保健食品中鹽酸硫胺素鹽酸吡哆醇煙酸煙酰胺和咖啡因的測定

1、保健食品中鹽酸硫胺素鹽酸吡哆醇煙酸煙酰胺和咖啡因的測定Determination of thiamine hydrochloride,pyridoxine hydrochloride,niacin,niacinamide and coffeine content in health food 1 范圍本方法規(guī)定了保健食品中鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、煙酰胺和咖啡因含量的高壓液相色譜測定方法。本方法適用于鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、煙酰胺和咖啡因作為膳食補(bǔ)充劑添加于片劑、膠囊、口服液、飲料等試樣類型中含量的高壓液相色譜測定。本方法的最低檢出量為鹽酸硫胺素0.4mg/kg、鹽酸吡哆醇0.4mg

2、/kg、煙酸2.0mg/kg、煙酰胺1.2mg/kg、咖啡因1.0mg/kg。本方法的最佳線性范圍：鹽酸硫胺素0.50050.0g/mL鹽酸吡哆醇0.50050.0g/mL煙酸1.00100g/mL煙酰胺1.00100g/mL咖啡因5.00500g/mL2 原理將粉碎混勻的片劑、膠囊或液體試樣使用甲醇：水：磷酸=100：400：0.5進(jìn)行提取和稀釋，根據(jù)高壓液相色譜紫外檢測器外標(biāo)法定性定量檢測。3 試劑3.1 甲醇 優(yōu)級(jí)純。3.2 乙腈 色譜純。3.3 磷酸 分析純。3.4 硫酸月桂酯鈉（Sodium Dodecylsulfate） 高壓液相色譜用離子對(duì)試劑。3.5 1-癸烷磺酸鈉（Sodiu

3、m 1-Decanesulfonate）高壓液相色譜用離子對(duì)試劑。3.6 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A 準(zhǔn)確稱量已扣除水分的鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)品各0.0500g，溶于水中并定容至50mL。3.7 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B 準(zhǔn)確稱量已扣除水分的煙酰胺和煙酸標(biāo)準(zhǔn)品各0.0400g，溶于水中并定容至20mL。3.8 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液 準(zhǔn)確稱量經(jīng)80干燥4h的咖啡因0.0500g，準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A 5mL, 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液B 10mL，再加入甲醇：水：磷酸=100：400：0.5混合溶液 4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀： 附紫外檢測器（UV）。4.2 超聲波清洗器。4.3 離心機(jī)。5 分析步驟5.1 試樣處理5.1.

4、1 取20粒以上片劑或膠囊試樣研磨或混勻，稱取一定量試樣于試管中（準(zhǔn)確至0.001g），加入甲醇：水：磷酸100：400：0.5混合溶液,使?jié)舛葹槊亢辽写蠹s含鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇0.25mg，煙酸、煙酰胺1mg。超聲提取5min后以3000rpm/min離心5min，上清液經(jīng)0.45m濾膜過濾后待進(jìn)樣。5.1.2 液體試樣直接以甲醇：水：磷酸100：400：0.5混合溶液稀釋，充分混勻后經(jīng)0.45m濾膜過濾后待進(jìn)樣。5.2 色譜條件5.2.1 色譜柱: 液體試樣TSK C18 4.6150mm5.2.3 柱溫：室溫5.2.4 檢測波長：鹽酸硫胺素 260nm 咖啡因、煙酸、煙酰胺、鹽酸吡哆

5、醇 280nm5.2.5 流動(dòng)相：鹽酸硫胺素: 硫酸月桂酯鈉溶液（5530）:乙腈:磷酸530:470:1 咖啡因、煙酸、煙酰胺、鹽酸吡哆醇: 1-癸烷磺酸鈉溶液（1.22850）: 乙腈:磷酸850:150:15.2.6 流速：1mL/min5.2.7 進(jìn)樣量：10L5.3 保留時(shí)間： 1 圖1 圖2在該色譜條件下，鹽酸硫胺素（圖11）保留時(shí)間14.305咖啡因（圖21）保留時(shí)間4.986、煙酸（圖22）保留時(shí)間8.728、煙酰胺（圖23）保留時(shí)間9.341、鹽酸吡哆醇（圖24）保留時(shí)間18.512。 5.4 分析結(jié)果表示5.4.1計(jì)算 h1 C V X = h2m1000式中： X試樣中單一成分的含量，mg/g（mL）； h1試樣峰高或峰面積； C 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/mL； V試樣定容體積，mL； h2標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高或峰面積；