抗體篩選和鑒定操作規(guī)程

1、抗體篩選和鑒定操作規(guī)程(一) 抗體篩選1. 抗體篩選的目的血型抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的針對血型抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一類免疫球蛋白類物質(zhì)。人體血清內(nèi)存在的抗體有5種類型：IgG.、 IgM、IgA.、IgD和IgE，其中IgG和IgM是最重要的2種抗體。紅細(xì)胞血型抗體可以分為：完全抗體：這些抗體能夠在鹽水介質(zhì)中凝集相應(yīng)的紅細(xì)胞，所以又稱為鹽水抗體，它們主要是分子量較大的IgM；不完全抗體：這類抗體主要是分子量較小的IgG，雖然能夠結(jié)合紅細(xì)胞上的抗原，但在鹽水介質(zhì)中不能使紅細(xì)胞凝集。有臨床意義的血型抗體會導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)，破壞輸入的不配合的紅細(xì)胞或縮短其壽命，產(chǎn)生溶血性輸血反應(yīng)，輕則影響治療效

2、果，重則危及患者生命；此外，對孕婦而言，抗體會引起新生兒溶血病，影響新生兒臟器的發(fā)育，并使其智力發(fā)育受到傷害，嚴(yán)重者則會危及新生兒的生命安全。因此，抗體篩檢是很必要而且必需的?？贵w篩檢試驗(yàn)(antibody screening tests)主要篩查與紅細(xì)胞反應(yīng)的血型同種抗體。對受血者的血清和血漿應(yīng)進(jìn)行常規(guī)的抗體篩選試驗(yàn)，以發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則的血型同種抗體。所謂不規(guī)則抗體是指抗A和抗B以外的血型抗體。抗體篩選試驗(yàn)的原則是讓受檢者的血清與篩選紅細(xì)胞反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)在37有活性的抗體?；颊呓邮茌斞D女妊娠都會刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體?？贵w篩檢試驗(yàn)?zāi)苡行ПＷC臨床輸血安全，避免新生兒溶血癥的發(fā)生。2. 抗體篩

3、選的方法抗體篩選試驗(yàn)可在交叉配血試驗(yàn)之前進(jìn)行或一起進(jìn)行，這樣有利于對患者抗體的早期確認(rèn)及鑒定臨床上有意義的抗體，避免一些可能的異常情況而造成病情的延誤。抗體篩選和鑒定使用的方法有鹽水法、白蛋白介質(zhì)法、低離子強(qiáng)度介質(zhì)法(Liss)、聚凝胺法(polybrene)、凝膠法、酶技術(shù)、抗球蛋白試驗(yàn)等，可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件選擇，但必須進(jìn)行抗球蛋白試驗(yàn)。抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體，一些抗低頻率抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體可能被漏檢，這時需安排抗原更完全和特異性更強(qiáng)的篩選細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，或用敏感度更高的技術(shù)進(jìn)行檢查。一旦抗體被檢出，應(yīng)進(jìn)行抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。(二)

4、抗體鑒定1. 抗體鑒定的目的抗體鑒定（antibody identification）是免疫血液學(xué)的基礎(chǔ)?？贵w鑒定可以作為抗體臨床重要性判定的指南，并為選擇合適的血液輸注提供信息。在某些情況下，抗體鑒定可能是一個困難和費(fèi)時的過程，因而可能延誤患者的治療。當(dāng)遇到抗體篩選陽性時，有多種途徑可以進(jìn)一步鑒定抗體，每個實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)該有自己的操怍綱要。重要的是要用系統(tǒng)的方法來確定抗 體特異性和排除存在其他抗體的可能。2. 抗體鑒定試驗(yàn)的類型抗體鑒定試驗(yàn)包含鑒定致敏在紅細(xì)胞膜上的抗體和游離在血清或血漿中的抗體：自 身細(xì)胞檢查：觀察患者（受者）的血清與患者（受者）自身細(xì)胞的反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有自身抗體或自

5、身抗體和同種抗體兩者同時存在。使用試劑細(xì)胞中的譜細(xì)胞：應(yīng)用各種抗體檢查技術(shù)檢測患者的血清，確定其抗體的特異性。試劑譜細(xì)胞一般是由816個人的已知血型的O型紅細(xì)胞配套組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。選擇不同的譜細(xì)胞，可以鑒定不同特異性的抗體。吸收放散試驗(yàn)的應(yīng) 用：當(dāng)患者體內(nèi)的同種抗體有兩種或兩種以上時，可采用吸收放散試驗(yàn)。為了保證抗體鑒定 的正確性，要求每個抗原有足夠的陽性和陰性細(xì)胞，從而使血清學(xué)檢查的結(jié)果表現(xiàn)出客觀的 規(guī)律而不是偶然的結(jié)果。一般用Fisher的正確估計概率的方法來計算各種陰性和陽性結(jié)合的可能性，P（可能性）值為0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計學(xué)上有

6、效的可以接受的值。3. 抗體鑒定的方法（1）紅細(xì)胞表面的不完全抗體的鑒定1）對于黏附在紅細(xì)胞表面的不完全抗體，需要使用放散技術(shù)(elution test)，使抗體從紅細(xì)胞上解離下來進(jìn)行鑒定。常用的放散方法有熱放散法、乙醚放散法、磷酸氯喹法和冷酸放散法。2）操作方法：選擇合適的放散方法，將抗體從紅細(xì)胞膜上解離下來；選擇合適的譜細(xì)胞，與放散液混勻，按照抗體篩檢所介紹的方法，選擇合適的方法進(jìn)行反應(yīng)；將凝集結(jié)果與譜細(xì)胞格局圖進(jìn)行比較，確定抗體的種類。（2）游離于血清或血漿中的不完全抗體的鑒定1）游離在血清內(nèi)的不完全抗體的鑒定，其方法與抗體篩檢類似，關(guān)鍵是試劑譜細(xì)胞的選擇。2）操作方法：選擇合適的譜細(xì)胞，與待檢血清混勻，按照抗體篩檢所介紹的方法選擇合適的方法進(jìn)行反應(yīng)；將凝集結(jié)果與譜細(xì)胞格局圖表5-3進(jìn)行比較，確定抗體的種類。表5-3紅細(xì)胞譜細(xì)胞抗原分布格局序號Rh-hrKiddMNSsDuffyDiegoKellLewisPDCEcejkajkbMNSsFyaFybDiaDibKkLeaLebP11+00+0+00+0+0+2+0+0+0+0/0003+00+0+/0/+/+4+00+0+00/0/0+5+0+0+0+00+0+0+6+00+0+0+0+00+0+0+07000+00+0/