北京泰格科信公司課件

2011.10.20北京泰格科信公司化學(xué)發(fā)光的優(yōu)勢放射性免疫分析法（RIA）應(yīng)用放免自60年代問世以來對臨床診斷起了革命性的貢獻，是一項較為成熟的診斷技術(shù)。夾心法、競爭法的標(biāo)記原理為以后的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。缺點放射性（125I），對環(huán)境的污染及對身體的危害，已經(jīng)為重視環(huán)保的國家逐步取消。（如整個歐洲僅尚存幾個放免試驗室）125I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。標(biāo)記物125I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費。操作繁瑣，出報告時間長。無法保存?zhèn)溆?。酶免疫分析法（ELISA）應(yīng)用酶免的最大優(yōu)勢在于避免了對環(huán)境和人體危害。試劑有效期較長。曾經(jīng)一度被認為是取代放免的檢測手段。缺點靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和假陽性。因酶的純度和反應(yīng)過程容易受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致穩(wěn)定性不好?；瘜W(xué)發(fā)光與常用免疫分析方法對比方法優(yōu)點缺點化學(xué)發(fā)光操作簡單，成本較低，靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定試劑成本較高放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復(fù)雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡單靈敏度低，適用于定性和半定量時間分辨靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復(fù)雜，反應(yīng)時間長，試劑成本較高電化學(xué)發(fā)光靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定試劑成本高，儀器維護費用較高，有本底干擾免疫分析技術(shù)基本原理抗原：可誘導(dǎo)動物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗體：由動物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生，可特異性結(jié)合某種物質(zhì)的球蛋白。利用抗原、抗體之間的特異性結(jié)合來測定、分析特定物質(zhì)的方法進口化學(xué)發(fā)光免疫分析的幾種產(chǎn)品美國拜耳公司ACS:180和180SE全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng):該系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒子分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法。以吖啶酯為發(fā)光的標(biāo)記物,固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和酶聯(lián)免疫中的雙抗體夾心法和競爭結(jié)合法相似。電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECL）應(yīng)用80年代末期問世的新型化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。基本原理：根據(jù)三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]和三丙胺在電場觸發(fā)下產(chǎn)生發(fā)光的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。本底較小、靈敏度較高、線性范圍較寬。缺點不能做科研。試劑價格過高?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析原理采用辣根過氧化物酶（hrp）標(biāo)記（抗原或抗體）化學(xué)發(fā)光底物是魯米諾，辣根過氧化物酶作用于底物發(fā)光，通過化學(xué)發(fā)光儀測定各孔的發(fā)光強度，發(fā)光強度與樣本濃度存在線性關(guān)系化學(xué)發(fā)光的分類按化學(xué)反應(yīng)類型酶促化學(xué)發(fā)光：辣根過氧化物酶系統(tǒng)堿性磷酸酶系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)非酶促化學(xué)發(fā)光：

吖啶酯系統(tǒng)草酸酯系統(tǒng)三價鐵-魯米諾系統(tǒng)按發(fā)光持續(xù)時間閃光（Flash）:發(fā)光時間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯以原位進樣(InSituInjector)和時間積分法測量輝光（Glow）:發(fā)光時間在數(shù)十分鐘以上，如：

HRP-Luminol系統(tǒng)

