寶錄-生物負(fù)荷和生物指示劑

2019全國藥品微生物檢驗(yàn)控制技術(shù)培訓(xùn)上海寶錄生物科技有限公司生物負(fù)荷和生物指示劑兩種建立和驗(yàn)證滅菌過程的方法?

OverkillMethod過度殺滅法能夠殺滅高濃度、高抗性的生物指示劑指示微生物。通常用于不受滅菌過程影響的金屬、玻璃和其他物品。?

Bioburden/BiologicalIndicatorMethod生物負(fù)荷/生物指示劑方法適用于對滅菌條件敏感的產(chǎn)品依賴于BI和生物負(fù)荷微生物的相對抗性和數(shù)量的差異，其中生物負(fù)荷的抗性必須小于BI的抗性。生物負(fù)荷?

待滅菌產(chǎn)品上的天然污染微生物稱為生物負(fù)荷。?

生物負(fù)荷高度可變。?

微生物的類型?

微生物的數(shù)目?

微生物的抗性?

設(shè)備和制藥廠商需要對滅菌前產(chǎn)品上發(fā)現(xiàn)的生物負(fù)荷進(jìn)行描述和記錄），還需要確定生物負(fù)荷數(shù)目和抗性的極限。（建立微生物菌庫）D值測定相關(guān)法規(guī)【中國藥典2015】：‘’在生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)中，需確定孢子在實(shí)際滅菌條件下的D值，并測定孢子的純度和數(shù)量。‘’【中國藥典2020第二次修訂意見稿】：滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則（新增）??用戶應(yīng)確定自制生物指示劑的純度、芽胞數(shù)、D值等參數(shù)，并制定有效期，以保證滅菌驗(yàn)證和監(jiān)控的有效性。??用戶應(yīng)根據(jù)使用目的制定商品化生物指示劑的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，以保證生物指示劑的性能符合相關(guān)要求。在生物指示劑驗(yàn)收前，可考慮對D值進(jìn)行評估，必要時(shí)可進(jìn)行D值測定，確認(rèn)D值和微生物數(shù)量的穩(wěn)定性對于長期存放的生物指示劑尤為重要。D值測定相關(guān)法規(guī)【中國藥典2020第二次修訂意見稿】：生物指示劑耐受性檢查法指導(dǎo)原則（新增）D值測定n

儀器??抗力儀（能夠?qū)崿F(xiàn)短時(shí)升溫和降溫的滅菌器），該設(shè)備適用于紙片式、自含式、芽胞懸液形式等的生物指示劑。??油浴儀（能夠設(shè)定到100℃以上的恒溫設(shè)備），該設(shè)備適用于芽胞懸液生物指示劑。為保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，抗力儀的各項(xiàng)參數(shù)應(yīng)滿足GB/T24628的要求。n

測定方法陰性分?jǐn)?shù)法（LHSKP法，也叫部分陰性法）殘存曲線法，測定方法參見GB18281.1（醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物第1部分：通則）。生物負(fù)荷-D值測定相關(guān)法規(guī)【USP

<1229.3>

MONITORING

OF

BIOBURDEN】：D值測定測定儀器：生物指示劑耐熱性評估儀（BiologicalIndicatorEvaluatorResistometers，B.I.E.R.），能夠運(yùn)行方波循環(huán)的滅菌器，通常用于D值研究。D值測定測定方法：SMC法LSKP法陰性分?jǐn)?shù)法Fraction

negativemethodD值測定殘存曲線法Survivor

curvemethodD值測定唯一問題同樣的液體，到達(dá)12.0F0的時(shí)間差16分鐘D值研究的意義?

在滅菌過程中評估產(chǎn)品對孢子的影響的試驗(yàn)?

需要知道產(chǎn)品和包裝對生物負(fù)載和BI孢子產(chǎn)生什么影響，因?yàn)楫a(chǎn)品和包裝可以影響微生物的抗性。?

比較產(chǎn)品/外包裝生物負(fù)載中孢子與生物指示劑中孢子的抗性。?

如果與標(biāo)準(zhǔn)BI相比，該產(chǎn)品增加了BI孢子的抗性，則需要直接接種產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證和常規(guī)監(jiān)測。?

如果產(chǎn)品對BI孢子沒有影響，則可以使用標(biāo)準(zhǔn)BI。D值研究類型

美國藥典的濕熱方法學(xué)分類<1229.1>STEAMSTERILIZATION

BY

DIRECTCONTACT<1229.2>MOISTHEAT

STERILIZATION

OFAQUEOUSLIQUIDS直接接觸蒸汽滅菌液體濕熱滅菌D值研究的類型n液體制劑的D值研究液體載體通常是水基的，但實(shí)際配方和活性成分對孢子抗性具有顯著影響。n固體載體部件的D值研究固體或液體載體的材料種類繁多。固體載體可以是纖維材質(zhì)（紙，無紡高分子材料）或固體表面（不銹鋼，玻璃，塑料或橡膠。）n生物負(fù)荷在產(chǎn)品中的Ｄ值研究D值研究的意義液體載體??液體制劑可能對孢子抗性產(chǎn)生影響。?

