第10章 甾體激素類藥物的分析-2-2013課件

藥物分析學(xué)（第十五章）甾體激素類藥物的分析（2）本節(jié)教師：韓海（博士/副教授)暨南大學(xué)藥學(xué)院Tel-mail:thanhaik@QQ:560118562013.11.11★★第二節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)1.物理常數(shù)2.化學(xué)鑒別:——母核和各種官能團(tuán)的反應(yīng)★呈色反應(yīng)、★官能團(tuán)反應(yīng)：沉淀反應(yīng)、鹵素反應(yīng)3.制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)4.★紫外分光光度法5.★★紅外分光光度法6.色譜法——TLC、HPLC物理常數(shù)與硫酸顯色反應(yīng)顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅絮狀↓灰潑尼松橙黃→藍(lán)綠炔雌醚橙紅黃綠↓紅色

炔雌醇橙紅黃綠絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄帶橙清特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)靈敏，通過(guò)形成的顏色或熒光的不同而互相區(qū)別，但操作條件不易掌握。某些甾體激素藥物與硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈色。如甲睪酮.雌性激素藥物常以硫酸—乙醇的呈色反應(yīng)來(lái)鑒別.例:Chp中雌二醇鑒別取本品約2ml，加硫酸2ml溶解，有黃綠色熒光，加三氯化鐵試液2滴呈草綠色，再加水稀釋，則變?yōu)榧t色?！铩铮ǘ┕倌軋F(tuán)的呈色反應(yīng)利用官能團(tuán)的呈色反應(yīng)可區(qū)別不同的藥物★★1.C17-α-醇酮基的呈色反應(yīng)C17-α-醇酮基有還原性，能與氧化劑四氮唑鹽反應(yīng)顯色。例:(Chp中醋酸潑尼松鑒別)醋酸潑尼松在堿性條件下與氯化三苯四氮唑試液反應(yīng)生成紅色。[討論]：1).本反應(yīng)亦可用于薄層色譜法鑒別甾體激素類藥物的顯色反應(yīng)。（如醋酸潑尼松片及眼膏、醋酸氟氫可的松軟膏等）2).該呈色反應(yīng)不僅能用做皮質(zhì)激素類藥物的鑒別和檢查(“其他甾體”的檢查)，也是該類藥物含量測(cè)定的依據(jù)。3).C17-α-醇酮基還可以和斐林試液、多倫試液發(fā)生反應(yīng)。其中亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)是黃體酮的靈敏、專屬的鑒別方法。在一定的條件下，黃體酮顯藍(lán)紫色，其他常用甾體激素均不顯藍(lán)紫色，而呈現(xiàn)淡橙色或不顯色?！?.酚羥基的呈色反應(yīng)C3為酚羥基的雌激素，能與重氮磺酸反應(yīng)生成紅色偶氮染料。JP(14)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進(jìn)行鑒別?！?/p>

6.有機(jī)鹵素反應(yīng)有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯Clˉ茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色鹵素在母核上：氧瓶燃燒法破壞如地塞米松磷酸鈉鹵素在側(cè)鏈上：加熱水解法破壞如丙酸倍氯他索制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn)[原理]1.甾醇、甾酮類藥物可與一些試劑反應(yīng)生成酯、肟、縮氨脲.測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。2.利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)的母體，測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。[特點(diǎn)]繁瑣費(fèi)時(shí)，但專屬性強(qiáng).目前仍為一些國(guó)家藥典采用。炔雌醇m.p.201℃黃體酮雙肟m.p.238℃苯丙酸諾龍縮氨基脲m.p.178~185℃分解丙酸睪丸素m.p.150~156℃★紫外分光光度法[原理]：具有C=C-C=O共軛系統(tǒng)，

△４-3-酮～240nm和C=C-C=C共軛系統(tǒng)，苯環(huán)（B帶：280nm，K帶：220nm）1.可用規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收度鑒別如:曲安西龍2.吸收度的比值法。如:丙酸倍氯米松△４-3-酮～240nm紅外分光光度法的優(yōu)勢(shì)1.對(duì)樣品無(wú)破壞,樣品用量較少

2.特征性極強(qiáng)、信息量豐富:每種化合物都有紅外吸收，從紅外光譜可以得到大量信息。官能團(tuán)區(qū)的吸收反映了化合物中官能團(tuán)的特征，而指紋區(qū)的吸收對(duì)于指認(rèn)分子提供了可靠的依據(jù)。紅外分光光度法的應(yīng)用各國(guó)藥典幾乎均采用紅外分光光度法鑒別甾體激素原料藥物，中國(guó)藥典中36種甾體激素原料藥物，其中33種采用該方法鑒別！鑒別方法:按規(guī)定錄制紅外光譜圖，要求供試品光譜圖與對(duì)照品光譜圖一致。Ⅰ.Ⅱ.δC-H

