LUMINEX技術(shù)原理及應(yīng)用

Luminex的基本原理及應(yīng)用傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分析主要采用雙抗體夾心ELISA法。此法長期以來被視為蛋白質(zhì)定量分析的“標(biāo)準(zhǔn)方法”。ELISA可以用來準(zhǔn)確測定大批量生物樣品，但每次實(shí)驗(yàn)只能分析一個(gè)目標(biāo)分子，而不具備同時(shí)分析多種目標(biāo)分子的能力。在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展出的luminex技術(shù)，不僅同樣通過雙抗體選擇而具有高特異性，同時(shí)也具有ELISA的高通量、操作簡便、測量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，而且可以在一次實(shí)驗(yàn)中完成對多種目標(biāo)分子的分析，從而改變了過去的分析模式，建立了更加高效快速的分析平臺。Luminex技術(shù)原理，在近年發(fā)表的文章中已有過詳細(xì)的介紹和說明。Luminex技術(shù)應(yīng)用微球和流式細(xì)胞儀的原理。微球內(nèi)部含有三種熒光免疫熒光，通過熒光不同的比例可以區(qū)分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。因此，利用微球技術(shù)，可以同時(shí)檢測高達(dá)500個(gè)蛋白或基因。該技術(shù)利用熒光編碼的微球共價(jià)交聯(lián)單克隆抗體，與被測定的目標(biāo)分子結(jié)合后，加入熒光素標(biāo)記的檢測抗體，再通過激光掃描熒光編碼來識別單個(gè)微球和測量“檢測熒光”強(qiáng)度來確定被測分子的濃度。在使用相同抗體對的條件下，luminex技術(shù)的測量結(jié)果在準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達(dá)到相似的水平。Luminex應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對不同目標(biāo)分子的特異性抗體，不同的微球在一定程度上可以自由組合，這樣在一次實(shí)驗(yàn)中可以同時(shí)完成多個(gè)目標(biāo)分子的分析。多目標(biāo)分子的同時(shí)測定可以大大減少生物樣品的消耗量，節(jié)省成本和測定時(shí)間，并且使多種目標(biāo)分子之間相關(guān)性的分析更加準(zhǔn)確。很多公司已經(jīng)開始提供Luminex試劑盒，用于基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)研究以及臨床檢測。目前，Luminex試劑盒已經(jīng)可以檢測500多種蛋白質(zhì)分子，包括細(xì)胞因子、激素、自身抗體、腫瘤標(biāo)志物等。Luminex常見問題及解答luminex應(yīng)用于哪些領(lǐng)域？生物醫(yī)學(xué)研究，生物標(biāo)記物開發(fā)，臨床檢測等領(lǐng)域°Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。LUMINEX敏感性如何？靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對于同樣的抗體對,Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級。對不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的？血清、血漿是常用的樣本，每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個(gè)蛋白。從各種細(xì)胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測，制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達(dá)信息？檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前最高可以達(dá)到50個(gè)左右，基因檢測最高達(dá)500個(gè)。