羅氏試劑盒說(shuō)明書(shū) Vitamin B12 04761707001-en-t

1、維生素B12檢測(cè)試劑盒Vitamin B1204761707001V4維生素B12檢測(cè)試劑盒Vitamin B12 Elecsys 和 cobas e 分析儀 4/52010-01, V 7 中文2007-08，V4中文 5/5 Elecsys 和 cobas e 分析儀04745736 190 100測(cè)試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601中文主要用途體外定量檢測(cè)人血清或血漿中維生素B12含量。電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法，適用于羅氏Elecsys和cobas e免疫測(cè)定分析儀。臨床應(yīng)用營(yíng)養(yǎng)性貧血和巨紅細(xì)

2、胞性貧血可由維生素B12不足引起。飲食中缺乏肉類(lèi)和細(xì)菌性產(chǎn)物、酒精中毒、對(duì)消化和吸收系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)/功能的損害（導(dǎo)致惡性貧血）都可導(dǎo)致該元素的缺乏。由胰腺功能缺陷、胃萎縮或胃切除術(shù)后腸道破壞、小腸維生素B12結(jié)合蛋白（內(nèi)因子）的缺乏、直接對(duì)抗內(nèi)因子的自身抗體的形成以及相關(guān)病因所引起的吸收不良是導(dǎo)致這種元素缺乏的主要原因。1該維生素是正常代謝、DNA合成和紅細(xì)胞再生所必須。如果任其發(fā)展將導(dǎo)致巨幼紅細(xì)胞性貧血，維生素B12的缺乏還將導(dǎo)致不可逆的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害。維生素B12或葉酸是診斷維生素B12或葉酸缺乏的重要指標(biāo)，在鑒別診斷巨幼紅細(xì)胞性貧血時(shí)尤為重要。在1961年首次報(bào)道用放射分析法測(cè)定維生素B

3、12。3，4這些方法均利用了57鈷放射示蹤物標(biāo)記的維生素B12和結(jié)合維生素B12的內(nèi)因子。多種市售測(cè)定法的差異在于游離/結(jié)合分離技術(shù)和樣本預(yù)處理的不同。由于存在內(nèi)源性血清維生素B12結(jié)合蛋白（包含R蛋白的鈷胺素傳遞蛋白）和直接對(duì)抗內(nèi)因子的免疫球蛋白，需要在堿性pH條件下煮沸或處理樣本從而釋放維生素B12并破壞結(jié)合蛋白。70年代末，使用血清結(jié)合蛋白或部分純化的內(nèi)因子的放射分析法檢測(cè)的維生素B12的水平高于那些采用微生物方法的檢測(cè)結(jié)果。這是由于測(cè)定法中含有血清結(jié)合蛋白或R蛋白。R蛋白的特異度明顯弱于內(nèi)因子，除了檢測(cè)維生素B12本身，還檢測(cè)了維生素B12類(lèi)似物。5，6，7，8自此推薦在該領(lǐng)域使用高純

4、度的內(nèi)因子。Elecsys維生素B12測(cè)定法采用競(jìng)爭(zhēng)法試驗(yàn)原理，使用維生素B12特異性內(nèi)因子。樣本中的維生素B12與加入的生物素標(biāo)記的維生素B12競(jìng)爭(zhēng)釕（Ru）a標(biāo)記的內(nèi)因子復(fù)合物的結(jié)合位點(diǎn)。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕檢測(cè)原理競(jìng)爭(zhēng)法原理，總檢測(cè)時(shí)間：27分鐘第一次孵育：通過(guò)維生素B12預(yù)處理1和2與15L樣本一起孵育，釋放結(jié)合的維生素B12。第二次孵育：通過(guò)將預(yù)處理的樣本和釕標(biāo)記的內(nèi)因子一起孵育，形成一種維生素B12結(jié)合蛋白復(fù)合物，該復(fù)合物的量取決于樣本中分析物的濃度。第三次孵育：添加包被鏈霉親和素的磁珠微粒