1500~1300cm-1CH3

2962cm-1，反對(duì)稱伸縮振動(dòng)

2872cm-1，對(duì)稱伸縮振動(dòng)

CH2

2926cm-1，反對(duì)稱伸縮振動(dòng)

2853cm-1，對(duì)稱伸縮振動(dòng)

2970～2850cm-11375cm-1處的吸收分叉，等高1460，1375cm-1同時(shí)有吸收伸縮振動(dòng)彎曲振動(dòng)2.此類藥物大部分含有C=C雙鍵＝C－H伸縮振動(dòng)頻率大于3000cm-1

（峰尖、弱）大約3040～3010cm-1

C＝C伸縮振動(dòng)頻率在1620～1585cm-1,（峰尖、中等）γCH（面外彎曲振動(dòng)頻率）與雙鍵上氫的數(shù)目，即取代情況有關(guān)。甾體激素藥物某些基團(tuán)的紅外特征頻率★★見(jiàn)書(shū)292-293頁(yè)表10-3炔雌醇的紅外吸收光譜結(jié)構(gòu)特征：苯環(huán)、酚羥基、C17–OHC17–乙炔基1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1616cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)亞甲基、角甲基吸收帶γCH苯環(huán)指紋區(qū)黃體酮[方法]：對(duì)照品法1.供試品點(diǎn)樣通常需做前處理（如有機(jī)溶劑提?。?，消除注射液、片劑及軟膏劑等輔料的干擾。2.要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。[顯色方法]：多用熒光顯色法或熒光淬滅法熒光顯色高效液相色譜法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別方法：對(duì)照品法一般在含量測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行鑒別.

要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。第三節(jié)、特殊雜質(zhì)檢查[必要性]：甾體激素藥物多由結(jié)構(gòu)改造來(lái)，可能帶來(lái)原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑、溶劑等。藥典規(guī)定檢查的重要項(xiàng)目有：

★（一）其他甾體（二）硒（三）有機(jī)溶劑殘留量★（四）游離磷酸鹽

此外，有些甾體藥物還規(guī)定其他檢查項(xiàng)目。Li/NH3C2H5OH（可能殘留）弱酸雌二醇－3－甲醚（可能殘留）苯丙酸諾龍的合成路線I（可能殘留）II（可能殘留）強(qiáng)酸（可能殘留）苯丙酰氯（可能殘留）HClIII（可能殘留）苯丙酸諾龍的合成路線II（一）其他甾體

[定義]：藥物中存在的具有甾體結(jié)構(gòu)且與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的其他化合物都稱為“其他甾體”。

具有互相不同的藥理作用！！有必要檢查[來(lái)源]：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物[特點(diǎn)]：（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似，多數(shù)為未知物質(zhì)分析方法必須具有一定分離能力其他甾體檢查法★（一）TLC檢查法（高低濃度對(duì)比法）使用最為普遍的甾體特殊雜質(zhì)檢查法采用供試品的稀釋溶液做對(duì)照，以對(duì)照溶液斑點(diǎn)顏色為參比來(lái)控制雜質(zhì)限量。中國(guó)藥典2005版36種甾體激素原料藥物，其中33種采用該方法檢查特殊雜質(zhì)！例：教材294頁(yè)醋酸潑尼松、炔雌醇的雜質(zhì)檢查

★[33種甾體激素藥物TLC色譜條件的特點(diǎn)總結(jié)]：

1.薄層板：大多采用硅膠G板，少數(shù)采用硅膠GF254或硅膠HF254。2.溶劑:氯仿-甲醇/甲醇/氯仿/丙酮3.展開(kāi)劑系統(tǒng)：首選不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶劑。（其他：苯/無(wú)水乙醇/二氯甲烷-甲醇-水/氯仿-甲醇等）4.顯色劑：首選堿性四氮唑藍(lán)試液。（其他：硫酸-乙醇/濃硫酸/10%磷鉬酸-乙醇）5.檢測(cè)法：紫外燈(254nm/365nm)/日光檢視。TLC判定方法

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色

供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于XX個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深?！叩蜐舛葘?duì)比法雌二醇雜質(zhì)檢查TLC圖特點(diǎn)：

