要見(jiàn)于原發(fā)性肝細(xì)胞癌，轉(zhuǎn)移性肝癌的AFP水平一般低

3、于350-400IU/Ml。7酒精性肝硬化，急性病毒性肝炎以及HBsAg攜帶者在肝臟組織代償性再生時(shí)AFP水平會(huì)出現(xiàn)輕度升高。7，8不建議健康人群的腫瘤篩查檢測(cè)AFP。妊娠母親血清和羊水中AFP水平的升高可提示胎兒脊柱裂,無(wú)腦畸形,（先天性）食管閉鎖或多胎。9，10，11，12結(jié)合孕婦的年齡、體重以及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)（人絨毛膜促性腺激素，未結(jié)合雌三醇和AFP）可作為唐氏綜合癥的診斷模式。唐氏綜合癥的妊娠孕婦的血清人絨毛膜促性腺激素濃度可2倍高于正常水平，同時(shí)AFP和未結(jié)合雌三醇濃度會(huì)降低。通過(guò)Wald14建立的計(jì)算規(guī)則和各自的特異性分析參數(shù)可對(duì)3個(gè)月左右的胎兒發(fā)生唐氏綜合癥的風(fēng)險(xiǎn)作出評(píng)估。13，14

4、，15，16，17，18，19檢測(cè)原理雙抗體夾心法，總檢測(cè)時(shí)間：18分鐘第一次孵育：10l標(biāo)本、生物素化的AFP單克隆特異性抗體和釕（Ru）a標(biāo)記的AFP特異性單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗體夾心復(fù)合物。第二次孵育：添加包被鏈霉素的磁珠微粒進(jìn)行孵育，復(fù)合體與磁珠通過(guò)生物素和鏈霉素的作用結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過(guò)電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過(guò)光電倍增器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度。儀器自動(dòng)通過(guò)2點(diǎn)校正的定標(biāo)曲線計(jì)算得到檢測(cè)結(jié)果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (R

5、u(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M包被鏈霉素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素化的抗AFP單克隆抗體（灰蓋），每瓶，10ml；生物素化的抗AFP抗體（鼠）濃度4.5mg/L，磷酸緩沖液100mmol/L，pH 6.0。防腐劑。R2 Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗AFP單克隆抗體（黑蓋），每瓶，10ml，釕標(biāo)記的抗AFP單抗（鼠）濃度12.0mg/L，磷酸緩沖液100mmol/l，pH6.0。防腐劑。警告和注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時(shí)必需遵循所有試驗(yàn)室試劑操作的注意事項(xiàng)。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專業(yè)人員可

6、要求獲得安全數(shù)據(jù)報(bào)告。避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒（M,R1和R2）為即用型，不能分開(kāi)使用。試劑相關(guān)信息可以通過(guò)試劑條形碼閱讀獲取。儲(chǔ)存及穩(wěn)定性存放于28。請(qǐng)垂直擺放Elecsys CA 72-4試劑盒，確保儀器的自動(dòng)攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開(kāi)封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開(kāi)封試劑，2812周放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上8周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上8周放置分析儀Elecsys 1010上4周（試劑交替放置于冰箱和20-25的分析儀中，持續(xù)開(kāi)蓋的情況下至多2

7、0小時(shí)）樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下羅列的樣本類型通過(guò)檢測(cè)要求。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰、肝素鈉、K3-EDTA和枸櫞酸抗凝的血漿都適用。使用枸櫞酸抗凝血漿檢測(cè)結(jié)果需+10糾正。標(biāo)準(zhǔn)：回收率90-110%，斜率0.9-1.1，截距0.95。穩(wěn)定性： 2-8可保存7天；-20可保存3個(gè)月。20使用血漿標(biāo)本評(píng)估唐氏綜合癥的適宜性未知。選擇合適的試管進(jìn)行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測(cè)（樣本前處理系統(tǒng)）時(shí)，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的樣本檢測(cè)前必須先作離心處理。避免使用

8、熱滅活的樣本。添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品均不能使用。檢測(cè)前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平衡(20-25)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測(cè)必須2小時(shí)內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”17章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號(hào)04487761, AFP CalSet II, 規(guī)格4 x1 ml貨號(hào)11776452, PreciControl Tumor Marker，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl Tumor Marker 1和2或者 貨號(hào)11731416, PreciControl Universal，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl

9、 Universal 1和2貨號(hào)11732277，Diluent Universal，2*16 ml 樣本稀釋液，或者貨號(hào)03183971. Diluent Universal，2*36 ml樣本稀釋液實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 1010/2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 1010/2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號(hào)11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,測(cè)量池洗液 貨號(hào)11930346, Elecsys SysWa

