腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測課件

腸道傳染病常見

致病菌實驗室檢測腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測一、腸道傳染病概述二、幾種常見致病菌的實驗室檢測

一、概述腸道傳染病是由各種病原體經(jīng)口侵入腸道，在腸道內(nèi)繁殖并產(chǎn)生毒素，破壞腸粘膜組織，引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者由糞便中排出感染他人的一類疾病。往引起腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚至有生命危險。傳播途徑1、經(jīng)水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、傷寒、細(xì)菌性痢疾等疾病的暴發(fā)流行。2、經(jīng)食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸?shù)匿N售等過程中被腸道傳染病的病原體污染，可造成局部的流行和暴發(fā)流行。3、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人民幣等造成病原體傳播。4、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內(nèi)存活一段時間，并隨著昆蟲的活動進(jìn)行傳播。病原體甲類傳染?。夯魜y；乙類傳染病：傷寒和副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、脊髓灰質(zhì)炎、甲、戊型病毒性肝炎；丙類傳染病：除霍亂、傷寒副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲等病原體引起的腸道感染。二、幾種常見致病菌的實驗室檢測

（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）由傷寒沙門菌和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌引起的急性腸道傳染病。參照傷寒和副傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)（ws280-2008）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）3實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

血清學(xué)及確定鑒定

（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）分離培養(yǎng)血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基或葡萄糖膽鹽肉湯，36℃±1℃孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24-48h骨髓：直接或增菌分離糞便：直接接種或于亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基36℃±1℃增菌18-24h后接種于SS、MAC或沙門顯色等培養(yǎng)基36℃±1℃培養(yǎng)18-24h（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)進(jìn)行初篩。發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖，除傷寒沙門菌不產(chǎn)氣外，其余菌產(chǎn)生氣體，動力陽性、吲哚陰性、不水解尿素，其KIA生化反應(yīng)模式為：K/AGH2S(+)；MIU生化模式為：＋－－（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）血清學(xué)鑒定：凡生化反應(yīng)附合沙門菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗確定相應(yīng)群和生物型，基本原則：O:Vi:H1:H2

A-F群多價O血清多價凝集后再用每個O血清群的單價因子血清定群后用H因子檢查第1相和第2相H抗原單價O因子血清不凝集，應(yīng)排除Vi抗原(制成菌懸液100℃水浴30min破壞Vi抗原后再進(jìn)行血清凝集)（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）確定鑒定：腸桿菌科細(xì)菌各屬之間，生化有類似，抗原有交叉反應(yīng)和不典型菌株的出現(xiàn)，需進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定，可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)鑒定。（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）簡稱菌痢，是由志賀菌屬細(xì)菌引起的腸道傳染病。細(xì)菌性和阿米巴性痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS287-2008）分類：A群：痢疾志賀菌(S.dysenteriae)B群：福氏志賀菌(S.flexneri)C群：鮑氏志賀菌(S.boydii)D群：宋內(nèi)志賀菌(S.sonnei)（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）3實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

血清學(xué)及確定鑒定

（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）標(biāo)本采集及分離：盡量在抗生素使用前，采集血液（懷疑菌血癥）或新鮮糞便膿血、粘液部分(新鮮糞便置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中冷藏條件下8h內(nèi)送檢或轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾Cary-Blair運送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)。分離培養(yǎng)：血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基，36℃±1℃孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24-48h，觀察結(jié)果。糞便：直接劃線接種于MAC或XLD（木糖賴氨酸去氧膽酸鈉）培養(yǎng)基36℃±1℃培養(yǎng)18-24h。不建議使用SS，因其可抑制痢疾志賀氏菌A1型生長，漏檢（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培養(yǎng)16-20h觀察生化反應(yīng)。KIA生化反應(yīng)模式為：K/AH2S(-)；MIU：－+/－－（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）血清學(xué)凝集：凡生化反應(yīng)附合志賀菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗進(jìn)行鑒定分型

無菌挑取KIA表面菌落，用志賀氏菌四種多價抗血清凝集；凝集者，再取痢疾志賀氏I、痢疾志賀氏II、宋內(nèi)志賀氏、福氏志賀氏抗血清凝集；不凝者排除k抗原(制成菌懸液100℃水浴30min后再進(jìn)行血清凝集)后，取鮑氏志賀氏菌抗血清凝集；若與某型血清發(fā)生凝集，應(yīng)進(jìn)一步作分型鑒定。確定鑒定：選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一種革蘭氏陰性，無芽胞，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀的嗜鹽性細(xì)菌。進(jìn)食含有該菌的食物可致食物中毒，臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。傳染源主要為帶菌的海產(chǎn)品，近海淡水魚帶菌較高。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)本采集及送檢分離培養(yǎng)形態(tài)與染色

生化反應(yīng)

確定鑒定

（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）標(biāo)本采集及送檢：急性期、用藥前采集新鮮糞便，運送時間超過2h者應(yīng)放入Cary-Blair運送培養(yǎng)基室溫下24h內(nèi)送檢，或?qū)⒓S便置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中室溫條件下8h運送。分離培養(yǎng)：新鮮糞便或肛拭子直接劃線接種或于3%氯化鈉堿性胨水36℃±1℃增菌8-16h后接種于弧菌顯色或硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂(TCBS)等培養(yǎng)基36℃±1℃培養(yǎng)18-24h。（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）生化反應(yīng)：

純化后挑取可以菌落接種KIA/TSI、MIU等36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)初篩。KIA：K/AG

H2S(+)MIU++-

嗜鹽試驗：挑取純培養(yǎng)的單個可以菌落，分別接種0%、6%、8%、10%不同氯化鈉濃度的胰胨水，36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察液體渾濁情況。6%、8%NaCL胨水中生長；0%、10%NaCL胨水中不生長。（三）感染性腹瀉（副溶血