（1）簡(jiǎn)便易行，不需特殊的儀器；（2）不需對(duì)照品；（3）要求雜質(zhì)斑點(diǎn)與主成分斑點(diǎn)的顏色相近且顯色靈敏度也接近。（4）不能控制全部雜質(zhì)的限量；也不能控制雜質(zhì)的總量自身對(duì)照（二）HPLC法[方法]：1.自身對(duì)照法（加/不加校正因子）采用供試品的稀釋溶液做對(duì)照，以對(duì)照溶液主峰面積為參比來(lái)控制雜質(zhì)限量。例：教材295頁(yè)黃體酮雜質(zhì)檢查為不加校正因子的自身對(duì)照法。2.主成分歸一化法（HPLC-UV法檢測(cè)靈敏度較低時(shí)）對(duì)照溶液——0.02mg/ml供試液——1mg/ml黃體酮中有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)1個(gè)，其面積不得大于對(duì)照液的主峰面積的3/4[甾體激素藥物HPLC色譜條件的特點(diǎn)總結(jié)]：1.色譜柱：十八烷基硅烷鍵和硅膠。2.流動(dòng)相：各種不同比例的甲醇-水混合溶劑。3.檢測(cè)器：紫外（214nm/254nm/281nm，230nm/288nm）4.判定方法:規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積HPLC法進(jìn)行藥物特殊雜質(zhì)檢查的特點(diǎn)

（1）需特殊的儀器；（2）不需對(duì)照品；（3）可以控制雜質(zhì)的總量；（4）雜質(zhì)與主成分測(cè)定的靈敏度可以不同。（用校正因子消除）（二）硒的檢查來(lái)源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫原理方法劇毒含硒物質(zhì)限量﹤0.01%（三）有機(jī)殘留溶劑的檢查[必要性]：甾體激素藥物在生產(chǎn)工藝中使用大量有機(jī)溶劑。（特別是甲醇和丙酮）測(cè)定法：GC法示例：地塞米松磷酸鈉有機(jī)殘留溶劑的檢查方法。（教材396頁(yè)）判定標(biāo)準(zhǔn)1.甲醇

不得超過(guò)0.3%（g/g）

2.丙酮不得超過(guò)0.5%（g/g）

內(nèi)標(biāo)法+校正因子定量!限量確定的原則▲藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求（ICH）規(guī)定

甲醇——第二類毒性溶劑——限量<0.3%（g/g）丙酮——第三類低毒性溶劑——

據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況確定限量（四）游離磷酸鹽的檢查凡甾體激素藥物的磷酸鹽均需檢查.ChP規(guī)定要檢查的藥物有:地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉[方法]:對(duì)照品法(標(biāo)準(zhǔn)磷酸鹽溶液對(duì)照)原理：方法：（對(duì)照液0.0035%KH2PO4）第四節(jié)、含量測(cè)定甾類藥物理化性質(zhì)與含量測(cè)定方法1.△4–3–酮基

①UV（240nm，E1%1cm>100）UV法含量測(cè)定②與羰基試劑（異煙肼）反應(yīng)異煙肼比色法2.

C17

–

α–

醇酮基（皮質(zhì)激素）還原性與氧化劑四氮唑鹽反應(yīng)顯色

四氮唑比色法3.甾體母核（特別是雌激素母核）可以以強(qiáng)酸的呈色Kober反應(yīng)比色法甾類藥物含量測(cè)定方法有：1.反應(yīng)比色法（異煙肼比色法、四氮唑比色法、Kober反應(yīng)比色法）2.紫外分光光度法3.高效液相色譜法4.柱前衍生化氣相色譜法、GC-MS法5.放射免疫分析法（FIA），ELISA技術(shù)一、★高效液相色譜法[必要性]：甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾。[優(yōu)點(diǎn)]：用樣量少，靈敏度高，分離效果好，專屬性強(qiáng)