5、和生物素標(biāo)記的維生素B12后，釕標(biāo)記的內(nèi)因子的空白位點(diǎn)被占據(jù)，形成一種釕標(biāo)記的內(nèi)因子維生素B12生物素復(fù)合物。該復(fù)合物通過(guò)生物素和鏈霉素之間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過(guò)電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過(guò)光電倍增器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度。儀器通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)校正試劑條形碼包含的廠商定標(biāo)曲線，自動(dòng)計(jì)算得到檢測(cè)結(jié)果。試劑工作溶液PT1 預(yù)處理試劑1（白蓋），1瓶，4mL；二硫蘇糖醇1.028g/L；穩(wěn)定劑，pH5.5。PT1 預(yù)處理試劑2（灰蓋），1瓶，4mL；氫氧化鈉40g/L；氰化鈉2.205g/L。M包被

6、鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml；包被鏈霉親和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 Ru(bpy)32+標(biāo)記的內(nèi)因子（灰蓋），1瓶，10mL；釕標(biāo)記的豬內(nèi)因子4g/L；雙氰鈷胺15g/L；穩(wěn)定劑；人血清白蛋白；磷酸鹽緩沖液，pH 5.5；防腐劑。R2 生物素標(biāo)記的維生素B12（黑蓋），1瓶，8.5mL；生物素化維生素B12，25g/L；生物素3g/L；磷酸鹽緩沖液，pH 7.0；防腐劑。警告和注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時(shí)必需遵循所有試驗(yàn)室試劑操作的注意事項(xiàng)。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專(zhuān)業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報(bào)告。試劑盒所含組分按歐洲指令88/

7、379/EEC分類(lèi)如下：PT2：C/腐蝕性，R34、S26、S37/39（氫氧化鈉）導(dǎo)致灼傷。如果接觸眼睛，請(qǐng)立即用大量清水沖洗并就醫(yī)。穿戴防護(hù)手套和眼罩/面罩。PT2：Xn/有害物品，R20/21/22、S45（氰化鈉）吸入、接觸皮膚和吞入均有害。如果發(fā)生意外或者如果您感到不適，請(qǐng)立即就醫(yī)（在合適的地方顯示此標(biāo)簽）。聯(lián)系電話：針對(duì)所有國(guó)家：496217590，針對(duì)美國(guó)有人源性材料應(yīng)被視為具有潛在感染性。所有人血衍生物均采用獻(xiàn)血者血液制備，所有個(gè)體都經(jīng)過(guò)測(cè)試并且HbsAg、抗HIV和抗HCV陰性。所用的測(cè)試方法均通過(guò)FDA的審核，或符合歐洲指令98/79/EC附錄，列

8、表A。但是，任何檢測(cè)方法都不能絕對(duì)地排除潛在感染的危險(xiǎn)，因此應(yīng)該按照檢測(cè)病人標(biāo)本的處理要求一樣使用本產(chǎn)品。一旦發(fā)生暴露，應(yīng)遵循醫(yī)療機(jī)構(gòu)的指示。9、10避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒為即用型，不能分開(kāi)使用。試劑相關(guān)信息可以通過(guò)試劑條形碼閱讀獲取。儲(chǔ)存及穩(wěn)定性存放于28請(qǐng)垂直擺放Elecsys維生素B12試劑盒（M、R1、R2），確保使用前儀器通過(guò)自動(dòng)攪拌能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開(kāi)封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開(kāi)封試劑，2812周放置分析儀Elecsys 2010和cobas e4115周放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170和cobas e

9、601上5周樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下羅列的樣本類(lèi)型通過(guò)檢測(cè)要求。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鈉、K3-EDTA抗凝的血漿適用。使用枸櫞酸鈉、氟化鈉和草酸鉀抗凝時(shí)，檢測(cè)結(jié)果比血清值低23。標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性樣本的平均回收率在血清值的90-110%以內(nèi)或斜率0.9-1.1截距0.95。穩(wěn)定性：2-8保存2天，-20保存2樣本可冰凍1次。避光保存。用分離管收集的血清的穩(wěn)定性：2-8選擇合適的試管進(jìn)行不同類(lèi)型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測(cè)（樣本前處理系統(tǒng)）時(shí)，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的