10、sh, 1 x 500 mL 附加洗液貨號(hào)11933159, SysClean 適配器 貨號(hào)11706829, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32反應(yīng)管或者貨號(hào)11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反應(yīng)管貨號(hào)11706799, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號(hào)04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)04880293, CleanCell M, 2 x 2 L測(cè)量池洗液 貨號(hào)03023141, PC/

11、CC杯, 12個(gè)用于在檢測(cè)前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號(hào)03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測(cè)完畢后或更換試劑時(shí)清洗試劑針。貨號(hào)12102137,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝84反應(yīng)杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號(hào)03023150, WasteLiner,廢物袋 貨號(hào)03027651,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號(hào)11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測(cè)要優(yōu)化檢測(cè)性能，請(qǐng)遵照本說(shuō)明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊(cè)。試劑使用前分析儀自動(dòng)攪拌磁珠微粒，使其處

12、于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過(guò)條形碼自動(dòng)讀取，在特殊情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取條碼信息時(shí)，請(qǐng)輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動(dòng)調(diào)節(jié)試劑溫度和開(kāi)、關(guān)各試劑盒瓶蓋。Elecsys 1010 分析儀: 將冷藏試劑室溫平衡至20-25C左右，放置分析儀的試劑盤（20- 25C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。使用前后手動(dòng)開(kāi)關(guān)試劑盒瓶蓋。使用后保存于2-8C冰箱。定標(biāo)溯源性：該檢測(cè)方法可溯源至IRP WHO參考標(biāo)準(zhǔn) 72/225。每套Ele

13、csys AFP試劑的條碼標(biāo)簽上均含有其批特異的定標(biāo)信息。使用Elecsys AFP定標(biāo)液可調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：新批號(hào)試劑必須進(jìn)行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過(guò)24小時(shí)）。以下情況建議重新進(jìn)行定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號(hào)試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）Elecsys 1010 分析儀:每盒試劑7天后（室溫 20-25C）3天后（室溫 25-32C）所有儀器根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl Tumor Marker1和2，Elec

14、sys PreciControl Universal 1和2進(jìn)行質(zhì)量控制。其他合適的質(zhì)控品也適用。各濃度質(zhì)控至少每24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個(gè)試驗(yàn)室必須采取相應(yīng)的糾正措施。請(qǐng)遵循政府法規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制計(jì)算儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算每個(gè)樣本中的分析物濃度，單位是IU/mL，ng/mL，Modular E170和cobas e 601分析儀還可報(bào)告kIU/L或IU/L單位。轉(zhuǎn)換因子：IU/mL1.21ng/mLng/mL0.83IU/mL干擾因素檢測(cè)結(jié)果不受黃疸（膽紅素1112

15、mol/L或65 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白1.4mmol/L或 2.2g/dL）, 脂血(脂肪乳劑 1500mg/dL)和生物素60ng/mL或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集樣本。檢測(cè)結(jié)果不受類風(fēng)濕因子影響（RF1500 IU/ml）。AFP檢測(cè)不受hook效應(yīng)影響（AFP濃度1,000,000 IU/mL或1,210,000 ng/mL）體外對(duì)26種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。少數(shù)病例中高濃度的釕抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。通過(guò)適宜性的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可將影響因素降到最低。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來(lái)綜合評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)范圍0.500-1000

16、 IU/mL或0.605-1210 ng/mL（通過(guò)最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報(bào)告0.500 IU/mL或1000 IU/mL或1210 ng/mL 。(1:50稀釋結(jié)果可報(bào)告至50000 IU/mL或60500 ng/mL)稀釋高于檢測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）稀釋。建議1:50稀釋（MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 1010/2010 和cobas e 分析儀可以自動(dòng)稀釋，也可以手工稀釋）。稀釋的標(biāo)本AFP濃度必須高于20 IU/ml(24 ng/mL)。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘稀釋

17、倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋，機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。期望值Elecsys AFP參考范圍建立的數(shù)據(jù)來(lái)源于以下研究數(shù)據(jù)。a)1997年9月“Elecsys 2010 analyzer”德國(guó)和法國(guó)多中心研究，數(shù)據(jù)評(píng)估于1998年。648例健康個(gè)體的血清AFP檢測(cè)結(jié)果955.8IU/mL或7.0 ng/Ml。妊娠孕周（自最后一次月經(jīng)開(kāi)始計(jì)算妊娠周期）和AFP檢測(cè)均值如下表 b)唐氏綜合癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估參考值建立的多中心研究（研究號(hào)：BO1P019，2003年3月）。評(píng)估1753例妊娠孕婦（孕周14-18周）的血清AFP的檢測(cè)結(jié)果。 比利時(shí)、法國(guó)和德國(guó)5家臨床中心聯(lián)合檢測(cè)Elecsys AFP和Elecsys H