ChP中：89種甾體激素原料和制劑，有43種采用RP-HPLC法（一般用內(nèi)標(biāo)法）含量測(cè)定，占該類藥物含量測(cè)定方法的48%，居首位。[實(shí)例]：教材397頁(yè)[特點(diǎn)總結(jié)]：1.分離模式:反相分配色譜2.固定相:十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)3.流動(dòng)相:甲醇和水的混合液(個(gè)別采用甲醇—水—乙醚、乙腈-水-乙丙醇、甲醇-四氫呋喃-水等溶劑系統(tǒng)，有時(shí)在流動(dòng)相中加入醋酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)pH值）4.紫外直接檢測(cè):(240nm或280nm附近)△4—3—酮基和苯環(huán)★二、紫外分光光度法1.皮質(zhì)激素、雄性激素、孕激素Δ4-3-酮基（C=C-C=O）共軛系統(tǒng)λmax=～240nm2.雌激素（具有苯環(huán)）苯環(huán)（C=C-C=C）共軛系統(tǒng)，λmax=～280nm（此吸收較弱）UV醋酸地塞米松[優(yōu)點(diǎn)]：準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，被廣泛用于原料和制劑的分析。原料、注射液稀釋成一定濃度后即可直接測(cè)定。但在片劑分析時(shí)需要預(yù)處理排除干擾。

（賦形劑在240nm附近有吸收，需先用一定溶劑提取、濾過(guò)。）Chp中收載的89種甾體激素原料和制劑25種用該法測(cè)定含量，占本類藥物分析的28%，僅次于HPLC，居第二位。但現(xiàn)在正在被HPLC取代中！實(shí)例1.原料藥:教材398頁(yè):炔雌醚2.片劑:教材398頁(yè):醋酸潑尼松龍片賦形劑在240nm附近有吸收，需先用乙醇提取、濾過(guò)。計(jì)算★★三、反應(yīng)比色法[方法介紹]:比色法:直接比色法——光度活性藥物

反應(yīng)比色法——非光度活性藥物弱、非光度活性藥物強(qiáng)光度活性藥物化學(xué)反應(yīng)[優(yōu)點(diǎn)]：1.適用于非光度活性藥物2.使待測(cè)組光譜位移，避免干擾，增加選擇性3.增加測(cè)定靈敏度甾體激素的反應(yīng)比色法異煙肼比色法、四氮唑比色法、Kober反應(yīng)比色法（一）、異煙肼比色法[原理]：HCl（縮合）在一定波長(zhǎng)下具有最大吸收★★四氮唑比色法

基本原理：腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α-醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲多為紅色或藍(lán)色。

formazan在一定波長(zhǎng)處進(jìn)行比色測(cè)定。

OH-[還原]反應(yīng)機(jī)理C17-α-醇酮基失去2個(gè)電子氧化為20-酮基-21醛基，在堿催化下，分子內(nèi)部重排。而四氮唑鹽得到2個(gè)電子，開(kāi)環(huán)形成甲而顯色。四氮唑鹽的種類1.氯化三苯四氮唑2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazoliumchlorid，TTC）其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲(λmax:480~490nm)紅四氮唑（redtetrazoline，RT）。2.藍(lán)四氮唑（bluetetrazoline，BT），即3，3’-二甲氧苯基-雙-4，4’-（3，5-二苯基）氯化四氮唑{3，3’-dianisole-bis[4，4’-（3，5-diphenyl）tetrazoliumchloride]}其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲，λmax～525nm。測(cè)定方法——對(duì)照品法ChPTTC（RT）

BPTTC（RT）USPBT40～45′暗實(shí)例：醋酸地塞米松磷酸鈉含量測(cè)定ChP方法供試液：精密量取本品5mL（約醋酸地塞米松25mg），置100mL量瓶中，加無(wú)水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。濾過(guò)，取續(xù)濾液為供試品溶液。對(duì)照液：精密稱取醋酸地塞米松磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品25mg，置100mL量瓶中，加無(wú)水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。測(cè)定法：精密量取上述溶液各1mL，分別置干燥具塞試管中，各精密加無(wú)水乙醇9mL與氯化三苯四氮唑試液1mL，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液1mL，搖勻，在25℃暗處放置40～50分鐘，照分光光度法，在485nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，計(jì)算。操作應(yīng)避光。水分影響反應(yīng)速度制造強(qiáng)堿性環(huán)境反應(yīng)過(guò)程、反應(yīng)產(chǎn)物怕光討論——各種因素的影響1.基團(tuán)的影響：C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16無(wú)論何種取代基ν↓2.溶劑、水分的影響含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→幾無(wú)反應(yīng)—無(wú)水乙醇醛→A↑—無(wú)醛無(wú)水乙醇3.堿的種類和加入順序的影響：反應(yīng)應(yīng)在強(qiáng)堿性（pH13.75）條件下進(jìn)行以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳.