如何保證檢測結(jié)果的特異性？檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司，產(chǎn)品經(jīng)過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。同時(shí)，我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗(yàn)、嚴(yán)格的操作程序和質(zhì)量控制體系。客戶自己提供抗體，是否可以進(jìn)行LUMINEX檢測？Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個(gè)配套的特異性抗體。我們公司具有開發(fā)Luminex試劑盒的經(jīng)驗(yàn)。但是，需要一系列的開發(fā)工作才能保證結(jié)果的特異性、重復(fù)性和可靠性。除了蛋白，LUMINEX技術(shù)是否還可以用于其它指標(biāo)的檢測？可以用于基因表達(dá)，基因多態(tài)性和HLA配型分析。檢測周期多久？視待測蛋白的種類、數(shù)量和標(biāo)本數(shù)量定。一般來說，檢測一組蛋白（1-50個(gè)，視蛋白種類定）和一組標(biāo)本（多達(dá)360個(gè)標(biāo)）需要3-4小時(shí)的操作時(shí)間及基本數(shù)據(jù)分析。但是，檢測周期也取決于公司當(dāng)時(shí)的工作量。一般來說，從標(biāo)本收到起，檢測應(yīng)在1-2周完成；但是部分蛋白試劑盒需要收到訂單后從美國進(jìn)口，檢測周期可能會(huì)延長到4-5周。如何判定LUMINEX數(shù)據(jù)表達(dá)水平差異有無意義？表達(dá)差異主要取決于標(biāo)本的性質(zhì)和數(shù)量，我們公司為客戶提供專業(yè)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)服務(wù)。LUMINEX實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀的優(yōu)劣比較？Luminex技術(shù)是流式細(xì)胞儀和微球相結(jié)合的蛋白、核酸檢測技術(shù)，檢測對象是蛋白質(zhì)、DNA等大分子。普通流式細(xì)胞儀主要用于檢測整體細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)情況。Luminex檢測蛋白和標(biāo)本數(shù)目大，是一種高通量檢測技術(shù)。普通流式細(xì)胞儀每次只能檢測幾種蛋白分子，而且檢測速度較慢，不適合高通量分析。由此可見，兩種方法應(yīng)用方向有很大差別。報(bào)告的格式如何？報(bào)告以xcel表格形式，包括每種蛋白在每個(gè)標(biāo)本中的表達(dá)量。公司也可以為客戶提供數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。完成一個(gè)LUMINEX的實(shí)驗(yàn)，需要的細(xì)胞的量是多少？至少10ul的血清、血漿，蛋白提取物，或50-100萬細(xì)胞。如何控制LUMINEX檢測的質(zhì)量？我們對每一次檢測都設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，并設(shè)定內(nèi)參進(jìn)行校正。我們會(huì)定期做儀器校正，檢測精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以確保檢測結(jié)果的可靠性。實(shí)驗(yàn)失敗有幾種原因?從實(shí)驗(yàn)室角度看，成敗原因包括試劑盒的質(zhì)量，待測樣品稀釋倍數(shù)；待測蛋白質(zhì)低于儀器檢測底限，實(shí)驗(yàn)操作程序。從客戶角度看，成敗取決于樣品制備，保存和運(yùn)輸是否恰當(dāng)。我們公司可以提供規(guī)范操作程序，供客戶參考。得到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果后,可以進(jìn)行那些研究的工作?可進(jìn)行多方面的研究，例如：觀察不同實(shí)驗(yàn)條件對待測蛋白含量的影響，可進(jìn)行藥物作用靶點(diǎn)研究，不同人群血樣生物標(biāo)記物的研究，健康評估，疾病診斷，指導(dǎo)治療等。