10、樣本檢測(cè)前必須先作離心處理。請(qǐng)勿使用熱滅活樣本。請(qǐng)勿使用添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品。應(yīng)檢測(cè)來(lái)自空腹病人的血清或血漿樣本的維生素B12。注意：總蛋白濃度極高的樣本（例如病人患有巨球蛋白血癥）可能在分析杯中形成蛋白膠而不適用于本測(cè)定法。處理蛋白膠可能導(dǎo)致運(yùn)行中斷。臨界蛋白濃度取決于個(gè)體樣本的組成。樣本（添加人IgG或人血清白蛋白）中總體蛋白濃度160g/L時(shí)可觀察到蛋白膠形成。檢測(cè)前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平衡(20-25由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測(cè)必須2小時(shí)內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號(hào)04572459，維生素B12 Cal

11、Set II，規(guī)格41貨號(hào)04415299，PreciControl貧血，PreciControl貧血1、2和3的規(guī)格分別為22mL貨號(hào)11732277，Diluent Universal，216ml樣本稀釋液，或者貨號(hào)03183971，Diluent Universal，236ml樣本稀釋液實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 2010、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號(hào)11662988，ProCell，6380 mL，系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)11662970，CleanCell，6380mL，測(cè)量池洗液 貨號(hào)

12、11930346，Elecsys SysWash，1500mL，附加洗液貨號(hào)11933159，SysClean適配器貨號(hào)11706802，Elecsys 2010分析杯，6060反應(yīng)管貨號(hào)11706799，Elecsys 2010分析吸頭，30120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號(hào)04880340，ProCell M，22L系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)04880293，CleanCell M，22L測(cè)量池洗液貨號(hào)12135027，CleanCell M，12L測(cè)量池洗液（美國(guó)專(zhuān)用）貨號(hào)03023141，PC/CC杯，12個(gè)用于在檢測(cè)前預(yù)熱Pr

13、ocell M及Cleancell M貨號(hào)03005712，ProbeWash M，1270mL 清洗液，用于在檢測(cè)完畢后或更換試劑時(shí)清洗試劑針貨號(hào)03004899，PreClean M，5600mL探測(cè)清洗液貨號(hào)12102137，反應(yīng)杯/吸頭組合裝84反應(yīng)杯/吸頭組合裝48盒，廢物袋 貨號(hào)03023150，WasteLiner，廢物袋 貨號(hào)03027651，系統(tǒng)清潔適配器M所有分析儀需要：貨號(hào)11298500，Elecsys SysClean，5100mL系統(tǒng)清洗液 美國(guó)專(zhuān)用：貨號(hào)04836693，Elecsys維生素B12 CalCheck，3種濃度范圍檢測(cè)要優(yōu)化檢測(cè)性能，請(qǐng)遵照本說(shuō)明書(shū)中

14、有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照各分析儀操作手冊(cè)。試劑使用前分析儀自動(dòng)攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過(guò)條形碼自動(dòng)讀取，在特殊情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取條碼信息時(shí)，請(qǐng)輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤(pán)（定標(biāo)溯源性：該檢測(cè)方法可溯源至Elecsys維生素B12測(cè)定法（貨號(hào)11820753）。每套Elecsys維生素B12試劑的條碼標(biāo)簽上均含有其批特異的定標(biāo)信息。使用Elecsys 維生素B12 CalSet II可調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：

15、新批號(hào)試劑和新鮮試劑必須進(jìn)行定標(biāo)（新試劑盒注冊(cè)后在分析儀上放置不能超過(guò)24小時(shí)）。以下情況建議重新進(jìn)行定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：使用同一批號(hào)試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：如質(zhì)控結(jié)果在限值之外。質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl貧血1、2和3。其他合適的質(zhì)控品也適用。各濃度范圍的質(zhì)控至少每24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個(gè)試驗(yàn)室必須采取相應(yīng)的糾正措施。計(jì)算儀器

16、會(huì)自動(dòng)計(jì)算每個(gè)樣本中的分析物濃度（pmol/L或pg/mL）。轉(zhuǎn)換因子：pmol/L1.36pg/mL pg/mL0.738pmol/L干擾因素檢測(cè)結(jié)果不受黃疸（膽紅素1112mol/L或65 mg/dL），溶血（血紅蛋白0.621mmol/L或 1.0g/dL），脂血(甘油三酯17.1mmol/L或1500mg/dL)和生物素205ng/mL或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集樣本。檢測(cè)結(jié)果不受類(lèi)風(fēng)濕因子影響（RF不超過(guò)1500 IU/ml）。體外對(duì)54種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。少數(shù)病例中高濃度的鏈霉素抗體和釕抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨

