藥物安全性評價和GLP實驗室

第17章藥品安全性評價和GLP試驗室廣州中醫(yī)藥大學藥學院藥理學教研室zhangxj@張曉君藥物安全性評價和GLP實驗室第1頁年份藥品（用途）毒性反應受害地域受害人數(shù)1889~1950甘汞（驅蟲、牙粉、通便）汞中毒歐、美、亞死亡兒童>585人1900~1949蛋白銀（抗炎、消毒）銀質從容癥歐、美>100人1930~1960醋酸鉈（頭癬）鉈中毒各國死亡>10000人1922~1970氨基比林（解熱鎮(zhèn)痛）粒細胞缺乏各國死亡>2082人1940硫代硫酸鈉金（風濕、哮喘）肝、腎、骨髓損害各國約1/3用藥者1935~1937二硝基酚（減肥）白內障歐、美萬人失明，1人死亡1937磺胺酏，二甘醇作溶劑（抗菌消炎）肝腎損害美國358人中毒，107人死亡1953非那西丁（解熱鎮(zhèn)痛）腎損害、溶血歐、美、加死亡500人，腎病人以上1954二磺二乙基錫（治疥瘡、粉刺耳）神經(jīng)毒性、腦炎、失明法國死亡110人，中毒270人1956三苯乙醇（治高脂血癥）白內障、陽痿、脫發(fā)美國>1000人1959~1961反應停（治妊娠反應）海豹樣畸形兒歐、美、日>10000人，死亡5000人1960異丙腎上腺素氣霧劑（平喘）嚴重心律失常、心衰英、美、澳死亡3500人1963~1972氯碘喹啉（治腸炎）骨髓病變、失明日本中毒>7856人，死亡率5%1933~1972已烯雌酚（治先兆流產(chǎn)）陰道腺癌（女）美國>300人1968~1979普拉洛爾（抗心律失常）角膜、心包、腹膜損害美國>2257萬人70年代至世紀末四咪唑(TMS)驅蟲藥遲發(fā)性腦病各國60年代到世紀末氨基糖苷類抗生素（抗感染）耳聾各國我國>100萬人耳聾關節(jié)炎鎮(zhèn)痛藥“萬絡”心肌梗塞和心臟猝死各國>6萬人20-二十一世紀重大藥害事件簡表藥物安全性評價和GLP實驗室第2頁藥品非臨床安全性評價產(chǎn)生背景國際經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）提出了新化學物上市前最低程度安全性評價項目制訂了一系列毒性試驗準則凡按此試驗準則進行毒理學試驗，組員國間相互認可和接收3藥物安全性評價和GLP實驗室第3頁第1節(jié)藥品非臨床安全性評價藥品非臨床安全性評價指在人臨床試驗之前毒理學試驗研究，即按照要求毒理學程序和方法評價藥品對機體產(chǎn)生有害反應，并外推到通常條件下應用藥品對人體和人群健康是否安全。研究內容：評價藥品毒性反應判斷劑量和時間與毒性關系：最小中毒量、最小致死量、毒性反應起始和連續(xù)時間確定藥品毒性靶器官、中毒機制、毒性反應性質與可逆性、毒性劑量與安全范圍4藥物安全性評價和GLP實驗室第4頁藥品非臨床安全性評價目標1.提供藥品安全性試驗數(shù)據(jù)，支持I期臨床研究。2.確定臨床試驗安全性起始劑量，以及可接收安全劑量范圍。3.經(jīng)過廣泛檢測，發(fā)覺任何潛在和未知毒性。4.在藥品開發(fā)中取得最大利益/風險性比率。5藥物安全性評價和GLP實驗室第5頁藥品非臨床安全性評價不足1.人與動物種屬差異，反應敏感性不一樣，甚至有質差異→假陽性、假陰性；如，沙利度胺。2.毒理學試驗給藥劑量較大，存在高濃度向低濃度外推不確定性。3.試驗動物數(shù)量有限，對發(fā)生率較低毒性難于發(fā)覺→小數(shù)量動物向大規(guī)模人群外推不確定性。4.試驗動物遺傳背景、身體情況一致，而臨床用藥人群個體差異較大。6藥物安全性評價和GLP實驗室第6頁

