發(fā)酵產(chǎn)品-干擾素課件

發(fā)酵產(chǎn)品---干擾素

干擾素概述1

生產(chǎn)干擾素的菌種2

發(fā)酵工藝過程3發(fā)酵過程控制4分離純化過程5

干擾素？

干擾素是一種細胞因子，是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的第一病毒防御體系，具有廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止病毒在體內擴散、促進痊愈；調節(jié)免疫功能；抑制腫瘤細胞生長等作用。干擾素應用前景

重組人干擾素實現(xiàn)了干擾素在臨床上的廣泛應用，用于慢性乙型肝炎、丙型肝炎以及腎癌、黑色素瘤、血液系統(tǒng)疾病等的治療。目前，國內主要生物制藥企業(yè)正在積極研制長效重組人干擾素，重組人干擾素國內市場仍有廣闊的發(fā)展空間，預計到2015年我國重組人干擾素市場規(guī)模將達到48億元左右。

干擾素概述1

生產(chǎn)干擾素的菌種2

發(fā)酵工藝過程3發(fā)酵過程控制4分離純化過程5菌種的特性細胞形態(tài)：革蘭氏陰性，可運動，有莢膜，無芽孢，桿狀菌落特征：灰綠色半透明狀。菌落之間結構相同，具有黏稠性生化特性：菌株為蘇氨酸營養(yǎng)缺陷型，可以利用L-纈氨酸、DL-精氨酸和L-蘇氨酸作為碳源遺傳特性：細胞中攜帶pVG3質粒，對氨芐青霉素有抗性生產(chǎn)能力：具有生產(chǎn)干擾素a-2b的能力干擾素α-2b的發(fā)酵工藝過程：取保存工作種子批菌種，室溫融化搖瓶培養(yǎng)：30℃，pH7.0，250r/min，18±2h檢測：OD值和發(fā)酵液雜菌檢查。

1.接種：接入50L種子罐，接種量10%。

2.培養(yǎng)：30℃，pH7.0。

3.控制：級聯(lián)調節(jié)通氣量和攪拌轉速4.DO為30%，3～4h，OD>4.0。5.檢測：顯微鏡和LB培養(yǎng)基劃線檢查，控制雜菌。1.接種：通入300L培養(yǎng)基的發(fā)酵罐，接種量10%。2.控制：級聯(lián)調節(jié)通氣量和攪拌轉速。3.前4h：30℃，pH7.0，DO為30%。4.4h后：20℃，pH6.0，DO為60%，5～6.5h。5.終點控制：OD值達9.0±1.0，5℃冷卻水快速降溫至15℃以下。6.檢測：發(fā)酵液雜菌檢查連續(xù)流離心機：冷卻的發(fā)酵液，16000r/min離心收集。菌體保存：－20℃冰柜，不超過12個月。檢測：干擾素含量、菌體蛋白含量、菌體干燥失重、質粒結構一致性、質粒穩(wěn)定性。發(fā)酵中菌體生長與干擾素合成的關系培養(yǎng)基組成溶解氧溫度pH值發(fā)酵過程中泡沫的形成與控制(1)發(fā)酵中菌體生長與干擾素合成的關系

在假單胞桿菌的發(fā)酵生產(chǎn)中，菌體在培養(yǎng)1.5h分裂速度最快，到3.5h開始下降。而干擾素的迅速合成出現(xiàn)在3.5h之后，在4h達到最大，然后由于降解而迅速下降?？梢娫诎l(fā)酵生產(chǎn)工藝中，假單胞桿菌的生長和干擾素的生產(chǎn)基本處于不相關狀態(tài)。(2)培養(yǎng)基組成

種子培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分宜豐富些，尤其是氮源的含量應較高(即C/N低)。相反，對于發(fā)酵培養(yǎng)基，氮源含量應比種子培養(yǎng)基稍低(即C/N高)。(3)溶解氧

基因工程菌發(fā)酵要求培養(yǎng)液中有足夠的溶解氧，為了提高發(fā)酵罐的供氧能力，往往需要增大攪拌轉速，增加空氣流量，或通入純氧(4)溫度

對于采用溫度控制基因表達或質粒復制的基因工程菌。發(fā)酵過程一般分為生長和表達兩個階段。(6)發(fā)酵過程中泡沫的形成與控制

氣泡內的空氣有隔熱作用。造成培養(yǎng)及滅菌不徹底。泡沫多時會從排氣口甚至從軸封中溢出容易造成染菌。一般應通過機械攪拌和加大少量表面活性劑來消除泡沫。

干擾素概述1

生產(chǎn)干擾素的菌種2

發(fā)酵工藝過程3發(fā)酵過程控制4分離純化過程5菌體裂解裂解緩沖液：純化水配制，2℃～10℃（pH7.5）使用保護劑：EDTA，PMSF。破碎-20℃菌體：2厘米以下的碎塊攪拌：加裂解緩沖液，2℃～10℃凍融:細胞完全破裂，釋放干擾素。預處理-沉淀加絮凝劑聚乙烯亞胺:2℃～10℃，攪拌45min，對菌體碎片進行絮凝。加凝聚劑醋酸鈣溶液:2℃～10℃,攪拌15min，對菌體碎片、DNA等進行沉淀。初級分離鹽析:加硫酸銨，2℃～10℃，攪勻,靜置過夜。離心：連續(xù)流離心機，16000r/min保存：收集沉淀，粗干擾素，4℃保存。干擾素純化工藝過程溶解粗干擾素沉淀除雜質疏水層析無菌過濾分裝溶解粗干擾素用超純水配制純化緩沖液。在2～1O℃將粗干擾素倒入勻漿器中，加pH7.5磷酸緩沖液，勻漿，使之完全溶解。疏水層析

干擾素吸附在疏水層析柱中