皮質(zhì)激素和氫氧化四甲基銨長(zhǎng)時(shí)間（24h）接觸后，部分分解.加入順序：4.O2與光線的影響反應(yīng)過(guò)程反應(yīng)產(chǎn)物怕光→避光、快速O2影響顏色強(qiáng)度和穩(wěn)定性→隔絕空氣、快速、充N25.溫度與時(shí)間t℃↑→ν↑但t℃↑

→甲分解↑→%↓一般以室溫或30℃恒溫條件下顯色，易得重現(xiàn)性較好的結(jié)果。ChP25℃40～45′BP30℃1h特點(diǎn)：缺點(diǎn)影響因素太多，操作不易掌握。優(yōu)點(diǎn)專屬性很好。意義：測(cè)定結(jié)果能指示藥品的穩(wěn)定性（氧化及降解產(chǎn)物無(wú)此反應(yīng)）

廣泛應(yīng)用于皮質(zhì)激素的穩(wěn)定性研究?！锂悷熾卤壬╗反應(yīng)式]：具有兩個(gè)酮基的甾體激素黃體酮、氫化可的松可形成雙腙。[方法]：對(duì)照品法：暗45′實(shí)例：ChP：倍他米松倍他米松磷酸鈉倍他米松討論1.溶劑選擇：無(wú)水乙醇和無(wú)水甲醇好，其他溶劑受異煙肼鹽酸鹽溶解度影響不宜采用。甲醇穩(wěn)定性較好，呈色強(qiáng)度較高。但對(duì)植物油溶解度小。一般采用無(wú)水乙醇作為整個(gè)反應(yīng)的介質(zhì)。（倍他米松、倍他米松磷酸鈉等）2.酸的種類和濃度以及異煙肼的濃度：酸與異煙肼試劑的摩爾比為2:1時(shí)可獲得最大吸收度。酸度↑→異煙肼鹽↓酸度↓→A↓試液配制:取異煙肼75mg，加鹽酸0.1m1．加甲醇使溶解成100ml。鹽酸：0.0074mol/L（硫酸：0.0037mol/L醋酸：4.4mol/L）異煙肼：0.00365mol/L

3.水分、O2與光線的影響(1)水分增高吸收度降低，縮合物水解；可逆反應(yīng):含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓故儀器及試劑應(yīng)盡量避免水分(2)溫度升高，反應(yīng)加速。(3)在不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)，光與氧不影響反應(yīng)。（具塞容器）4.反應(yīng)的專屬性：反應(yīng)速度C3=O＞C17=O、C20=O

C11=O

不反應(yīng)室溫不到1h即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間放置或加熱后方可反應(yīng)完全本法對(duì)Δ4-3-酮基甾體具有一定的專屬性。KOBER反應(yīng)比色法[定義]：指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。原理：（兩步反應(yīng)）λmax=465λmax=515△△實(shí)線——第一步反應(yīng)

虛線……第二步反應(yīng)可能原理（了解）通過(guò)去羥基、重排及甲基由C13移到C17；然后被硫酸氧化形成具有較長(zhǎng)共軛雙鍵發(fā)色團(tuán)的產(chǎn)物又進(jìn)一步生成具有吸收光譜紅移發(fā)色團(tuán)的產(chǎn)物。λmax=515nm實(shí)例ChP復(fù)方炔諾酮滴丸中炔雌醇片的含量測(cè)定方法教材402頁(yè)缺點(diǎn)：1.第二步反應(yīng)難以徹底進(jìn)行，會(huì)出現(xiàn)雙色。

2.輔料，賦形劑干擾測(cè)定改進(jìn)鐵酚試劑法五、體內(nèi)甾體激素類藥物分析（了解）四、非水滴定——米非司酮Dopingcontrol濫用藥物檢測(cè)刺激劑麻醉劑β-阻斷劑利尿劑遮蔽劑合成類固醇及β2激動(dòng)劑肽類激素外源性內(nèi)源性1、甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應(yīng)的基團(tuán)

A.酚羥基

B.活潑次甲基

C.甲酮基

D.C17-α-醇酮基

E.酮基2、用異煙肼比色法測(cè)定甾體激素藥物含量時(shí)，其溶液的環(huán)境是

A．酸性

B．中性

C．強(qiáng)堿性

D．弱堿性

E．以上都不對(duì)3、可用于氫化可的松鑒別的試劑有

A．氨制硝酸銀

B．異煙肼

C．紅四氮唑

D．濃硫酸

E．重氮苯磺酸4、可用于甾體激體類藥物的測(cè)定方法有

A．高效液相色譜法

B．四氮唑鹽法

C．紫外分光光度法

D．