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致癌性遺傳毒性

生殖毒性

局部耐受性、過敏、依賴性、免疫毒性光敏和其它試驗等

了解毒性反應劑量、時間、強度、癥狀、靶器官及可逆性等，為臨床方案提供參考、預測出現(xiàn)毒性反應，制訂臨床防護辦法、確保受試者用藥安全

局部用藥毒性全身用藥毒性急性毒性長久毒性特殊毒性目

藥品毒理學藥物安全性評價和GLP實驗室第7頁第2節(jié)藥品安全性評價GLP試驗室非臨床安全性研究質量管理規(guī)范（goodlaboratorypracticefornonclinicallaboratorystudies,GLP）GLP法規(guī)頒布1999年10月，SDA頒布了《藥品非臨床研究質量管理規(guī)范（試行）》。6月，SFDA局長2號令《藥品非臨床研究質量管理規(guī)范》8藥物安全性評價和GLP實驗室第8頁GLP適用范圍各國GLP適用范圍不盡相同美國FDA——色素和食品添加劑、飼料添加劑、人用藥品、獸用藥品、生物制品、人用醫(yī)療器具、電子產(chǎn)品等經(jīng)濟合作與發(fā)展組織OECD——化學制品如工業(yè)化學品、人用藥品、獸用藥品、化裝品、食品添加劑及農(nóng)藥等中國SFDA——藥品藥物安全性評價和GLP實驗室第9頁GLP已成為國際上藥品安全性試驗研究共同遵照規(guī)范世界各國GLP即使各有特點，不過基本標準是一致提升藥品非臨床研究質量確保試驗數(shù)據(jù)真實性、完整性和可靠性最大程度地防止人為原因產(chǎn)生錯誤和誤差，盡可能在試驗早期發(fā)覺并修正確保臨床用藥安全實施GLP目標藥物安全性評價和GLP實驗室第10頁GLP基本精神

GLP基本精神在于：“怎樣降低人為誤差，以得到可信性高試驗數(shù)據(jù)”。降低系統(tǒng)誤差防止偶然誤差杜絕過失誤差試驗條件試驗系統(tǒng)試驗人員試驗操作試驗資料標準化規(guī)范化試驗數(shù)據(jù)和結果質量藥物安全性評價和GLP實驗室第11頁藥品GLP認證試驗項目單次和屢次給藥毒性試驗(嚙齒類)單次和屢次給藥毒性試驗(非嚙齒類)生殖毒性試驗(I段、II段、III段)遺傳毒性試驗(Ames、微核、染色體畸變、小鼠淋巴瘤試驗)致癌試驗局部毒性試驗免疫原性試驗安全性藥理依賴性試驗毒代動力學試驗

