生化實驗基本操作要求

關(guān)于生化實驗基本操作要求第1頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五一.生物化學(xué)實驗基本操作——玻璃儀器的洗滌洗滌干凈的標準：在生化實驗中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。第2頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五㈠常用的洗滌方法：1.一般儀器（如燒杯、試管等）：

可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。

2.容量分析儀器（如吸量管、容量瓶、滴定管等）：不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時用自來水多次沖洗，細心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。（1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；（2）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡4~6小時，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥。第3頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

3.粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，然后用自來水沖洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血漿溶解，然后再依次用1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗；（3）以上二法如達不到清潔要求，可浸泡于重鉻酸鉀洗液4~6小時，再用大量自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗2~3次。4.新購置的玻璃儀器:應(yīng)先置于1~2%稀鹽酸溶液中浸泡2~6小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗2~3次。第4頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

凡用過的玻璃儀器，均應(yīng)立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，待后按常規(guī)處理。

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二.生物化學(xué)實驗基本操作——吸量管的使用吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。㈠吸量管：生化實驗中常用的有三種，最常用的是刻度吸量管。第6頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

1.刻度吸量管：⑴刻度吸量管的種類：①按容量規(guī)格來分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達移取量的0.1~1%。通常將管身標明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推。②按“零”點位置來分，有“0”點在吸量管上端的（即讀數(shù)從上而下逐漸增大），也有“0”點在吸量管下端的（讀數(shù)從下而上逐漸增大)。兩種標示方法，在使用時各有方便之處。③按刻度方法來分，刻度吸量管也有兩種，一種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應(yīng)吹出殘留在吸量管尖端的少量液體，另一種是刻度不刻到尖端的。第7頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

⑵刻度吸量管的正確使用方法：用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動吸量管，使試液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點與吸量管的刻度線相齊為止。第8頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊，松開食指讓液體流出。液體流完后再等15秒鐘，捻動一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去）。第9頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

⑶使用刻度吸量管的注意事項：①選擇適當規(guī)格的吸量管：吸量管的最大容積應(yīng)等于或略大于所需容積（ml數(shù)）。②仔細看清吸量管的刻度情況：刻度是否包括吸量管尖端的液體？讀數(shù)方向是從上而下，還是從下而上？③拿吸量管時，刻度一定要面向自己，以便讀數(shù)。④吸取試劑時應(yīng)注意三點：一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體，二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。第10頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

⑤按吸量管上口時應(yīng)該用食指，不能用拇指。⑥吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血清等)時，除選用合適的吸管(奧氏管)外，應(yīng)注意拭凈管尖附著的液體，盡量減慢放液速度(用食指壓力控制)，待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。⑦使用的吸量管應(yīng)干凈、干燥無水。如急用而又有水時，可用少量欲取試劑沖洗3次，以免試劑被稀釋。第11頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

㈡定量吸(移)液器(微量加樣器)：

定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前，因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。1.定量吸液器的優(yōu)點：使用方便，取、加樣迅速，計量準確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可）。第12頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

2.定量吸液器的類型：有兩種類型。⑴固定式：只能取加一定容量的試劑，不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10μl、20μl、25μl、30μl、50μl、100μl、200μl、250μl、300μl、400μl、500μl、1000μl等。第13頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

⑵可調(diào)式：在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為50～200μl的可調(diào)式定量吸液器，可以在50到200μl的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設(shè)計容許的各種取加樣容量（60μl、85μl、110μl、170μl、200μl等）。一般來講，固定式吸液器比較準確，可調(diào)式吸液器使用較為方便。第14頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

3.定量吸液器的使用方法：⑴選擇適當?shù)奈浩鳌Ｎ呵跋劝盐焯自谖苌?，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴密。⑵持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。⑶取樣(吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復(fù)原，取樣即告完成。第15頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

⑷排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應(yīng)適當延長）。然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方可釋放按鈕，使其恢復(fù)到初始位置。⑸吸液器用后應(yīng)及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)（以防干涸），待實驗結(jié)束后集中仔細清洗。第16頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

三.生物化學(xué)實驗基本操作——溶液的混勻

㈠混勻的目的：⒈使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進行反應(yīng)；⒉使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。

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㈡混勻的方法通常有以下幾種：⒈使盛器作離心運動。⒉左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運動。⒊利用旋渦混合（振蕩）器混勻。⒋不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。第18頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

㈢混勻的注意事項：⒈防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。⒉嚴禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。第19頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五

四.生物化學(xué)實驗基本操作——離心機的使用

離心法是分離沉淀的一種方法。它是利用離心機轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力，使比重較大的物質(zhì)沉積在管底，以達到與液體分離的目的。因液體在沉淀的上部，故稱清亮的液體部分為上清液。

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電動離心機的使用方法：1.將欲離心的液體，置于離心管或小試管內(nèi)。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機的套管相匹配。2.取出離心機的全部套管，并檢查套管底部是否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必須取出，漏孔應(yīng)該用蠟封?。?。檢查合格后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，然后連套管一起分置于粗天平的兩側(cè)，通過往離心管與套管之間滴加水來調(diào)節(jié)兩邊的重量使之達到平衡。第21頁，共23頁，2022年，5月20日，8點37分，星期五