經(jīng)過分析后，若得到幾百個(gè)感興趣的基因或蛋白，如何對這些基因做功能分類或者Pathway相關(guān)分析呢？分析方法與其它技術(shù)平臺一樣，我們公司可以提供全套有償服務(wù)。如何考慮LUMINEX重復(fù)實(shí)驗(yàn)的問題？我們每次都會(huì)對使用的標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)參做重復(fù)性測定，同時(shí)也建議對每份樣本進(jìn)行重復(fù)2次測定。在進(jìn)行LUMINEX實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于經(jīng)費(fèi)的限制，是否可以把多個(gè)樣品進(jìn)行混合以消除樣品的個(gè)體差異后再上LUMINEX檢測？不建議這么做。多個(gè)樣品做檢測，計(jì)算平均值和誤差才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如果多個(gè)樣品混合后測定只能算1份樣品。客戶是組織的樣品，準(zhǔn)備自己提取樣品，請問樣品提取方面有沒什么技術(shù)要求？需要采用對抗原抗體反應(yīng)，或者蛋白質(zhì)抗原性沒有抑制作用的提取液進(jìn)行提取，避免采用會(huì)造成蛋白質(zhì)變性的試劑，如高濃度的尿素或者鹽酸胍等。需要能完全提取待測蛋白質(zhì)，否則對結(jié)果會(huì)造成誤判。提取以后需要怎么保存，怎么運(yùn)輸？建議保存于-80度。避免反復(fù)凍融?？捎酶杀蛘咧辽儆帽\(yùn)輸。LUMINEX的假陽性率是多少？技術(shù)性的假陽性率非常低，小于1%。生物假陽性率取決于每個(gè)蛋白的生物學(xué)特征?？砷_展此項(xiàng)目的臨床科室有哪些？目前我公司擁有的世界最先進(jìn)的高通量液相芯片檢測技術(shù)，在國內(nèi)僅有3臺。是否可以將同一癥狀的病例混合后抽提,看共性表達(dá)？可以?；旌虾蟮臉悠穼⒈灰曌鲉我粯悠愤M(jìn)行檢測。服務(wù)流程如何？

幫助客戶制定檢測方案f樣品檢測f結(jié)果分析f報(bào)告出具f可為客戶提供更深層次的服務(wù)(實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)分析、論文撰寫與發(fā)表)如何訂購您們的服務(wù)？通過咨詢，協(xié)商檢測方案，然后付費(fèi)或簽訂合同/r/LUMINEX蛋白檢測平臺服務(wù)項(xiàng)目一、細(xì)胞因子、化學(xué)因子類：6Ckine/CCL2BCA-1/CXCL13CTACK/CCL27皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子EGF表皮生長因子ENA-78/CXCL5中性粒細(xì)胞Eotaxin嗜酸細(xì)胞活化趨化Eotaxin-2/CCL24/MPIF-2嗜Eotaxin-3/CCL26嗜酸細(xì)胞活激活蛋白-78因子酸細(xì)胞活化趨化因子-2化趨化因子-3FGF-2成纖維細(xì)胞生長因子Flt-3ligandFMS樣酪氨酸激Fractalkine人神經(jīng)趨化因子GCP2/CXCL6人中性粒細(xì)胞-2酶3配體趨化蛋白2G-CSF粒系集落刺激因子GM-CSF粒-單系集落刺激GRO生長相關(guān)基因蛋白HCC-1/3/CCL14a/0因子I-309/CCL1IFNa2干擾素a2IFNy干擾素YIL-10白介素-10IL-11白介素-11IL-12(p40)白介素-12IL-12(p70)白介素-12IL-13白介素-13IL-15白介素-15IL-16白介素-16IL-17白介素-17IL-1ra白介素-1raIL-1a白介素1aIL-1p白介素-10IL-2白介素-2IL-20白介素-20IL-21白介素-21IL-23白介素-23IL-28a白介素-28aIL-29白介素-29IL-3白介素-3IL-33/NF-HEV(mature)白IL-4白介素-4IL-5白介素-5介素-33IL-6白介素-6IL-7白介素-7IL-8白介素-8IL-9白介素-9IP-10干擾素誘導(dǎo)蛋白-10I-TAC/CXCL11干擾素誘導(dǎo)TLIF白血病抑制因子Lymphotactin淋巴細(xì)胞趨化細(xì)胞趨化因子蛋白MCP-1(MCAF)單核細(xì)胞趨化MCP-2單核細(xì)胞趨化蛋白2MCP-3/CCL7單核細(xì)胞趨化MCP-4單核細(xì)胞趨化蛋白4蛋白1蛋白3M-CSF巨噬細(xì)胞集落刺激因MDC/CCL22巨噬細(xì)胞來源MIG/CXCL9趨化因子9MIP-1D(MIP-5/CCL15)巨噬

