可樂、咖啡、茶葉中咖啡因的高效液相色譜分析

可樂、咖啡、茶葉中咖啡因的高效液相色譜分析一、目的要求二、基本原理三、儀器與試劑1.儀器高效液相色譜儀（帶紫外檢測器）。25μL平頭微量注射器。2.試劑

（1）甲醇（色譜純）；二次蒸餾水；氯仿（A.R）；1mol·L-1NaOH；NaCl(A.R)；Na2SO4(A.R);咖啡因（A.R）；可口可樂（1.25L瓶裝）；咖啡；茶葉。(2)1000μg·mL-1咖啡因標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(3)250.0μg·mL-1咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液四、實(shí)驗(yàn)步驟1.按操作說明書使色譜儀正常工作，色譜條件為：柱溫：室溫流動(dòng)相：甲醇/水=60/40（經(jīng)0.45μm濾膜過濾）流動(dòng)相流量：1.0mL/min檢測波長：275nm2.咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制：分別用吸量管吸取2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液（250.0μg·mL-1）于五只25mL容量瓶，用流動(dòng)相定容至刻度，濃度分別為20.0、40.0、60.0、80.0、100.00μg·mL-1。3.樣品處理如下將約100mL可口可樂置于250mL潔凈干燥的燒杯中,劇烈攪拌30min或用超聲波脫氣5min,以趕盡可口可樂中的二氧化碳。將樣品溶液分別進(jìn)行干過濾(即用漏斗、干濾紙過濾),棄去前過濾液,取后面的過濾液。吸取樣品濾液25.00mL于125mL分液漏斗中，加入1.0mL飽和NaCl溶液,1mL1mol·L-1NaOH溶液,然后用20mL氯仿分三次萃取(10mL、5mL、5mL)。將氯仿提取液分離后經(jīng)過裝有無水硫酸鈉小漏斗(在小漏斗的頸部放一團(tuán)脫脂棉,上面鋪一層無水硫酸鈉)脫水,過濾于25mL容量瓶中,最后用少量氯仿多次洗滌無水硫酸鈉小漏斗,將洗滌液合并至容量瓶中,定容至刻度。取上述溶液若干mL（通過實(shí)驗(yàn)確定）于25mL容量瓶，用流動(dòng)相定容至刻度。取該溶液20uL,重復(fù)兩次,要求兩次所得的咖啡因色譜峰面積基本一致,否則繼續(xù)進(jìn)樣,直至每次進(jìn)樣色譜峰面積基本一致。4.繪制工作曲線待液相色譜儀基線平直后,分別注入咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液20uL,重復(fù)兩次,要求兩次所得的咖啡因色譜峰面積基本一致,否則繼續(xù)進(jìn)樣,直至每次進(jìn)樣色譜峰面積基本一致。五、數(shù)據(jù)記錄標(biāo)準(zhǔn)系列號(hào)12345試樣咖啡因的濃度(μg·mL-1)20.040.060.080.0100.0咖啡因峰面積(mv·s)六、結(jié)果處理繪制峰面積與咖啡因質(zhì)量（或濃度、體積）關(guān)系的工作曲線。從工作曲線上查找并計(jì)算出試樣中咖啡因的含量。實(shí)驗(yàn)出勤預(yù)習(xí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)態(tài)度實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)結(jié)果書寫報(bào)告文明