17、床檢查和其他臨床資料來(lái)綜合評(píng)估檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)范圍221476pmol/L或302000pg/mL（根據(jù)檢測(cè)下限和廠商制定的定標(biāo)曲線的最大值定義）。低于檢測(cè)限的值將報(bào)告為22pmol/L或1476pmol/L或2000pg/mL。稀釋高于檢測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）按1：2手工稀釋。稀釋的樣本的濃度必須738pmol/L或1000pg/mL。手工稀釋后的結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)2。請(qǐng)注意：分析物濃度超出檢測(cè)范圍的樣本中可觀察到樣本與稀釋呈非線性表現(xiàn)。由于通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）可能含有低水平的內(nèi)源性維生素B1

18、2，建議使用已知含低水平分析物的血清池執(zhí)行線性研究。超出檢測(cè)范圍的樣本可采用通用稀釋液（Elecsys Diluent Universal）按1：2稀釋?zhuān)辉谶@些水平下內(nèi)源性維生素B12的影響不明顯。期望值由于人群和飲食狀態(tài)的不同，在檢測(cè)結(jié)果上附上臨床意義前，建議由每個(gè)實(shí)驗(yàn)室在一段合適的時(shí)間里執(zhí)行足夠數(shù)量的檢測(cè)（數(shù)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），以測(cè)定正常值范圍。下表中顯示的數(shù)據(jù)來(lái)自美國(guó)和德國(guó)在2005年執(zhí)行的一項(xiàng)研究。這些結(jié)果僅做指南使用。各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照自身的病人總數(shù)檢查期望值的可轉(zhuǎn)移性，如有必要可根據(jù)自身情況設(shè)定參考范圍。特殊的性能指標(biāo)試劑在各分析儀上的性能試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下。各實(shí)驗(yàn)室得出的數(shù)據(jù)可能會(huì)稍有差異

19、。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、混合的人血清和質(zhì)控品驗(yàn)證重復(fù)性，按NCCLS（國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)）的改良協(xié)議（EP5A）執(zhí)行：11每天6次，共10天(n=60)；在MODULAR ANALYTICS E170分析儀上的批內(nèi)精密度，n21。下面是獲得的結(jié)果。b）HS人血清c）PCAPreciControl貧血分析靈敏度（檢測(cè)下限）22pmol/L或30pg/mL最低檢出限指區(qū)別于零濃度的分析物最低檢測(cè)濃度。最低檢出限是最低濃度標(biāo)準(zhǔn)品+2SD得到的濃度（廠商定標(biāo)品1+2SD，批內(nèi)精密度，n=21）。方法學(xué)比較采用Elecsys維生素B12測(cè)定法（MODULAR ANALYTICS E170

20、分析儀；使用Elecsys維生素B12 CalSet定標(biāo)；x）和Elecsys維生素B12測(cè)定法（MODULAR ANALYTICS E170分析儀；使用Elecsys維生素B12 CalSet II定標(biāo)；y）測(cè)試臨床樣本并比較，得出以下相關(guān)性（pg/mL）：標(biāo)本數(shù)n=101Passing/Bablok12 線性回歸y0.982x0.018 y0.968x5.77T0.977 r0.999樣品比較的濃度范圍約為49至1691pg/mL（約36至1248pmol/L）。采用Elecsys維生素B12測(cè)定法（MODULAR ANALYTICS E170分析儀；使用Elecsys維生素B12 Cal

21、Set II定標(biāo)；x）和Elecsys維生素B12測(cè)定法（Elecsys 2010分析儀；使用Elecsys維生素B12 CalSet II定標(biāo)；y）測(cè)試臨床樣本并比較，得出以下相關(guān)性（pg/mL）：標(biāo)本數(shù)n=100Passing/Bablok12 線性回歸y0.997x4.17 y0.978x0.479T0.930 r0.994樣品比較的濃度范圍約為55至1609pg/mL（約41至1187pmol/L）。分析特異度下面是發(fā)現(xiàn)的交叉反應(yīng)性：雙氰鈷胺 200ng/mL 0.024參考文獻(xiàn)1. Herbert V. Drugs effective in megaloblastic anemias

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