《基因工程的原理和技術(shù)》教學(xué)-完整版課件

第二節(jié)基因工程的原理和技術(shù)將大鼠的生長(zhǎng)激素基因?qū)氲叫∈笫芫阎校玫降摹俺?jí)鼠”。1.簡(jiǎn)述基因工程的原理；2.描述基因工程基本步驟的幾個(gè)步驟；3.舉例說(shuō)出篩選含有目的基因的受體細(xì)胞的原理?；蚬こ痰幕静僮鞑襟E第一步：獲取目的基因第二步：形成重組DNA分子第三步：將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞第四步：篩選含有目的基因的受體細(xì)胞第五步：目的基因的表達(dá)一、獲取目的基因人工合成利用PCR技術(shù)擴(kuò)增已知序列：從基因文庫(kù)獲得未知序列：(DNAlibrary)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)鳥槍法：散彈射擊法供體細(xì)胞DNA限制酶許多DNA片段載入運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞擴(kuò)增產(chǎn)生特定性狀分離目的基因從基因文庫(kù)獲得基因DNA文庫(kù)的構(gòu)建

將總DNA經(jīng)過(guò)酶解，分離不同長(zhǎng)短的DNA片段。包含基因片段分別克隆在質(zhì)?；蚴删w載體上，轉(zhuǎn)染細(xì)菌或體外包裝到噬菌體顆粒上便構(gòu)成了該生物的基因文庫(kù)。目的基因的mRNA逆轉(zhuǎn)錄單鏈DNA合成雙鏈DNA（目的基因）蛋白質(zhì)氨基酸序列推測(cè)mRNA的核苷酸序列推測(cè)結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列化學(xué)合成目的基因人工合成法逆轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸序列直接合成DNA二、形成重組DNA分子質(zhì)粒DNA分子限制性核酸內(nèi)切酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端常用受體細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌、動(dòng)植物細(xì)胞等方法舉例：

載體：質(zhì)粒；

宿主細(xì)胞：大腸桿菌；

處理方法：氯化鈣；

目的：增加細(xì)胞壁透性；三、重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞四、篩選有目的基因的受體細(xì)胞

前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細(xì)胞來(lái)接受不多的目的基因。這樣，處理的受體細(xì)胞中真正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢測(cè)出來(lái)。篩選原理：質(zhì)粒（載體）上含有抗生素抗性基因，受體細(xì)胞本身不能抵抗抗生素（不具有抗生素抗性基因），因此只有導(dǎo)入重組DNA分子（含目的基因）的受體細(xì)胞才能在含有抗生素的培養(yǎng)基中生存！五、目的基因的表達(dá)無(wú)表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物有表達(dá)產(chǎn)物無(wú)表達(dá)產(chǎn)物

細(xì)菌的檢測(cè)，將每個(gè)受體細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)形成菌落，檢測(cè)菌落中是否有目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。淘汰無(wú)表達(dá)產(chǎn)物的菌落，保留有表達(dá)產(chǎn)物的進(jìn)一步培養(yǎng)、研究。例：用棉鈴喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲吃后中毒死亡，說(shuō)明攝入了抗蟲基因并得到表達(dá)。1.在基因工程中使用的限制性核酸內(nèi)切酶，其作用是（）A.將目的基因從染色體上切割出來(lái)B.識(shí)別并切割特定的DNA核苷酸序列C.將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合D.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞B2.基因工程是DNA分子水平的操作，下列有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（）A.限制酶只用于切割獲取目的基因B.載體與目的基因必須用同一種限制酶處理C.基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA連接酶D.帶有目的基因的載體是否進(jìn)入受體細(xì)胞需檢測(cè)A3.運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)，將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因整合到棉花細(xì)胞中，為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是否成功，最方便的方法是檢測(cè)棉花植株是否有（）A.抗蟲基因B.抗蟲基因產(chǎn)物C.新的細(xì)胞核D.相應(yīng)性狀4.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物轉(zhuǎn)基因時(shí)的受體細(xì)胞是（）A.受精卵B.精細(xì)胞C.卵細(xì)胞D.體細(xì)胞DA5.質(zhì)粒是基因工程最常用的運(yùn)載體，它的主要特點(diǎn)是：()①能自主復(fù)制②不能自主復(fù)制③結(jié)構(gòu)很小

④蛋白質(zhì)⑤