18、CG+。妊娠期通過(guò)超聲確定。1753例AFP檢測(cè)值與妊娠孕周的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)log-線性回歸分析結(jié)果如下表：注意：當(dāng)方法學(xué)變換時(shí)產(chǎn)前檢查的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考值建議重新評(píng)估（13年）。血漿檢測(cè)的參考值適用性未經(jīng)證實(shí)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定參考范圍的適用性，必要時(shí)建立本實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。特殊的性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下。各實(shí)驗(yàn)室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會(huì)稍有差異。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質(zhì)控品驗(yàn)證重復(fù)性，按照NCCLS的EP5-A執(zhí)行：每天6次，共10天 (n=60)。批內(nèi)精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析儀完成，n=21下面是

19、獲得的結(jié)果。分析靈敏度（最低檢出限）0.50 IU/mL(0.61ng/mL)最低檢出限指區(qū)別于零濃度的分析物最低檢測(cè)濃度。最低檢出限是最低濃度標(biāo)準(zhǔn)品+2SD得到的濃度（廠商定標(biāo)品1+2SD，批內(nèi)精密度，n=21）。方法學(xué)比較使用臨床標(biāo)本比較Elecsys AFP 檢測(cè)（y） 和AFP酶免疫檢測(cè)（x），相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標(biāo)本數(shù)n=77Passing/Bablok18 線性回歸y = 0.92x - 1.51 y = 0.90 x +0.35T = 0.975 r = 0.954樣品比較的濃度范圍約為2500 IU/mL(2.4600ng/mL)。參考文獻(xiàn)1. Taketa K. Alpha-Fe

20、toprotein in the 1990s. In: Sell SS. Serological cancer markers. Humana Press 1992;31-46, ISBN: 0-89603-209-4.2. Ruoslathi E, Engvall E, Kessler MJ. Chemical Properties of Alpha-Fetoprotein. In: Herberman RB, McIntire KR (eds). Immunodiagnosis of Cancer. New York: Marcel Dekker Inc 1979:101-117.3. R

21、amsey WH, Wu GY. Hepatocellular carcinoma: update on diagnosis and treatment. Dig-Dis 1995;13,2:81-91.4. Sato Y, et al. Early recognition of hepatocellular carcinoma based on alteredprofiles of alpha-fetoprotein. New Engl J Med 1993;328,25:1802-1806.5. Klepp O. Serum tumor markers in testicular and

22、extragonadal germ cell malignancies. Scand J Clin Lab Invest Suppl 1991;206:28-41.6. Sturgeon C. Practice Guidelines for Tumor Marker Use in the Clinic. Clin Chem 2002;48(8):1151-1159.7. Fateh-Moghadam A, Stieber P. Sensible use of tumor markers. Boehringer Mannheim 1994; Cat. No. 1536869.8. Stuart

23、KE, Anand AJ, Jenkins RL. Hepatocellular Carcinoma in the United States. Cancer 1996;77,11:2217-2222.9. Brewer JA, Tank ES. Yolk sac tumors and alpha-fetoprotein in first year of life. Urology 1993;42,1:79-80.10. Wald NJ, et al. Antenatal maternal serum screening for Downs syndrome: results of a dem

24、onstration project. BMJ 1992;305:391-394.11. Canick JA, Saller DN Jr. Maternal serum screening for aneuploidy and open fetal defects. Obstet Gynecol Clin North Am 1993;20,3:443-454.12. Bendon RW. The anatomic basis of maternal serum screening. Ann Clin Lab Sci 1991;(21)1:36-39.13. Schlebusch H. Pren

25、atal screening for Downs syndrome. In: Thomas L (ed.). Clinical Laboratory Diagnosis, TH-Books, Frankfurt, 1st English edition 1998:1124-1125, deutsche Auflage 1998:1149-1150.14. Cuckle HS, Wald NJ, Thompson SG. Estimating a womans risk of having a pregnancy associated with Downalpha-fetoprotein lev

26、el. Br J Obstet Gynaecol 1987;94:387-402.15. Reynolds TM, Penney MD. The mathematical basis of multivariate risk screening: with special reference to screening for Downs syndrome associated pregnancy. Ann Clin Biochem 1989;26:452-458.16. Cuckle HS, Wald NJ, Nanchahal K, Densem J. Repeat maternalDowns syndrome. Br J Obstet Gynaecol 1989;96:52-60.17. Dunstan FDJ, Gray JC, Nix ABJ, Reynolds T. Detection rates and false positive rates for Downs Syndrome screening: How precisely can they be Estimated and what factors influence their valu