子的趨化因子細(xì)胞炎性蛋白-1DMIP-1a巨噬細(xì)胞炎性蛋白MIP-1p巨噬細(xì)胞炎性蛋白MIP-30/CCL19巨噬細(xì)胞炎性MIP-3a/CCL20巨噬細(xì)胞炎性-1a-1P蛋白3p蛋白3aMMP-1基質(zhì)金屬蛋白酶-1MMP-2基質(zhì)金屬蛋白酶-2MMP-3基質(zhì)金屬蛋白酶-3MMP-7基質(zhì)金屬蛋白酶-7MMP-9基質(zhì)金屬蛋白酶-9MMP-10基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-12基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-13基質(zhì)金屬蛋白酶-10-12-13NAP-2/CXCL7中性粒細(xì)胞趨PDGF-AA血小板衍生生長PDGF-AB/BB血小板衍生生RANTES分泌趨化因子化蛋白2因子AA長因子AB/BBSCD30可溶性CD30SCD40L可溶性CD40LSCF干細(xì)胞因子SDF-1a+p/CXCL12基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a+psEGFR可溶性表皮生長因子sgp130可溶性糖蛋白130SIL-1RI可溶性白細(xì)胞介素-1SIL-1RII可溶性白細(xì)胞介素-1受體受體I受體IIslL-2Ra可溶性白細(xì)胞介素-2SIL-4R可溶性白細(xì)胞介素-4SIL-6R可溶性白細(xì)胞介素-6sRAGE可溶性晚期糖基化受體a受體受體中產(chǎn)物受體sTNFRI可溶性腫瘤壞死因sTNFRII可溶性腫瘤壞死因sVEGFR2可溶性血管內(nèi)皮sVEGFR3可溶性血管內(nèi)皮子受體I子受體II生長因子受體2生長因子受體3sVEGFRI可溶性血管內(nèi)皮TARC/CCL17胸腺活化調(diào)節(jié)TGFa轉(zhuǎn)化生長因子aTIMP-1組織金屬蛋白酶抑制生長因子受體I趨化因子劑-1TIMP-2組織金屬蛋白酶抑制TIMP-3組織金屬蛋白酶抑制TIMP-4組織金屬蛋白酶抑制TNFa腫瘤壞死因子a劑-2劑-3劑-4TNF0腫瘤壞死因子pTPO甲狀腺過氧化物酶TRAIL/TNFSF10TSLP人胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生產(chǎn)素VEGF血管內(nèi)皮生長因子二、細(xì)胞信號通路類：ActiveCaspase3活化半胱ActiveCleavedPARP活化切Akt/PKB(Ser473)磷酸化蛋Akt/PKB(Thr308)磷酸化蛋胺酸蛋白酶3割的多腺苷二磷酸多聚酶白激酶B白激酶BATF2(Thr69/71)活化復(fù)制因BAD(Ser112)CD3￡(panTyr)c-Jun(Ser73)子2

c-Kit(panTyr)CleavedPARPc-Met/HGFR(panTyr)CREB(Ser133)EGFReceptor(panTyr)表皮Erb-B2/HER2(panTyr)第二ERK/MAP Kinase 1/2GAPDH生長因子受體人體表皮生長因子受體(Thr185/Tyr187)H2A.X(Ser139)HSP27(Ser78)IGF1R(panTyr)胰島素樣生長因子1受體IRS1(panTyr)kBa(Ser32)JNK(Thr183/Tyr185)LAT(panTyr)Lck(panTyr)MEK1(Ser222)MKK6(Ser207/Thr211)MSK1(Ser212)p21p38(Thr180/Tyr182)p53(Ser15)p53(Ser46)p70S6Kinase(Thr412)PDGFReceptora(panTyr)Rsk1(Ser380)STAT1(Tyr701)STAT1(Tyr707)STAT2(Tyr690)STAT3(Ser727)STAT3(Tyr705)STAT5A/B(Tyr694/699)STAT6(Tyr641)Syk(panTyr)ZAP-70(panTyr)三、神經(jīng)因子類：CortisolApoAlApoClllApoEBDNFCathepsinD組織蛋白酶DComplementC3ComplementC4ComplementFactorHCreactiveprotein(CRP)C-反應(yīng)蛋白MelatoninMIP-4MPONCAMNeurotensinOrexinAOxytocinPAI-1(total)PDGF-AAPDGF-AB/BBPEDFPrealbuminRANTESSAPsICAM-1SubstancePsVCAM-1al-Antitrypsina2-Macroglobulina-MSHp-Endorphin四、骨代謝因子類：RANKLAdiponectin脂聯(lián)素IL-1pACTHIL-6InsulinLeptin瘦素Osteopontin(OPN)骨橋蛋白OsteocalcinOsteoprotegerinPTHTNFa腫瘤壞死因子a五、皮膚生長調(diào)控因子:

CortisolFibronectinHSAInvolucrinLPSKeratin-6Keratin-1Keratin-10六、凋亡及敗血癥因子：MIF巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子PAI-1(Total)sFassFasLslCAM-1sVCAM-1七、免疫球蛋白分型：IgAIgG1IgG2IgG3IgG4IgM八、腫瘤生物標(biāo)記物：CA-125癌抗原125IGF-II胰島素樣生長因子2Leptin瘦素MIF巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子Osteopontin(OPN)骨橋蛋白Prolactin泌乳刺激素MMP-1基質(zhì)金屬蛋白酶-1MMP-2基質(zhì)金屬蛋白酶-2MMP-9基質(zhì)金屬蛋白酶-9CA15-3癌抗原檢測15-3SerumamyloidA血清淀粉樣蛋白ACA19-9癌抗原19-9TGFa轉(zhuǎn)化生長因子aCathepsinD組織蛋白酶DTNFa腫瘤壞死因子aVEGF血管內(nèi)皮生長因子VEGFR2血管內(nèi)皮生長因子0-2-Microglobulin0-2微球蛋CEA癌胚抗原Creactiveprotein(CRP)C-受體2白反應(yīng)蛋白E-cadherin上皮型鈣黏附蛋白EGFR表皮生長因子受體Eotaxin嗜酸細(xì)胞活化趨化因子ER-a雌激素受體aFas(CD95orApo-1)腫瘤壞死因子受體超家族成員6Ferritin鐵蛋白Fibrinogen纖維蛋白原AFP甲胎蛋白Follistatin卵泡素G-CSF集落刺激因子3Haptoglobin結(jié)合珠蛋白HER-2(erbB2)第二人體表皮生長因子受體ICAM-1細(xì)胞間粘附分子-1IGFBP-1胰島素樣生長因子IGFBP-2胰島素樣生長因子IGFBP-3胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1結(jié)合蛋白2結(jié)合蛋白3Angiopoietin-2血管生成素2LH賴氨酸羥化酶MCP-1(MCAF)單核細(xì)胞趨化蛋白1MIG/CXCL9趨化因子9

tPSA總前列腺特異性抗原fPSA游離前列腺特異性抗原NSE神經(jīng)元特異性烯醇化酶Free-0-hCG游離血清人絨毛膜促性腺激素EBantibodyEB病毒抗體HE4人附睪分泌蛋白4CA215癌抗原215CA242癌抗原242CA724癌抗原724CA50癌抗原50Cyfra21-1角蛋白19片段SCCA鱗狀細(xì)胞癌抗原九、內(nèi)分泌激素類：ACTHAGRPAmylin(ActiveorTotal)BDNFCNTFC-PeptideFSHGHGLP-1(Active)GlucagonIGF-1IGFBP-1胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1IGFBP-2胰島素樣生長因子IGFBP-3胰島素樣生長因子IGFBP-4胰島素樣生長因子IGFBP-5胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2結(jié)合蛋白3結(jié)合蛋白4結(jié)合蛋白5IGFBP-6IGFBP-7InsulinLeptinLH賴氨酸羥化酶Prolactin泌乳刺激素TSHGhrelin(Active)GIP(Total)PPPYY(Total)十、心血管因子類：Adiponectin脂聯(lián)素ApoAl載脂蛋白AIApoAlI載脂蛋白AlIApoB載脂蛋白/r