AP-AMPPD系統(tǒng)黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)無須原位進樣、以速率法測量。計生系統(tǒng)需要開展的項目優(yōu)生優(yōu)育系列：弓形蟲抗體、巨細胞病毒抗體、風(fēng)疹病毒抗體、單純皰疹病毒II型抗體和單純皰疹病毒I/II型抗體；乙肝五項系列:乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒表面抗體、乙型肝炎病毒表面e抗原、乙型肝炎病毒e抗體和乙型肝炎病毒核心抗體；高敏人促甲狀腺激素（TSH)產(chǎn)前篩查:AFP和Β-HCGTORCH證件TORCH檢測的意義由于成人TORCH感染的臨床癥狀不明顯，無法自我感覺到是否受到感染，因此孕前及孕早期診斷對優(yōu)生優(yōu)育十分重要。目前，國際上公認的最方便、最先進的早期診斷方法是檢測人體血清中的特異性IgM、IgG抗體，以判斷受到感染的情況。世界上許多發(fā)達國家已經(jīng)將TORCH列為孕期常規(guī)檢查項目，在優(yōu)生優(yōu)育方面發(fā)揮著重要作用。在國內(nèi)，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對優(yōu)生優(yōu)育的認識逐步提高，TORCH檢測越來越受到重視。TORCH感染危害孕期處于免疫抑制狀態(tài)，容易發(fā)生感染。孕婦感染后不表現(xiàn)明顯的癥狀，易被忽略孕中、晚期單項感染率10.5%，多項感染率11.56%出生時“正?！钡南忍煨愿腥净純海赡茈S著年齡的增長，癥狀及臨床表現(xiàn)逐漸明顯，在以后的3-20年中相關(guān)臟器的漸進性損害。TORCH感染危害（二）孕婦中一些IgM抗體水平不高的潛在患者，也可造成宮內(nèi)感染。我國新生兒每年先天感染的總發(fā)病率達10%，累及約100W新生兒，嚴重威脅優(yōu)生優(yōu)育及人口素質(zhì)。TORCH感染的發(fā)病機理

受孕前感染孕前感染的病毒可完整進入精/卵細胞，與整個基因轉(zhuǎn)錄—先天性的感染模式（內(nèi)生性逆轉(zhuǎn)病毒）著床前感染著床前感染的某些病毒，能依賴并利用生殖細胞進行增殖，從而直接損害發(fā)育中的胚胎各器官系統(tǒng)，使其發(fā)生畸變/病理改變。著床后感染妊娠頭三個月內(nèi)的感染，對胎盤/胚胎發(fā)育影響很大。TORCH感染嚴重程度的影響因素病原體種類、數(shù)量、毒力、是否持續(xù)孕母免疫力初染/再染，孕母免疫力下降胎兒孕周/成熟度孕周小，成熟度低者病變嚴重TORCH綜合癥的危害對新生兒/嬰兒畸形發(fā)生率：西方：出生時2-3%，2年后4-6%

對孕婦病理妊娠流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、新生兒窒息、死亡其他TORCH綜合癥的診斷（一）標(biāo)本采集：孕母：血液、尿液、乳汁宮頸分泌物、活檢胎兒：胎盤組織、絨毛、羊膜、羊水新生兒：臍血、鼻咽/外耳道分泌物胃液、腦脊液、尿液。TORCH的防治弓型蟲的傳播方式有兩種：貓、犬糞便中的弓型蟲卵囊、污染水或事物使人感染；人接觸或進食含有污染包囊的生肉或不熟肉類。孕婦應(yīng)避免與貓犬接觸，不食用不熟的肉蛋類。孕早期要積極接受弓型蟲抗體檢查，急性感染者應(yīng)遵醫(yī)囑及早進行抗蟲治療。風(fēng)疹病毒經(jīng)飛沫傳播。孕婦應(yīng)減少出入公共場所，避免與風(fēng)疹病人接觸。育齡婦女應(yīng)作抗體檢測，抗體陰性者接種減毒活疫苗可起預(yù)防作用。疫苗接種一個月內(nèi)應(yīng)避免懷孕，孕婦絕對禁止接種。巨細胞病毒和單純皰疹病毒主要通過輸血、胎盤、產(chǎn)道感染和性接觸傳播、孕婦應(yīng)避免與患者接觸。TORCH血清血學(xué)診斷原理（ELISA）將特異性抗體（抗原）包被（吸附）到微孔中加入待測標(biāo)本（抗原），捕捉標(biāo)本中的相應(yīng)抗原（抗體）加入酶標(biāo)特異性抗體（抗原），相應(yīng)抗原（抗體）被夾在抗體之間。當(dāng)加入酶的底物后顯色，顯色程度直接反映了標(biāo)本病毒抗原的量測OD值，根據(jù)陽性、陰性對照及標(biāo)準(zhǔn)曲線判斷結(jié)果已被多數(shù)實驗室采用IgM檢測的臨床意義

