土壤銨態(tài)氮的測定

土壤銨態(tài)氮的測定A納氏試劑比色法1方法提要土壤樣品中的nh4+用氯化鉀溶液提取，在堿性條件下與納氏試劑絡(luò)合生成黃色絡(luò)合物,進行比色測定。2適用范圍本方法適用于各類土壤銨態(tài)氮含量的測定。3主要儀器設(shè)備3.1分光光度計；往復(fù)式或旋轉(zhuǎn)式振蕩機，滿足180r/min±20r/min的振蕩頻率或達到相同效果；塑料瓶，200mL。4試劑4.1氯化鉀提取液［c(KCl)=2mol?L-i］：稱取149.1g氯化鉀溶于水，稀釋至1L；4.2酒石酸鈉溶液［Q(Na2C4H4O4^2H2O)=250g-L-1］：稱取25g酒石酸鈉(Na2C4H4O4^2H2O)溶于水，稀釋至100mL；4.3納氏試劑：稱取10.0g碘化鉀溶于5mL水中，另稱取3.5g二氯化汞溶于20mL水中(加熱溶解)，將二氯化汞溶液慢慢地倒入碘化鉀溶液中，邊加邊攪拌，直至出現(xiàn)微紅色的少量沉淀為止。然后加70mL300g?L-1氫氧化鉀溶液，并攪拌均勻，再滴加二氯化汞溶液至出現(xiàn)紅色沉淀為止。攪勻，靜置過夜，傾出清液貯于棕色瓶中，放置暗處保存；4.4阿拉伯膠溶液［10g"L-1］：稱取1g阿拉伯膠溶于100mL沸水中，加入2滴氯仿作為防腐劑(混濁時使其澄清后，傾出上部清液)，備用；4.5銨態(tài)氮標準貯備溶液［Q(N)=500pg-mL-1］：稱取1.910g氯化銨(優(yōu)級純，經(jīng)90°C干燥2h)，溶于水中，加入氯仿1mL,定容至1L；4.6銨態(tài)氮標準溶液［Q(N)=10pg?mL-1］：測定當天吸取銨態(tài)氮標準貯備溶液10.00mL,加水定容至500mL。5分析步驟：稱取10.0g土壤樣品放入200mL塑料瓶中，加入50.0mL2mol?L-1氯化鉀提取液，蓋緊瓶蓋，搖勻，在振蕩機上于20C?25C振蕩30min(振蕩頻率：180r/min±20r/min),立即過濾于50mL三角瓶中。吸取濾液5.0mL?lO.OmL于25mL容量瓶中，加水稀釋至20mL左右，加ImL250g?L-i酒石酸鈉溶液，充分搖動后靜置5min,使其與鈣、鎂離子絡(luò)合。加入5滴1%阿拉伯膠，搖動后加1mL納氏試劑，邊加邊搖動，然后定容至刻度。5min后在分光光度計上用490nm波長比色。銨態(tài)氮校準曲線繪制：吸取10gg?mL-1銨態(tài)氮標準溶液0，0.50，1.00，1.50，2.00,2.50mL于25mL容量瓶中，加入10mL氯化鉀浸提劑，加水稀釋至20mL左右，與待測液相同步驟進行顯色，以標準系列溶液的零濃度調(diào)節(jié)儀器零點進行比色，即為0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0gg?mL」銨態(tài)氮標準系列。繪制校準曲線或計算回歸方程。結(jié)果計算P-V-D銨態(tài)氮（N）,mg?kg-1= ——x1000mx103式中：P——查校準曲線或求回歸方程而得測定液中NH4+-N的質(zhì)量濃度，yg?mL-1；V 顯色液體積，mL；本試驗為25mL；D——分取倍數(shù)，50/（5?10）；103和1000 分別將gg換算成mg和將g換算為kg；m 試樣質(zhì)量，go平行測定結(jié)果以算術(shù)平均值表示，結(jié)果取整數(shù)。精密度平行測定結(jié)果允許相對相差＜10%.注釋1） 土壤銨態(tài)氮含量一般用新鮮樣品測定，如需以硝態(tài)氮加銨態(tài)氮反映無機氮含量，則可用過2mm篩的風干樣品測定，但需標明為風干基。2） 待測液中有硫化物時，可加鹽酸煮沸，趕除至無氣味為止；有機質(zhì)的顏色可加無銨活性碳在酸性條件下過濾除去。3） 為了除去酒石酸鈉中銨鹽雜質(zhì)，應(yīng)將其置于80?90°C的烘箱中干燥數(shù)小時，再檢查是否有銨離子。4） 加納氏試劑前，待測液必須調(diào)至中性，如果呈酸性時，則產(chǎn)生紅色的碘化汞沉淀，或出現(xiàn)其他各種顏色干擾測定。5）加阿拉伯膠保護劑量要準確，否則影響黃色的深淺（多加時色淺，少加時色深）。比色時若溶液出現(xiàn)桔紅色沉淀，應(yīng)減少吸液量，重做。顯色時黃色穩(wěn)定時間在30min左右，不能放置過久，否則有沉淀或黃色變淺的現(xiàn)象。B 靛酚藍比色法［土壤農(nóng)化分析方法，次氯酸鈉標定］1方法提要土壤浸出液中的nh4+在強堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍,溶液的藍色很穩(wěn)定，在NH4+-N濃度為0.05pg?mL-i?0.5pg?mL-i范圍內(nèi)，其深淺與NH4+-N含量成正比。