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文檔簡介

實驗五酶聯(lián)免疫吸附試驗

一、實驗?zāi)康?、了解ELISA-HBsAg的檢測原理2、掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗的操作方法2二、實驗標(biāo)本及器材乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒3三、實驗原理乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒采用雙抗體夾心法檢測HBsAg，采用抗-HBs包被板條，用HRP標(biāo)記的抗-HBs為酶標(biāo)記物，以四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化物為底物。當(dāng)標(biāo)本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結(jié)合并與抗-HBs-HRP結(jié)合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復(fù)合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。在實驗結(jié)束時，有顏色變化的提示有HBsAg存在，無顏色或顏色變化微弱的則提示不存在HBsAg。4三、實驗原理5三、實驗原理6四、實驗步驟1、實驗準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液做1比20稀釋。2、加待測標(biāo)本：設(shè)陰性、陽性對照各一孔，分別加入陰性、陽性對照0.1毫升，空白對照一孔，其余各孔加入待測標(biāo)本0.1毫升。3、加酶結(jié)合物：每孔0.1毫升，空白對照孔不加，充分混勻，37攝氏度溫育30分鐘。7四、實驗步驟4、洗板：棄去反應(yīng)孔板內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，用洗滌液注滿每孔，靜置5至10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液，拍干，如此反復(fù)5次，拍干。5、加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升，再加顯色劑B，每孔0.05毫升，充分混勻，置37攝氏度溫育15分鐘。6、終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。8五、實驗結(jié)果9六、注意事項1、洗板至關(guān)重要，應(yīng)避免洗滌液過量，又能充滿反應(yīng)微孔，洗板次數(shù)不應(yīng)少于5次。2、如任何試劑接觸皮膚和眼睛，應(yīng)用大量清水

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