特異性IgM出現(xiàn)于病毒感染的早期或病毒感染的活動期。從急性期病人的單份血清中檢出特異性IgM，是病毒感染實驗室早期診斷的可靠方法。已廣泛用于病毒性疾病的早期診斷。因IgM不能通過胎盤，臍血/新生兒血清中發(fā)現(xiàn)抗病毒IgM為宮內(nèi)感染巨細胞病毒感染

Cytomegalovirus(CMV)流行病學(xué)國內(nèi)孕婦CMV-IgG陽性率94.7-96.3%國內(nèi)孕期內(nèi)CMV-IgM陽性率為3.1-3.4%CMV-IgM陰性也會造成孕婦的感染活動期感染20-40%傳給胎兒新生兒CMV先天感染率為3.5%歐美國家先天性感染率低于我國（2-0.5%)危害

死亡率10-20%10%出生時無明顯癥狀

90%以上無明顯癥狀多器官多系統(tǒng)損害臨床表現(xiàn)小頭畸型、小眼球腹股溝疝、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎肝脾腫大，黃膽等結(jié)果判定IgMIgG結(jié)果說明——易感者，需防護，監(jiān)視+—原發(fā)感染++原發(fā)/復(fù)發(fā)感染早期—/晚期++復(fù)發(fā)感染處理胎兒感染后果嚴重抗病毒藥物：丙氧鳥苷，磷甲酸早期處理弓形體感染

Toxoplasmagondii(Toxo)流行病學(xué)人畜共患、分布廣泛、全球約5-10億人感染。我國正常人群的感染率4-9%，孕婦感染率為0.3-47%,農(nóng)村高于城鎮(zhèn)，孕婦感染率高于新生兒。孕婦孕早、中、晚感染時的胎兒受染率分別為17%、25、65%，以早危害最大.我國已報道了38種弓形體畸形/出生缺陷感染了TOXO孕婦的畸形兒發(fā)生率比未感染者高4.48倍,死胎發(fā)生率高8.68倍。智力低下兒的抗體陽性率較正常者多5倍。危害

孕早期感染：胎兒死亡、流產(chǎn)。孕中、晚期感染：神經(jīng)S損害：無腦兒、腦積水、小頭畸形、智力障礙眼損害：無眼、單眼、小眼

內(nèi)臟的先天性損害：如食管閉鎖

臨床表現(xiàn)先天性弓形蟲病神經(jīng)系統(tǒng)癥狀：70-80%，腦積水、脊柱裂、無腦兒。眼部癥狀：50-80%，脈絡(luò)視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)、青光眼、弱視。其他：發(fā)熱、黃膽、肝脾大。延遲表現(xiàn)：部分患兒出生數(shù)月/數(shù)年后癲癇，視力障礙。獲得性弓形蟲病急性型：淋巴結(jié)型90%眼弓形蟲?。阂暰W(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎全身性弓形體?。焊邿?，昏迷，臟器損傷。慢性型：視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、大腦肉芽腫。結(jié)果判定IgMIgG結(jié)果說明——易感者，需防護，監(jiān)視+—非常近期感染++近期感染—+有免疫性處理

妊娠期感染對胎兒的危害是明顯的治療藥物：磺胺類，大環(huán)內(nèi)酯類早期發(fā)現(xiàn)，早期處理流行病學(xué)我國成年人風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體陽性92-100%，城市高于農(nóng)村。3-10%的人可以再感染。育齡婦女的風(fēng)疹易感率在發(fā)達國家為20%左右，我國5%左右，一些偏僻地區(qū)可達17.1%成人感染癥狀輕微疫苗接種預(yù)防有效危害風(fēng)疹病毒易感人群為1—5歲兒童和孕婦。孕婦感染風(fēng)疹者多在懷孕1—6周時（＞50%），除可致流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、早產(chǎn)外，若胎兒存活出生，所生嬰兒則可能發(fā)生先天性風(fēng)疹綜合征。臨床表現(xiàn)典型三聯(lián)癥：白內(nèi)障、耳聾、先天性心臟病其他表現(xiàn)：