反應(yīng)體系的pH應(yīng)為10.5?11.7之間。硝普鈉［硝基鐵氰化鈉，或稱亞硝?；迩杌翔F(Ill)酸鈉，Na2Fe(CN)5NO］是此反應(yīng)的催化劑，能加速顯色，增強藍色及其穩(wěn)定性。在20°C左右室溫時一般須放置1h后比色，完全顯色約需2h?3h。生成的藍色很穩(wěn)定，24h內(nèi)吸收值無顯著變化。比色時在625nm處測量吸收值。待測液中如有干擾的金屬離子，可用EDTA等螯合劑掩蔽。2適用范圍本方法適用于各類土壤銨態(tài)氮含量的測定3.主要儀器設(shè)備3.1分光光度計；3.2往復(fù)式或旋轉(zhuǎn)式振蕩機，滿足180r/min±20r/min的振蕩頻率或達到相同效果；3.3塑料瓶，200mL。4.試劑4.1酚溶液：10g苯酚(C6H5OH)和100mg硝普納［Na2Fe(CN)5NO?2H2O］溶于1L水中。此試劑不穩(wěn)定，須貯于棕色瓶,存放在4C冰箱中，用時須溫熱至室溫;注意硝普鈉有劇毒！!!4.2次氯酸鈉堿性溶液：10g氫氧化鈉(NaOH),7.06g磷酸氫二鈉(Na2HPO4?7H2O),31.8g磷酸鈉(Na3PO4?12H2O))和10mL次氯酸鈉dNaOCl)=5.25%,即含有效氯5%的漂白劑溶液］溶于1L水中。此試劑應(yīng)與酚溶液同樣保存；4.3掩蔽劑：酒石酸鉀鈉溶液［Q(KNaC4H4O6?AlOMdOOgL1］與EDTA二鈉溶液［Q(C1OH14O8N2Na2)=100g^L-1］等體積混合，每100mL混合液中加0.5mLNaOH溶液［c(NaOH)10 1482 2=10mol?L-1］,即得清亮的掩蔽劑溶液；4.4銨態(tài)氮標準貯備溶液［p(N)=100pg?mL-i］：稱區(qū)0.4717g烘干的硫酸銨［(NHJ2SO4，優(yōu)級純］溶于水，定容至1L；4.5銨態(tài)氮標準溶液】p(N)=5pg?mL-1］：測定當天將銨態(tài)氮標準貯備溶液用水準確稀釋20倍(例如5.00mL稀釋至100mL)；4.6氯化鉀提取液［c(KCl)=2mol?L-1］：稱取149.1g氯化鉀溶于水中，稀釋至1L；5分析步驟稱取1O.OOg土壤樣品放入200mL塑料瓶中，加入50.0mL2mol?L-1氯化鉀提取液，蓋緊瓶蓋，搖勻，在振蕩器機于20°C?25°C振蕩30min(振蕩頻率：180r/min±20r/min),過濾于50mL三角瓶中。吸取濾液2.0mL?10.0mL(含NH4+-N2pg?25pg)，放入50mL容量瓶中，用氯化鉀浸提劑補足至總體積為10mL，然后用水稀釋至30mL，依次加入5mL酚溶液和5mL次氯酸鈉堿性溶液，搖勻，在20OC左右室溫下放置1h后，加入1mL掩蔽劑以溶解可能生成的沉淀物，然后用水定容，用cm比色皿在625nm波長處進行比色。校準曲線繪制：分別吸取銨態(tài)氮標準溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL,放入50mL容量瓶中，各加氯化鉀浸提劑0mL,同上法顯色、定容。各瓶標準液的濃度相應(yīng)地為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5pg?mL-1。用標準系列溶液的零濃度調(diào)節(jié)儀器零點進行比色，測定吸收值，繪制校準曲線或計算回歸方程。6結(jié)果計算^Vi￡x1000mx103銨態(tài)氮(N^Vi￡x1000mx103式中：p——查校準曲線或求回歸方程而得測定液中NH4+-N的質(zhì)量濃度，昭?mL-1；V——顯色液體積，mL；本方法為25mL；D——分取倍數(shù)，50/(2?10)；103和1000 分別將gg換算成mg和將g換算為kg；m 土樣質(zhì)量，g7注釋土壤銨態(tài)氮含量一般用新鮮樣品測定，如需以硝態(tài)氮加銨態(tài)氮反映無機氮含量，則可用過2mm篩的風干樣品測定，但需標明為風干基。掩蔽劑應(yīng)在顯色后加入。如加入過早，會使顯色反應(yīng)很慢，藍色偏低；加入過晚，則生成的氫氧化物沉淀，可能老化而不易溶解。在20°C左右時放置1h即可加掩蔽劑。3）次氯酸鈉不太穩(wěn)定，配制前需標定NaOCl含量。所需試劑：碳酸氫鈉溶液［Q（NaHCO3）=96g?L-i］：稱取96g碳酸氫鈉，稍加熱促進其溶解定容到1L；淀粉溶液［10g?L-i］：稱取1g淀粉在60C下加熱使之溶解，定容到100m