藥物安全性評價和GLP實驗室第12頁藥品GLP認證檢驗主要內容組織機構和人員試驗設施與管理儀器設備和試驗材料標準操作規(guī)程研究工作實施資料檔案其它(試驗技術現(xiàn)場考評、計算機系統(tǒng))申請試驗項目藥物安全性評價和GLP實驗室第13頁二、組織機構設置與職責三、機構人員組成情況、人員基本情況以及參加培訓情況14一、機構概要機構發(fā)展概況組織機構框架圖試驗設施平面圖GLP試驗室申請資料審查內容藥物安全性評價和GLP實驗室第14頁GLP試驗室申請資料審查內容（續(xù)）15四、機構主要人員情況機構責任人質量確保部門責任人專題責任人動物喂養(yǎng)管理責任人組織病理學檢驗部門責任人資料保管責任人供試品管理責任人其它責任人藥物安全性評價和GLP實驗室第15頁五、動物喂養(yǎng)區(qū)域及動物試驗區(qū)域情況動物設施面積和動物收容能力情況各動物喂養(yǎng)區(qū)平面圖動物喂養(yǎng)區(qū)人流、動物流、物品流、污物流、空氣流等流向圖環(huán)境條件飼料、飲水、墊料等動物用具起源與檢測功效試驗室、化學及生物污染特殊區(qū)域環(huán)境控制情況清潔劑、消毒劑、殺蟲劑使用情況試驗動物起源、質量合格證實和檢疫情況16GLP試驗室申請資料審查內容（續(xù)）藥物安全性評價和GLP實驗室第16頁資料審查內容（續(xù)）六、儀器、儀表、量具、衡器等七、機構主要儀器設備八、SOP（制訂、修改及廢棄）九、計算機系統(tǒng)運行和管理情況十、藥品安全性評價研究實施情況17藥物安全性評價和GLP實驗室第17頁GLP試驗流程制訂試驗方案。由項目責任人依據(jù)藥品特點、藥品安全性試驗指導標準和GLP實施要求制訂將試驗方案遞呈質量確保部門審查，同時檢驗以往SOP是否適應于該項試驗。試驗進行中各業(yè)務部門試驗工作統(tǒng)計、執(zhí)行試驗方案和SOP實施情況。18藥物安全性評價和GLP實驗室第18頁GLP試驗流程（續(xù)）總結匯報：搜集試驗統(tǒng)計、對資料和數(shù)據(jù)進行處理，計算統(tǒng)計學及生物學意義；歸納藥品毒性主要靶器官，及臨床上可能出現(xiàn)毒性反應。資料存檔：將試驗方案、各個步驟原始統(tǒng)計、各種標本及總結匯報保留于檔案部門。19藥物安全性評價和GLP實驗室第19頁軟件要求1.建立完善組織管理體系2.高素質工作人員隊伍3.對各項工作必須采取標準操作規(guī)程（SOP）4.對試驗全過程要求詳細進行統(tǒng)計5.對數(shù)據(jù)管理與統(tǒng)計分析要求6.組織嚴密試驗全過程監(jiān)督、檢驗和審查20藥物安全性評價和GLP實驗室第20頁硬件要求1.對試驗環(huán)境中各種設施結構、寬廣度、配置等有嚴格要求2.對試驗數(shù)據(jù)搜集、測定或分析等使用儀器設備以及控制設備內環(huán)境有嚴格要求21藥物安全性評價和GLP實驗室第21頁

GLP基本內容和要求

(一).研究課題組織與管理(二).對試驗設施和儀器設備要求與要求(三).標準操作程序(SOP)制訂和執(zhí)行(四).試驗設計方案(Protocol)及其主要內容(五).研究資料搜集、整理和匯報

WHOGLPTainingCourseCopyrightofNextCentury22藥物安全性評價和GLP實驗室第22頁

（一）研究課題組織和管理

1．業(yè)務／行政主管及其職責任命,指定和更換課題組長確保質量確保單位推行職能提供人力，物力，財力等方面確保確認各種錯誤或過失得以糾正對研究人員和質保單位之間爭議作出裁決WHOGLPTainingCourseCopyrightofNextCentury23藥物安全性評價和GLP實驗室第23頁2．課題組長及其職責-設計簽署試驗方案及其它正式文件而且注明日期。-確保全部試驗資料，包含意料之外試驗反應，都被準確地統(tǒng)計并核實。-當試驗過程中一些可能影響研究質量和結果一致性性未預料到情況發(fā)生時，及時采取辦法（行動）補救，而且馬上如實統(tǒng)計。-確保GLP各項要求都恪守執(zhí)行。確保全部原始資料、文件、試驗設計、標本及正式試驗匯報按檔案材料保留和管理。 簽署正式研究匯報，按照國家法規(guī)要求簽署恪守申明（ComplianceStatement）。24藥物安全性評價和GLP實驗室第24頁3．質量確保單位及其職責