眼：（50-90%）心臟：（37-86%）聽力系統(tǒng)：（57-76%）血液泌系統(tǒng)：（30-50%）風(fēng)疹-抗體的變化特點

IgM7-10天達到高峰，以后迅速下降皮疹出現(xiàn)前后，一到兩天可檢出IgM抗體4-5周已檢測不出

IgG出現(xiàn)在IgM之后緩慢上升，1-2月達高峰可維持終生結(jié)果判定IgMIgG結(jié)果說明——易感者，需防護，監(jiān)視+—原發(fā)感染++原發(fā)/復(fù)發(fā)感染—+有免疫性處理

無特效治療對癥治療為主疫苗接種單純皰疹病毒HerpesSimplexVirus（HSV）流行病學(xué)美國平均每年感染4000例感染美國新生兒感染率1/5000—1/75000我國正常感染率為5%左右危害

孕早期通過胎盤感染胎兒流產(chǎn)、死胎孕中、晚期經(jīng)產(chǎn)道上行感染胎兒（40%—50%機會）先天畸形、早產(chǎn)、死胎結(jié)果判定IgMIgG結(jié)果說明——易感者，需防護，監(jiān)視+—原發(fā)感染++原發(fā)/復(fù)發(fā)感染—+有免疫性處理

胎兒感染后果嚴重抗病毒藥物：阿糖腺苷，無環(huán)鳥苷，干擾素，胸腺素早期處理TSH證件孕早期必須查甲狀腺功能？甲狀腺激素對孩子智力發(fā)育非常重要，假如甲狀腺激素不足（甲減），就會使泰特腦發(fā)育不良，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙，嚴重者可發(fā)生克汀?。ù粜“Y），假如甲狀腺激素過多（甲亢），就會使妊娠婦女流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎盤早剝等發(fā)生率增加，早產(chǎn)兒、胎兒宮內(nèi)生長遲緩、足月小樣兒等危險性進步。唐氏綜合征和神經(jīng)管缺陷

產(chǎn)前篩查系統(tǒng)產(chǎn)前篩查證件產(chǎn)前篩查概況產(chǎn)前篩查發(fā)展歷程產(chǎn)前篩查發(fā)展現(xiàn)狀泰格科信唐氏綜合征和神經(jīng)管缺陷產(chǎn)前篩查系統(tǒng)簡介產(chǎn)前篩查概況發(fā)病率臨床表現(xiàn)篩查意義21三體發(fā)病率據(jù)估計我國目前大約有60萬以上的21三體綜合征患兒，按目前的出生率我國平均20分鐘就有一例21三體綜合征患兒出生，全國每年出生的唐氏綜合征患兒將達27000例左右。新生兒中21三體綜合征的發(fā)病率為1.5‰左右，介于1／1000－1／500之間。21三體臨床表現(xiàn)體重、身長偏低顱面部畸形先天性心臟病智能發(fā)育緩慢產(chǎn)前篩查意義降低唐氏患兒出生率經(jīng)濟、簡便、非創(chuàng)傷性操作減少因穿刺導(dǎo)致的胎兒丟失產(chǎn)前篩查兩個重要參數(shù)檢出率=真陽性/（真陽性+假陰性）假陽性率=假陽性/（假陽性+真陰性）產(chǎn)前篩查發(fā)展歷程年齡檢出率：25～30%假陽性率：14%AFPβ-HCGuE3PAPP-A抑制素A單個指標(biāo)檢出率30%左右檢出率：60%假陽性