有效成分（可以保護(hù)孢子，使滅菌更難）?

濃度?

防腐劑（可能會使產(chǎn)品更容易滅菌）?

pHD值研究的類型——液體制劑的D值研究液體制劑的D值研究過程?將孢子接種到產(chǎn)品中（生物指示劑孢子或特殊孢子）。?還需要測試含有相同孢子的注射用水（WFI），以提供基線評估。?用存活曲線法確定D值。?測試裝置通常由0.3ml的洋蔥皮玻璃安瓿瓶組成。?將安剖瓶暴露于BIER容器中。?從產(chǎn)品中將孢子過濾洗脫。?對暴露后的指示劑進(jìn)行孢子數(shù)測定，以直接測量孢子的對數(shù)減少值。D值研究的類型——液體制劑的D值研究D值研究——為什么測試WFI？?大多數(shù)藥品都是水性的。?與WFI相比，孢子在產(chǎn)品中更容易被殺死。?WFID值提供基線或參考Water

For

InjectionProduct

A

15mg/lactive

ingredientProduct

B

30mg/lactive

ingredientD值研究的類型——液體制劑的D值研究相差顯微鏡對比圖像?液體制劑產(chǎn)品中的孢子?產(chǎn)品可能導(dǎo)致孢子聚集產(chǎn)品中聚集的孢子乙醇中的孢子D值研究的意義液體載體液體載體通常是水基的，但實(shí)際配方和活性成分對孢子抗性具有顯著影響。來自相同懸浮液的孢子，接種到不同的藥物產(chǎn)品中時(shí)，表現(xiàn)出多種抗性。液體制劑類型成分及濃度Ｄ１２１℃ＷＦＩ３.６ｍｉｎ２.１ｍｉｎ４.２ｍｉｎ１.２ｍｉｎ４.９ｍｉｎ１ｍｇ／Ｌ活性組分１０ｍｇ／Ｌ活性組分含活性組分產(chǎn)品Ａ產(chǎn)品Ｂ無活性組分D值研究的意義固體載體并非所有固體載體表面都相同。孢子將與表面不同地相互作用，這取決于許多因素，包括表面形態(tài)，表面親水性，孢子懸浮稀釋劑以及表面化學(xué)成分親水濾紙疏水纖維載體不銹鋼疏水性表面D值研究的意義固體載體同一種孢子接種到由不同類型橡膠材質(zhì)制成的產(chǎn)品包裝橡膠塞上，會表現(xiàn)出不同的D值。橡膠塞材質(zhì)類型類型１孢子種類Ｄ１２１℃嗜熱脂肪芽孢桿菌嗜熱脂肪芽孢桿菌嗜熱脂肪芽孢桿菌１.４ｍｉｎ２.３ｍｉｎ６.１ｍｉｎ類型２類型３D值研究的類型——瓶塞/瓶子部件的D值研究產(chǎn)品包裝的特征?包裝系統(tǒng)可能會影響測得的孢子抗性?

多變的表面?

多變的處理方式堆疊在膠塞上的孢子的電子顯微鏡照片D值的影響因素n

菌種種類n

測試系統(tǒng)（如孢子是懸浮在液體中，還是經(jīng)干燥附著在堅(jiān)硬載體上？在加熱過程中，孢子周圍有什么樣的環(huán)境和特性？）n

孢子懸浮所處的介質(zhì)n

測試溫度n

內(nèi)包裝材料n

加熱和冷卻滯后沒作校正對滅菌時(shí)間的影響n

加熱和培養(yǎng)計(jì)數(shù)之間的溫度、時(shí)間和環(huán)境條件n

用來培養(yǎng)計(jì)數(shù)滅菌后孢子的培養(yǎng)基n

培養(yǎng)條件D值研究的類型——生物負(fù)荷在產(chǎn)品中的D值研究生物負(fù)荷的D值研究過程?孢子來源于分離菌?？蛻魧⒎蛛x的的孢子形成細(xì)菌以平板或斜面的形式送到測試實(shí)驗(yàn)室。?對產(chǎn)品或其他指定材料中的分離菌進(jìn)行的D值研究。將細(xì)菌培養(yǎng)至108的濃度，收獲孢子并接種到WFI（注射用水）或產(chǎn)品安瓿中。?通過存活曲線確定D值。D值研究的類型——生物負(fù)荷在產(chǎn)品中的D值研究生物負(fù)荷微生物電子掃描顯微圖片寶錄生物可提供D值測試服務(wù)D值測定?可對您購買的商品化生物指示劑進(jìn)行D值測定?可對您自制的生物指示劑進(jìn)行D值測