保留試驗機構MasterSchedule，Protocols和SOPs（各1份）。研究進行期間對研究課題屢次監(jiān)察，以確保研究一致性。統(tǒng)計和簽署每次監(jiān)察結主要問題和發(fā)覺馬上口頭知會課題長或提交書面匯報，陳說所發(fā)覺問題以及采取對應辦法審定無未經(jīng)同意或統(tǒng)計偏離Protocol和SOP情況發(fā)生或出現(xiàn)審校正式試驗匯報，確保匯報中對研究方法SOP描述準確無誤，試驗結果確實是原始資料整理分析結果擬寫和簽署附在正式匯報質量確保申明25藥物安全性評價和GLP實驗室第25頁（二）試驗設施和儀器設備要求要求

1.試驗設施試驗機構具備足夠試驗動物房間或者其它試驗系統(tǒng)區(qū)域，以使（1）不一樣種屬動物或試驗系統(tǒng)分別飼育（2）不一樣課題分離飼育（3）Quarantine動物（4）建立常規(guī)或尤其動物飼育系統(tǒng)。試驗機構應有足夠動物房間或其它試驗系統(tǒng)區(qū)域，以分別隔離那些用已知有生物危害試驗系統(tǒng)、受試物、對照物或參考物，包含易揮發(fā)物質、氣溶膠、放射活性材料以及感染性（傳染性）微生物。隔離房間或區(qū)域應有診療、處理和控制試驗系統(tǒng)／動物疾病裝置。應有效地隔離有疾病、疑有疾病、或疾病攜帶試驗系統(tǒng)／動物房間或區(qū)域。

26藥物安全性評價和GLP實驗室第26頁1.試驗設施（續(xù))試驗設施應有和排放污染水、土壤或其它材料能力。如存養(yǎng)動物,則應有搜集和處理全部動物廢物和排泄物能力，或者含有安全消毒裝置。試驗設施應按試驗設計方案要求，具備調控環(huán)境條件如溫度、溫度、光線等能力。WHOGLPTainingCourseCopyrightofNextCentury27藥物安全性評價和GLP實驗室第27頁2.儀器設備關鍵儀器設備(criticalequipment)常規(guī)儀器設備安全設施與設備儀器設備認證。計量審計及日常維修保養(yǎng)28藥物安全性評價和GLP實驗室第28頁

（三）SOP制訂和執(zhí)行

1.種類和制訂過程標準操作程序（StandardOperatingProcedure,SOP）

凡是試驗設計方案中沒有詳細說明常規(guī)方法和操作程序，都應該制SOP。GLP明確要求，最少需要就以下詳細方法和操作步驟制訂標準操作程序:

1.試驗系統(tǒng)／動物準備 2.試驗系統(tǒng)／動物喂養(yǎng)管理 3.受試物、對照物和參考物接收、判別、貯放、配制，以及采樣方法； 4.對試驗系統(tǒng)觀察; 5.（試）驗和測試（定）方法29藥物安全性評價和GLP實驗室第29頁1.種類和制訂過程(續(xù))6.

垂（頻）死中死亡試驗系統(tǒng)／動物處理；7.試驗系統(tǒng)尸檢或者尸解；8.標本搜集采取與標識；9.組織病理學檢驗；10.文件資料處理、存放和檢索；11.儀器設備校正（準）和保養(yǎng)；12.試驗系統(tǒng)轉移（運）、?。ㄌ妫┐团袆e方法。

30藥物安全性評價和GLP實驗室第30頁

2.SOP格式和內容

－每一個標準操作程序都必須有各自編號（碼），而且署明部門、版本和副本數(shù)目；－標準操作程序名稱（題目）和生效日期；－審批者和共（會）簽者包含質量確保部門責任人簽字及簽署日期；－該標準操作程序目標，涵蓋范圍,以及文中所用術語定義；－材料，操作程序和過程;－轉換和計算方法；－匯報要求，并將文中“材料”部分和匯報格式（慣用表格式）作為標準操作程序之附件；－分發(fā)和保留要求與要求；31藥物安全性評價和GLP實驗室第31頁2.SOP格式和內容(續(xù))－負責此標準操作程序有效性，而且監(jiān)督其恪守執(zhí)行人員；－該標準操作程序復審和修訂計劃；－意外事件補救對策略；－保密要求；－參考文件和附件，包含各種表格。32藥物安全性評價和GLP實驗室第32頁（四）試驗設計方案及其主要內容

試驗設計方案(Protocol)主要內容應該包含:

－課題名稱和研究目標； －受試物、對照物和參考物名稱、化學文摘號（CAS）,或者其它代碼； －試驗委托者（確保者）和實（試）驗實施機構名稱和詳細地址： －試驗起始和終止完成日期； －試驗動物/試驗系統(tǒng)選擇及其理由； －盡可能地寫明試驗系統(tǒng)種屬（系）、年紀、性別，以及試驗系統(tǒng)起源；

33藥物安全性評價和GLP實驗室第33頁（四）試驗設計方案及其主要內容(續(xù))－試驗系統(tǒng)判別方法和判別程序；－描述詳細試驗設計，包含控制偏倚方法；－說明試驗期間所用飲料，溶劑、以及用以助溶或混懸其它材料。對于飲料中可能出現(xiàn)污染物，要詳細說明這些污染物特征，可能影試驗結果含量（濃度），以及試驗過程中能夠允許含量（濃度）；－染毒路徑及其選擇理由；－染毒劑量/濃度單位。受試物、對照物和參考物給予方式和次數(shù)；34藥物安全性評價和GLP實驗室第34頁（四）試驗設計方案及其主要內容(continue) －試驗、分析和測定（量）方法和次數(shù)；－需要保留統(tǒng)計和資料；－委托者（確保者）和課題組長準備簽署日期；－對研究中所用統(tǒng)計處理方法加以說明。35藥物安全性評價和GLP實驗室第35頁（五）研究資料搜集、整理和匯報

文字統(tǒng)計(包含表格)1原始統(tǒng)計應該用不裉色筆（最好是用黑色）及時統(tǒng)計,字跡應清楚易認。2寫明觀察日期和統(tǒng)計日期（最好為同一天），試驗觀察者須在每頁上簽字。3不得用各種涂改液。4不準涂改重描（Re--Writes），應重寫。5允許改錯，但只能用單線斜線在需更正處，而且署名、署日期，說明更正原因或理由（慣用代碼示之）。6必須用裝訂成冊試驗統(tǒng)計本。7標準上不得有空白頁。全部空頁（處）要斜劃注明“空白”，或者在最終一頁加以尤其說明。

36藥物安全性評價和GLP實驗室第36頁（五）研究資料搜集、整理和匯報(續(xù)) 8.如某部分原如資料與多項課題相關，能夠復?。ㄖ疲└北?。但每份副本均須注明“原樣副本”（普通蓋章），由復?。ㄖ疲┤耸鹈褪鹑掌诙艺f明原件在何處存放。自動搜集原始資料 1自動統(tǒng)計各種資料，應逐一記統(tǒng)計日期、時間和儀器操作人。 2如需改動，一樣不準原統(tǒng)計上“涂改”（Obscure）。要注明改動理由、改感人并署明改動日期。

37藥物安全性評價和GLP實驗室第37頁（六）正式試驗匯報基本內容和要求

正式試驗匯報（FinalReport）。標準上應有以下項目和內容：

1、試驗實施機構名稱和地址：實（試）驗起如日期、完成日期或者終（停）止日期。2、設計方案中確定研究目標和程序以及研究過程中設計方案任何修改和變更。3、用于分析試驗數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計方法（必須與設計方案對應部分一致）。4、受試物、對照物和參考物名稱，化學文摘號或其它編碼。這些物質強度、純度、組成及其它理化特征，以及它們在試驗條件下穩(wěn)定性和溶解度。

38藥物安全性評價和GLP實驗室第38頁（六）正式試驗匯報基本內容和要求(續(xù))5、描述說明實（試）驗方法、、試驗系統(tǒng)和染毒劑量。對于試驗系統(tǒng)描述應包含動物數(shù)目、性別、體重范圍、種屬（系）、年紀和起源，以及標識和判別動物方法等；染毒劑量應同時說明劑量、給毒次數(shù)和間隔時間，染毒路徑和連續(xù)時間等。6、描述和說明全部可能影響數(shù)據(jù)資料質量和一致性環(huán)境條件原因。7、課題組長、業(yè)務主管和全部參加課題專業(yè)人員姓名。8、數(shù)據(jù)資料轉換、計算及統(tǒng)計處理。資料分析與總結，以及由資料分析而得出結論。39藥物安全性評價和GLP實驗室第39頁（六）正式試驗匯報基本內容和要求(續(xù))

9、課題組全部專業(yè)人員，包含委托或確保單位代表、在資料或標本搜集之后參加分析和評價專業(yè)人員姓名，簽字和簽署日期。10、標本、原始資料和正式匯報和存放地點。11、質量確保單位申明（Statement）。40藥物安全性評價和GLP實驗室第40頁（七）研究資料保管、存貯和檢索

1.指定檔案保管人，而且在組織機構圖上反應出來。 2.確定檔案材料設施、區(qū)域、或者機構。 3.明確有權進出檔案材料保管區(qū)域人員，限制其它人進出該區(qū)域。 4.建立來該登記制度，借閱檔案材料要嚴格登記。 5.建立便于檢索索引系統(tǒng)。 6.分類管理各類檔案材料，嚴格執(zhí)行保留其限要求。 7.保管區(qū)域環(huán)境條件要適宜于檔案材料長久保留，應有防/火設備和防蟲蛀辦法，以及緊急情況下轉移疏散方案。

41藥物安全性評價和GLP實驗室第41頁（七）研究資料保管、存貯和檢索(續(xù))EPA(FIFRA)-要求從以下三條中選擇最長時間為保留期限：1、用于向報審產(chǎn)品研究或上市研究檔案，在全部相關研究全部結束之前，都應妥善保管；2、報審自向正式遞交報審之日起，最少保留五年；3、如該項研究未用于報審，則從研究結束或終止之日起最少存二年。EPA(TSCA)-1、除濕（鮮）標本外，自最終試驗規(guī)則有效起，最少保留；2、商討方案“(NegotiatedTestAgreement)”自該方法案公布之日起，最少保留; 3.其它研究檔案材料，從向政府管理部門遞交正式研究結果之日算，最少保留5年。

42藥物安全性評價和GLP實驗室第42頁（七）研究資料保管、存貯和檢索(續(xù))FDA（非臨床研究）－要求從以下三條中擇最短時間為規(guī)范保留期限：1、用來支持或補充已經(jīng)同意研究和上市產(chǎn)品檔案材料，自同意之日起，最少保留2年；2、研究檔案材料，自遞交正式申請之日起，最少保留5年；3、未能作為報審材料檔案，在實（試）驗結束或終止后，再保留5年以上。43藥物安全性評價和GLP實驗室第43頁試驗設計目標

1.有目標、有計劃、有步驟地進行試驗。

2.最大程度地降低試驗誤差。

3.節(jié)約時間、樣本、經(jīng)費開支，降低人力物力財力，取得較高效率。第3節(jié)試驗設計隨機、對照、重復標準“預事則立，不預則廢”藥物安全性評價和GLP實驗室第44頁試驗設計標準對照標準：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，判別處理和非處理原因差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、本身對照隨機標準：

-對照組和處理組除處理原因不一樣外，其余應全部相同。

-動物試驗隨機分組；觀察切片也應隨機選擇視野重復標準：

-隨機標準可排除大部分非處理原因影響，但不能全部消除；所以，有必要重復，以排除偶然原因影響。

-表現(xiàn)為一定試驗樣本數(shù)（人、動物、細胞株）